用mRNA差异显示方法寻找小鼠胸腺基质细胞差异表达基因

目的寻找并初步分析小鼠胸腺基质细胞差异表达基因。方法来源于小鼠胸腺基质细胞系的两株亚克隆细胞 4 ( 5 )和 4 ( 12 ) ,前者可诱导前体 T细胞的进一步成熟 ,分别提取该两株细胞的总 RNA,利用 m RNA差异显示方法( DD- PCR)筛选 4 ( 5 )细胞特异表达的基因片段。结果得到了 17个 4 ( 5 )细胞特异表达的基因片段 ( expressed sequences tag,EST) ,其中 14个代表了尚未登录的小鼠新基因 ,另外 3个则分别与小鼠的 cytochrome C oxidase,Hsp65 ,Eps8基因高度同源。结论 DD- PCR方法是一种优良的寻找新基因的方法 ,小鼠胸腺基质细胞可能分泌或表达更多的新因子或分子。

动物细胞的微囊固定化培养

动物细胞培养的目的是多方面的,如:科研应用;作为病毒的宿主生产疫苗;获得细胞分泌的产物(抗体、干扰素、促红细胞生成素、tPA等)或细胞本身。尽管动物细胞培养的成本和复杂性要大于微生物的培养,但由于真核基因遗传及表达系统有着原核细胞无法替代的优越性:如蛋白质翻译后的加工过程,包括糖基化,二硫键形成,肽键剪切等,致使许多有天然活性的大分子只能借助于动物细胞表达。鉴于生物安全性原因,用动物细胞表达生产的临床应用生物制品更易被接受。 对生物制品日益迫切的需求是动物细胞大量培养技术发展的动力之一。

分析EST寻找小鼠胸腺基质细胞表达基因

网上生物信息量的膨胀导致新基因寻找手段的改变。借助mRNA差异显示技术获得的 17个表达序列标签(EST) ,通过对美国国家生物技术信息中心 (NCBI)的非冗余序列库 (NT)和小鼠EST库的BLAST同源检索 ,发现有 4个序列与已知基因高度同源 ,其中的DHPs和Eps8两个基因是首次在小鼠胸腺基质细胞中发现。它们可能与T细胞在胸腺内的发育分化有关。其它EST则为新基因。本结果也为下一步新基因的克隆及功能研究提供了有益的线索。

不同灭菌方法对脱乙酰几丁质性质的影响

实验表明，经１１５℃压力蒸汽灭菌后，脱乙酰几丁质的分子量、粘度及其与海藻酸钠交联形成的膜强度均变化较小；经γ射线照射或环氧乙烷灭菌者则变化较大。

mRNA差异显示技术的应用与改进

目的 :克隆和研究高低分化胆管癌间差异表达基因。方法 :对mRNA差异显示PCR(DDRT PCR)的一系列条件进行了探索和改进 ,建立了有效的DDRT PCR法。结果 :在高、低分化胆管癌差异分化基因的研究方面获得了满意的结果 ,共获得 9个有显著差异的cDNA片段 ,测序后进行同源序列比较 ,有一个与层粘连蛋白受体基因高度同源 ,还有一个可能是一个新基因的部分序列。结论 :通过对传统方法的改进 ,大大提高了工作效率 ,降低了实验成本和工作量并对相关问题进行了探讨 ,为进一步的研究奠定了基础。

产尿激酶原CHO工程细胞无血清培基的研究

在分析产尿激酶原CHO工程细胞对培基中氨基酸和糖利用的基础上,对DMEM:F12(1:1)进行初步优化。采用正交实验设计建立了无血清培基11G-SG-SFM和11G-SE-SFM。用11G-SG-SFM悬浮培养11G细胞,细胞增殖速率与含5％小牛血清DMEM:F12或CHO-S-SFM相当。用11G-SE-SFM培养11G细胞,细胞增殖缓慢,但有利于提高11G细胞表达pro-UK的水平,pro-UK的表达水平比含5％小牛血清的DMEM:F12培养提高80％左右。

