FBW7基因通过GSDME介导的焦亡增强紫杉醇对胰腺癌的抗肿瘤作用研究

背景与目的:胰腺癌是恶性程度极高的肿瘤,多数患者在就诊时已处于晚期,全身化疗是重要的治疗手段,但是化疗耐药给临床治疗带来很多困扰。紫杉醇作为常用的化疗药物可以诱导肿瘤细胞发生凋亡,含F-框WD重复域蛋白7(F-box and WD repeat domain containing 7,FBW7)基因是一种抑癌基因,该基因的功能丧失会导致肿瘤发生、发展。研究表明,FBW7基因具有促进肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤增殖的作用。此外,该基因还被证实可以促进凋亡和通过铁死亡方式增加化疗药物的效果。焦亡是一种由焦孔素(gasdermin,GSDM)蛋白介导的细胞程序性死亡模式,这种细胞死亡往往还伴有炎症反应。本研究旨在探讨FBW7基因是否可以通过焦亡促进紫杉醇发挥抗肿瘤作用。方法:采用慢病毒转染构建FBW7过表达的PANC-1细胞株,采用免疫组织化学法检测临床标本中FBW7和GSDME基因表达的相关性,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测mRNA表达和蛋白质水平。光镜下观察细胞经紫杉醇处理后的形态变化,采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测紫杉醇对细胞活力的影响,采用流式细胞术、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放实验检测紫杉醇对肿瘤细胞的影响。Western blot检测经紫杉醇处理后肿瘤细胞中caspase-3和GSDME的活化情况。结果:RTFQPCR和Western blot检测结果表明,FBW7基因过表达可增加GSDME的表达。免疫组织化学检测结果表明,在体内FBW7和GSDME基因表达呈正相关。流式细胞术和LDH释放实验检测结果显示,FBW7过表达的胰腺癌细胞系PANC-1系经过紫杉醇药物刺激后,细胞死亡的水平较空载体(empty vector,EV)组显著增加。光镜下可观察到具有焦亡表现的FBW7过表达的PANC-1细胞株显著多于EV组细胞。CCK-8实验结果显示,FBW7过表达的细胞株在紫杉醇处理后细胞活性显著低于EV组细胞。Western blot检测结果显示,紫杉醇处理胰腺癌细胞系PANC-1后,FBW7过表达细胞株的活化caspase-3(activecaspase-3)和GSDME-NT蛋白水平增加,证明其有更加明显的活化。FBW7基因可以通过caspase-3/GSDME信号转导通路诱导的细胞焦亡增加PANC-1细胞对紫杉醇的敏感性。结论:FBW7可以通过上调GSDME的表达,增加胰腺癌细胞对紫杉醇诱导的细胞焦亡从而增加其对紫杉醇的敏感性,这种作用可能是通过caspase-3/GSDME信号转导通路实现的。

ADAMTS9基因联合去甲氧基姜黄素对肝癌细胞侵袭迁移及PI3K/PTEN/AKT信号的影响

目的探讨过表达带有血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解联蛋白金属蛋白酶(ADAMTS)9基因或去甲氧基姜黄素(DMC)单独或联合对肝癌细胞侵袭迁移及磷脂酰肌醇3-激酶/第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白/蛋白激酶B(PI3K/PTEN/AKT)信号的影响。方法 Western印迹检测肝癌(HepG2)、MHCC 97-L和MHCC97-H细胞中ADAMTS9的蛋白表达。将MHCC97-H细胞分为对照组、pcDNA3.1-ADAMTS9组、DMC组和pcDNA3.1-ADAMTS9+DMC组4个处理组,其中pcDNA3.1-ADAMTS9的转染参照LipofectamineTM 2000转染说明,收集处理48 h的细胞,CCK8法、Transwell小室分别检测细胞活力及侵袭和迁移能力。Western印迹检测ADAMTS9、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、PI3K、PTEN和p-AKT的蛋白表达。结果肝癌HepG2、MHCC97-L和MHCC97-H细胞中ADAMTS9表达均有不同程度的降低,与正常肝细胞HL-7702比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。pcDNA3.1-ADAMTS9组DAMTS9的蛋白表达显著高于对照组(P<0.05)。pcDNA3.1-ADAMTS9组和DMC组细胞活力、侵袭和迁移能力及PCNA、MMP-2、MMP-9、PI3K和p-AKT的蛋白表达均显著低于对照组,PTEN蛋白表达显著高于对照组(P<0.05),而pcDNA3.1-ADAMTS9+DMC组细胞活力、侵袭和迁移能力及PCNA、MMP-2、MMP-9、PI3K和p-AKT的蛋白表达均显著低于pcDNA3.1-ADAMTS9组和DMC组,PTEN蛋白表达显著高于pcDNA3.1-ADAMTS9组和DMC组(P<0.05)。结论过表达ADAMTS9及DMC均可抑制肝癌细胞活力、侵袭和迁移能力,两者联用对细胞抑制作用更明显,机制可能与下调PCNA、MMP-2和MMP-9及PI3K/PTEN/AKT信号通路有关。

