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靶向MRP1基因的shRNA稳定逆转肺癌的多药耐药性 被引量:6
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作者 邵淑丽 崔婷婷 +6 位作者 贾红双 谢振丽 张伟伟 刘迁 陈薇薇 李爽 陈丽 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期2265-2269,共5页
目的:利用短发夹RNA(shRNA)表达载体逆转肺癌细胞株(A549/DDP)的多药耐药性。方法:构建2个多药耐药相关蛋白1(MRP1)基因特异的shRNA表达载体pSilencer 2.1-U6 neo-MRP1,稳定电转染A549/DDP细胞,实时荧光定量PCR分析MRP1 mRNA的表达,免... 目的:利用短发夹RNA(shRNA)表达载体逆转肺癌细胞株(A549/DDP)的多药耐药性。方法:构建2个多药耐药相关蛋白1(MRP1)基因特异的shRNA表达载体pSilencer 2.1-U6 neo-MRP1,稳定电转染A549/DDP细胞,实时荧光定量PCR分析MRP1 mRNA的表达,免疫荧光检测细胞MRP1蛋白的表达,流式细胞术检测细胞内罗丹明123(Rho123)的潴留情况。MTT法检测细胞活力。结果:成功构建了shRNA表达载体pSilencer 2.1-U6 neo-MRP1,稳定转染sh-MRP1-2.1-1和sh-MRP1-2.1-2后,A549/DDP细胞MRP1 mRNA和蛋白表达均显著降低,细胞内Rho123相对荧光强度由16.93%±0.58%分别升高至89.02%±0.59%和82.56%±1.37%;A549/DDP亲本细胞顺铂的IC50分别由(101.45±0.64)μmol/L降至(38.06±0.05)μmol/L和(53.72±0.36)μmol/L,5-氟尿嘧啶的IC50分别由(263.20±2.00)μmol/L降至(98.82±1.16)μmol/L和(141.81±0.49)μmol/L。结论:shRNA干扰表达载体pSilencer 2.1-U6 neo-RMP1能够稳定、持久地抑制MRP1基因,有效地逆转了A549/DDP细胞的多药耐药性。 展开更多
关键词 短发夹RNA 多药耐药 多药耐药相关蛋白1 RNA干扰 A549/DDP细胞
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靶向mrp1基因shRNA表达载体构建
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作者 邵淑丽 崔婷婷 +3 位作者 刘迁 陈丽 贾红双 吴敏 《现代肿瘤医学》 CAS 2010年第2期250-252,共3页
目的:构建靶向mrp1基因的shRNA表达载体。方法:根据mrp1基因序列设计并合成编码shRNA的DNA模板,将其定向克隆到psilencer2.1U6-neo质粒上,构建重组载体。经菌落PCR和DNA测序分析检测重组载体构建结果。结果:成功构建靶向mrp1基因shRNA... 目的:构建靶向mrp1基因的shRNA表达载体。方法:根据mrp1基因序列设计并合成编码shRNA的DNA模板,将其定向克隆到psilencer2.1U6-neo质粒上,构建重组载体。经菌落PCR和DNA测序分析检测重组载体构建结果。结果:成功构建靶向mrp1基因shRNA表达载体。结论:为进一步研究mrp1基因在肺癌多药耐药中的作用以及探索肺癌的基因治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 mrp1基因 psilencer2.1U6-neo质粒 SHRNA 表达载体
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