不同分化胆管癌间差异表达基因的研究

目的 从基因表达水平上探讨不同分化胆管癌及其预后的机理,寻找与胆管癌分化发育相关的基因,从整体上分析不同分化胆管癌差异表达基因的情况,为胆管癌的早期诊断和治疗寻找一些Marker。方法 从高、低分化胆管癌组织中提取总RNA作为比较材料,采用差异显示PCR（DDRT-PCR）技术,将两种组织中差异表达的基因cDNA经PCR扩增,采用反向Northern blot鉴定,以排除假阳性,将有显著差异的PCR产物克隆到质粒载体上,测序并进行同源性比较。结果 得到了9个有显著差异的cDNA片段,其中一个序列分析的结果与LR（Laminin receptor）基因序列高度同源。另有一个序列与EST的大量序列同源。结论 通过对差异显示技术一系列条件的探索和改进,建立了有效的DDRT-PCR法,并在高、低分化胆管癌差异表达基因的研究方面获得了满意结果。

产尿激酶原CHO工程细胞无血清培基的研究

近年来随着无血清培基研究的日益深入及其应用的逐步推广,无血清培基(SFM)的优点已普遍地人们所认识。就SFM在生产生物活性蛋白的应用而言,SFM成分明确、质量一致、蛋白含量低,不仅有利于提高细胞产品生产的稳定性,使产品易于纯化,同时也可使不同细胞株能各自在最有利其生长或最有利于表达目的产物的环境中持续高密度培养。因而。

线虫脂肪模型研究

肥胖是一种脂肪酸积累增加的慢性疾病,采用研究模式生物的方法可以有助于探明肥胖产生的致病基因或致病相关因子,进而寻找可能的药物靶点.综述了国内外对线虫脂肪模型的研究进展,分析了线虫体内脂肪酸代谢途径的关键基因和核心通路.线虫脂肪代谢调节研究工作对人类肥胖症等代谢疾病的研究具有重要的提示作用,利用线虫脂肪模型研究降脂减肥药物具有广阔的应用前景.

黄鳝性逆转与性腺蛋白关系的分析

实验采用聚丙烯酰胺梯度胶电泳方法，对２６２尾黄鳝的性腺蛋白进行了分析，结果表明雌性黄鳝随着性腺的成熟性腺蛋白组分有所增多，相反雄性黄鳝随着性腺的成熟其性腺蛋白组分则有所减少；雌鱼性腺Ⅱ－Ⅲ期为１０－１２条区带，雄鱼性腺Ⅲ－Ⅵ期为１３－１０条区带。兼性期性腺蛋白组分明显增加为１５－１９Ｔ条区带，其增加的蛋白带为一组位于凝胶偏负极端、分子量相近的蛋白分子，性逆转时精巢的组建可能与这组蛋白的调节有关。性逆转从问时期卵巢开始不是一致的，其启动的时间可能受环境因素的调控；在兼性偏雌性性腺里的精原细胞可维持静止状态一段时期而不影响卵巢组织的正常发育，同样在兼性偏雄性的个体中其精巢可正常发育而不受残留的卵巢组织的影响。护巢亲鳝有全雄性和兼性偏雄性两种个体。

秀丽隐杆线虫在医药学领域的应用和进展

模式生物秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)对基础生物学研究贡献卓著。随着功能基因组时代的到来,线虫被视为可借以探明人类致病基因或致病相关因子,寻找可能的药物靶点的强大工具。这得益于线虫的丰富的可利用生物学信息,灵活多样的遗传学可操作性,简易的培养维持条件,尤其是其独特的生理特点适合于大规模化学药物的体内筛选或全基因组功能研究。本文将从新药研发的角度总结线虫的特点,与人类基因的同源性,讨论以线虫为技术平台的药物研发主要方法,以及成功案例,并探讨线虫在医药学领域的发展热点。