PBX3基因调控p38MAPK信号对肝癌细胞生长及5-氟尿嘧啶化疗敏感性的影响

目的探讨前B细胞白血病同源盒基因(PBX)3基因对肝癌细胞活力、凋亡及5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗敏感性的影响及机制。方法以人正常肝细胞HL-7702为对照细胞,Western印迹法检测肝癌Huh7、HepG2、MHCC97H和SMMC7721细胞中PBX3的蛋白表达。以LipofectamineTM2000为载体,参照其转染说明将设计合成的PBX3的特异性siRNA(si-PBX3组)及阴性对照siRNA(NC组)转染SMMC7721细胞,仅加入脂质体的为空白对照组,Western印迹检测转染后的细胞PBX3的蛋白表达。SMMC7721细胞分为NC组、si-PBX3组、5-FU组和si-PBX3+5-FU组,细胞处理48 h,噻唑蓝(MTT)及流式细胞术分别检测4组细胞活力和凋亡率。Western印迹检测细胞增殖核抗原(PCNA)、Bax、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和p-p38MAPK的蛋白表达。结果 PBX3在肝癌细胞中的蛋白表达均显著高于在HL-7702细胞(P<0.05)。与空白对照组相比,si-PBX3组细胞中PBX3蛋白表达显著降低(P<0.05)。与NC组相比,si-PBX3组和5-FU组细胞活力及p-p38MAPK、PCNA蛋白表达水平均显著降低,而细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);si-PBX3+5-FU组细胞活力及PCNA和p-p38MAPK蛋白表达均显著低于si-PBX3组和5-FU组,细胞凋亡率及Bax的蛋白表达均显著高于si-PBX3组和5-FU组(P<0.05)。结论抑制PBX3基因表达可降低肝癌细胞活力,诱导细胞凋亡,增强肝癌5-FU化疗敏感性,机制可能与下调p38MAPK信号通路有关。

胆囊Rosai-Dorfman病1例

罗道病（Rosai-dorfman，RDD）是一种原因不明的罕见疾病，表现为淋巴结内组织细胞增生，多合并有淋巴结肿大。发生在淋巴结外者非常罕见，现将本院肝胆外科收治的1例胆囊RDD病患者情况报道如下。女性患者，73岁，主因查体发现胆囊肿物于2015年10月入本院。增强CT：胆囊区可见软组织肿块影，内可见高密度结石影，增强扫描病变呈持续强化，腹腔及腹膜后未见肿大淋巴结。

350例胰十二指肠切除术后并发症的相关危险因素分析

目的分析胰十二指肠切除术(PD)后并发症的相关危险因素。方法回顾性分析2010年1月-2013年12月在河北医科大学第四医院接受PD的350例患者临床资料,选取13个临床因素(年龄、性别、重要器官系统合并症、既往腹部手术史、血清白蛋白、血清总胆红素、血清谷丙转氨酶、糖类抗原199、手术时间、术中输血量、病灶部位、病灶直径、主胰管直径),分析其与术后并发症的相关性。采用Logistic回归分析筛选出与术后并发症相关的危险因素。结果单因素分析结果表明,年龄、重要器官系统合并症、术中输血量、病灶部位及主胰管直径是影响PD后并发症发生的危险因素(P<0.05);多因素分析结果表明,术后并发症独立危险因素为术中输血量、病灶部位及主胰管直径;术后胰瘘的独立危险因素为:主胰管直径;出血的独立危险因素为:血清总胆红素水平;术后感染的独立危险因素为:年龄、输血量、主胰管直径(P<0.05)。结论输血量、病灶部位及主胰管直径是影响PD后并发症的相关危险因素。

胆囊切除术对Oddi括约肌功能临床影响的研究进展

胆囊切除术后胆囊和Oddi括约肌原有的协调作用丧失,导致Oddi括约肌功能障碍、运动节律和收缩幅度发生改变,进而使胆管扩张和胆汁排泄节律紊乱,引起胆源性腹痛、胃肠道功能紊乱、继发胆管结石及胆囊切除术后综合征等一系列症状。现就胆囊切除术对Oddi括约肌功能的影响做一简要综述。

Bmi1、Snail和YKL-40在胆管癌中的表达及与肿瘤转移的相关性

探究B淋巴瘤Mo-MLV插入蛋白1(Bmi1)、Snail和YKL-40在胆管癌(CCA)中的表达及与肿瘤转移的相关性。2013年1月—2015年1月,CCA患者49例及25例健康者。免疫组化染色检测Bmi1和Snail蛋白水平,ELISA检测血清中YKL-40的水平。分析Bmi1、Snail和YKL-40与CCA病理特点和转移的关系。结果显示,Bmi1在CCA组织中的阳性率(79.59%,39/49)显著高于癌旁组织(20.4%,10/49)(P<0.05)。Snail在CCA组织中的阳性率(81.6%,40/49)显著高于癌旁组织(12.2%,6/49)(P<0.05)。CCA患者血清中YKL-40的水平(128.31±35.62)μg/L显著高于对照组(69.35±15.68)μg/L(P<0.05)。性别、年龄、肿瘤大小、神经累犯和分化程度对CCA组织中Bim1、Snail和血清中YKL-40的影响不大(P>0.05),伴淋巴和其他部位转移的患者的CCA组织中Bim1、Snail和血清中YKL-40水平显著高于未出现转移患者(P<0.05)。结果表明,Bmi1、Snail和YKL-40在CCA中过表达,高水平的Bmi1、Snail和YKL-40与CCA患者的肿瘤转移有关。

Bmi1和METTL3在胆管癌中的临床意义及与肿瘤转移的关系

目的探究B淋巴瘤Mo-MLV插入蛋白1(B lymphoma Mo-MLV insertion region 1,Bmi1)和甲基转移酶3(methyltransferase 3,METTL3)在胆管癌(cholangiocarcinoma,CCA)中的临床意义及与肿瘤转移的关系。方法通过生物信息学方法分析Bmi1和METTL3在CCA中的表达特点。随机选择2013年1月至2015年1月间的CCA患者45例,收集CCA组织和癌旁组织。通过免疫组化染色检测Bmi1和METTL3蛋白水平。分析Bmi1和METTL3与CCA病理特点和转移的关系。结果在TCGA数据库中,CCA组织中Bmi1和METTL3的水平显著高于正常组织。Bmi1在CCA组织中的阳性率(80.00%)显著高于癌旁组织(17.78%)(P<0.05)。METTL3在CCA组织中的阳性率(82.22%)显著高于癌旁组织(22.22%)。性别、年龄、肿瘤大小、神经累犯和分化程度对CCA组织中Bim1的影响不大(P>0.05),出现转移的患者的CCA组织中Bim1水平显著高于未出现转移的患者(P<0.05)。性别、年龄、肿瘤大小对CCA组织中METTL3的影响不大(P>0.05),神经累犯、低分化程度和出现转移的患者的CCA组织中METTL3水平显著升高(P<0.05)。结论Bmi1和METTL3在CCA中过表达,METTL3可能参与CCA的分期、分化和神经累犯有关,并且高水平的Bmi1和METTL3均与CCA的转移有关。

miR-194-5p和E-cadherin在胆管细胞癌中的表达及临床意义

目的:检测胆管细胞癌中微小RNA-194-5p(miR-194-5p)和上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)的表达,分析其临床意义及相关性。方法:选择胆管细胞癌49例作为观察组,选择正常胆管上皮组织49例作为对照组。应用实时荧光定量PCR法(qPCR)检测两组中miR-194-5p的表达,应用免疫组化法检测观察组中E-cadherin和神经型钙黏蛋白(N-cadherin)的表达。建立胆管癌细胞系的空白对照组、空载体转染组和miR-194-5p转染组,采用Western Blot法检测E-cadherin和N-cadherin的表达。结果:胆管细胞癌中miR-194-5p的表达明显低于对照组,miR-194-5p在不同肿物最大径、神经累犯、分化程度、转移及脉管癌栓的分组中差异有统计学意义。生存分析显示miR-194-5p低表达者生存时间短。miR-194-5p与E-cadherin具有正相关性(r=0.68,P=0.014),miR-194-5p与N-cadherin具有负相关性(r=-0.62,P=0.013)。与空白对照组和空载体转染组相比,miR-194-5p转染组E-cadherin的表达升高,N-cadherin的表达下降。结论:miR-194-5p在胆管细胞癌中低表达,与病变发展及生物学行为有关。miR-194-5p与E-cadherin具有正向协同作用,对调节细胞黏附有一定价值。miR-194-5p可能是胆管细胞癌独立的预后因子。