MTT比色法在微囊培养动物细胞计数中的应用

观察了3种已报道的脱色液在MTT比色法中的使用效果,实验证明它们均存在一定的局限性,不适于微囊细胞的脱色。改良的脱色液配方为N,N-二甲基甲酰胺-Triton-水(DTW),它不仅可迅速完成脱色,呈色稳定,不引起蛋白质沉淀,且无需破囊和洗涤细胞,从而较好地解决了微囊固定化细胞计数的难题。

秀丽隐杆线虫在固有免疫和病原菌致病机制研究领域的进展

脊椎动物抵抗微生物感染的免疫反应可归纳为两类：快速反应的固有免疫和延迟4—7d的适应性免疫。前者在进化上相当保守，低等生物到高等生物都存在，涉及复杂的信号调控途径和效应因子。可以借助研究低等模式动物来了解高等动物免疫机制。果蝇、斑马鱼、线虫、阿米巴盘基网柄菌和植物等逐渐为免疫学研究者们认同，利用这些模式生物各自的不同优点研究整体水平到分子水平上的病原菌-宿主反应机制。

不依赖CO_2的动物细胞培基pH缓冲体系及其应用

用由β－甘油磷酸钠、ＮａＯＨ、ＮａＨＣＯ＿３、Ｎ，Ｎ－羟乙基哌嗪乙烷磺酸和三羟甲基甘氨酸组成的ｐＨ缓冲系统代替动物细胞培基中传统的ＮａＨＣＯ＿３和ＣＯ＿２缓冲系统，可使培基在３７℃大气下维持恒定的ｐＨ，满足在大气开放条件下培养细胞的需要，有利于细胞在较高培养密度下的功能表达。

小鼠小脑颗粒神经元的原代培养与鉴定

本研究通过体外分离培养及鉴定原代小鼠小脑颗粒神经元（cerebellar granule neurons,CGNs）,为神经科学研究提供原代神经元细胞模型。取生后第7天的ICR乳鼠小脑,在解剖体视镜下剥离脑膜及血管,经刀片切碎、0.25%胰酶消化、移液器吹打、70μm尼龙滤网制备单细胞悬液,差速贴壁后接种于新鲜配置的培养基。倒置相差显微镜观察不同时间CGNs的形态变化。采用神经元的标记蛋白微管相关蛋白-2（microtubule associated protein 2,MAP2）,星形胶质细胞的标记蛋白胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）,小胶质细胞的标记蛋白（type 3 complement receptor,CR3/CD11b）进行免疫荧光检测培养的原代CGNs纯度。原代培养CGNs接种20 min后即贴壁良好,培养24 h后细胞伸出突起,培养第7天神经元成熟,形成丰富的轴突,树突和胞间突触连接。经免疫荧光鉴定,CGNs纯度可达95%以上。成功体外分离培养出高纯度的原代CGNs,可应用于CGNs的体外研究。

一个功能丰富的转录调控分子——下游调控元件拮抗分子

下游调控元件拮抗分子(downstream regulatory element antagonist modulator,DREAM)与钙衰蛋白(Calsenilin)和钾通道辅助亚基(potassium channel interacting protein 3,KCh IP3),三者同属于神经钙感受器蛋白(neuronal calcium sensor,NCS)家族,由同一基因编码,但亚细胞定位不同且执行不同功能,其中DREAM定位于细胞核,有4个EF手型结构域(EF-hand-like motifs)能与钙离子可逆结合,诱导蛋白空间结构变化,结合到多种基因的下游调控元件(downstream regulatory element,DRE)位点发挥基因转录调节作用。DREAM在中枢神经系统(central nervous system,CNS)尤其是小脑皮层中高表达,通过调控N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR)影响学习和记忆,也参与阿尔兹海默症发病、炎症反应、血栓形成。随着更多DREAM新功能的发现,其在CNS中的生物功能受到更多关注。本文回顾DREAM的发现历史,分析该蛋白的结构功能特点、组织分布,讨论了近些年来在DREAM入核的调控、以及特有的钙依赖的基因调控机理方面研究进展,重点关注了DREAM-强啡肽原(prodynorphin,PDYN)-强啡肽(dynorphin,DYN)通路调节慢性疼痛的可能机制。