炎性反应参数评估壶腹癌预后生存的研究进展

壶腹癌作为一种罕见的消化道恶性肿瘤。相对于其他壶腹周围恶性肿瘤,其预后生存明显较好,但部分壶腹癌患者预后疗效仍不尽人意。研究证实全身炎性反应与肿瘤预后疗效密切相关,并且肿瘤微环境对肿瘤的进展和预后生存具有至关重要的作用。近年来,炎性反应参数及相关预测模型成为预测壶腹癌预后生存的热点,并已被证实具有一定的预测价值。本文就炎性反应参数与壶腹癌预后相关性及未来可能的研究进展进行概述。

JAK2/STAT3信号通路在肝细胞性肝癌中表达及意义

目的:探讨JAK2/STAT3信号通路在人肝细胞性肝癌(HCC)组织中的表达以及其意义。方法:用免疫组化法和Western blot法检测75例HCC组织及其相应的癌旁组织JAK2与STAT3蛋白的表达,分析两者与HCC患者病理特征及预后的关系。结果:JAK2与STAT3蛋白在HCC组织中的阳性表达率及表达量均高于相应的癌旁组织(62.7%vs.5.3%,69.3%vs.9.3%;均P<0.05);JAK2与STAT3蛋白在HCC组织中的表达呈明显正相关(r=0.383,P<0.01)。JAK2和STAT3蛋白的表达与肝硬化、门静脉癌栓、肿瘤分化程度、临床分期明显有关(均P<0.05)。生存分析显示,JAK2与STAT3蛋白高表达患者的生存率及生存期均明显低于各自的低表达患者(χ2=13.591;χ2=6.842,均P<0.05);Cox比例风险回归模型分析表明,JAK2与STAT3蛋白以及门静脉癌栓、肿瘤分化程度、临床分期均为影响HCC预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论:JAK2/STAT3信号通路在HCC组织中活性增高,且其活性高低与HCC患者预后密切相关。

环状RNA-EIF3I对肝细胞癌生长转移的影响及机制研究

目的探讨环状RNA-EIF3I(circ-EIF3I)对肝细胞癌(HCC)生长转移的影响及其可能作用机制。方法选取2014年5月至2015年10月河北医科大学第四医院收治的39例HCC患者为研究对象,其中男性29例,女性10例,年龄(62.2±5.6)岁。术中获取部分HCC组织与癌旁组织,用荧光定量聚合酶链反应或蛋白质印迹法分别检测二者circ-EIF3I和磷酸甘油酸激酶1(PGK1)的表达量;利用小分子RNA干扰和基因过表达实验调节其在Hep3B、Huh-7肝癌细胞中的表达,然后以噻唑兰细胞活力实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力,最后以双荧光素酶报告实验检测靶向关系。结果与癌旁组织比较,HCC组织中circ-EIF3I[(4.32±0.62)比(1.24±0.59)]和PGK1[(2.69±0.19)比(1.00±0.07)]的相对表达量升高,差异有统计学意义(均P<0.05)。与阴性对照组比较,circ-EIF3I小分子干扰RNA组细胞活力降低[Hep3B:(55.3±7.5)%比(100.0±9.2)%;Huh-7:(42.7±6.0)%比(100.0±5.6)%],迁移细胞数减少[Hep3B:(71.0±10.0)比(130.0±15.0)个;Huh-7:(50.0±8.5)比(125.0±10.0)个],侵袭细胞数亦减少[Hep3B:(52.0±7.0)比(105.0±13.0)个;Huh-7:(60.0±8.0)比(144.0±11.0)个],差异均有统计学意义(均P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实circ-EIF3I可靶向结合miR-149-5p/miR-1271-5p,miR-149-5p/miR-1271-5p可靶向结合PGK1;PGK1过表达可明显逆转敲低circ-EIF3I对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结论敲低circ-EIF3I可通过调控miR-149-5p/miR-1271-5p/PGK1分子轴从而抑制HCC细胞增殖、迁移及侵袭。