胰蛋白酶交联聚体的制备及性质研究

交联酶聚体(CLEA)是一种新型的无载体固定化技术.以胰蛋白酶为模型体系,系统地研究了CLEA技术的制备工艺、应用条件、稳定性及结构形貌.(1)在制备工艺中考察了各步骤对CLEA酶活保留的影响,重点分析了沉淀剂浓度、类型的影响,结果表明100%乙醇是较为理想的沉淀剂;(2)在应用条件确定中测定CLEA的最适催化温度为70℃,最适催化pH为9.0,并解释了温度-活性、pH-活性曲线的漂移现象;(3)稳定性研究结果表明CLEA技术大幅提高了胰蛋白酶的热稳定性、溶剂稳定性,且无酶泄漏;(4)在形貌表征中分别利用扫描电子显微镜、光学显微镜和激光粒度分析对CLEA的微观结构进行了多尺度研究,着重讨论了其独特结构与优良特性间的关系.本文所得结论为胰蛋白酶CLEA的应用提供基础数据,并为CLEA技术应用于其它酶种提供参考。

螺共轭效应及其应用

螺共轭术语是1967年由Simmons和Fukunaga首次提出的,由于其特殊的立体电子效应而引起了科学家们的广泛关注.综述了40年来有关螺共轭的理论发展以及在发光材料、光致变色材料、非线性光学材料、螺环染料、有机导体等方面的研究现状,展望了螺共轭效应的应用前景,并提出了一些新的设想.

反相高效液相色谱与质谱联用分析合成七肽的消旋产物

采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)与质谱(MS)联用技术对固相法化学合成七肽(H2N-PFNSLAI-COOH,M r 760.9)时出现的消旋产物进行了分析。根据弱疏水性合成七肽粗品特性,提出了充分利用吸附和分配双重保留机制的“早期吸附”概念,以此优化色谱条件得到4个峰形良好的色谱峰;质谱分析表明:4谱峰具有相同的m/z761.5[M+H]+值,对每一消旋产物进行在线多肽测序,并利用串联质谱(MSn)谱图叠加的方法,得到b轴和y轴两套片段信息,成功确定了合成七肽的4个消旋产物。

多级质谱法测定Axinastatin 1环肽序列及其断裂机理研究

对具有抗癌活性的海洋环肽Axinastatin 1进行化学合成.采用多级质谱法对合成环肽进行序列测定.线性前体测序依据bx-yz断裂路径,在同一张MS2谱中利用b和y离子所提供序列信息的互补来实现.环肽测序依据bx→bx-1断裂路径,每一级MS由b离子的C端碰撞掉一个氨基酸残基直到MS6,得到2套b离子,根据它们所提供序列信息的互补可准确测定环肽序列并推断其环结构,同时观察到b离子重排现象.讨论了上述断裂与重排的路径和机理,并利用半经验量子化学PM3和AM1两种算法计算了碎片的生成焓,验证了路径的合理性.由离子b5PN的生成焓偏高和其重排间的联系尝试提出过渡结构假设.

N-(-3’-氨基4’-溴代)苯甲酰-2-甲基-5-溴代苯胺的合成

以 4 溴甲苯为初始原料 ,经过氧化 ,硝化 ,缩合 ,还原反应 ,制成有机颜料中间体N ( 3’ 氨基 4’ 溴代 )苯甲酰 2 甲基 5 溴代苯胺。对影响反应的各种因素进行了讨论 ,产品总收率为 5 7 8% .

禁食对小鼠下丘脑磷酸化蛋白质组的影响

本研究旨在通过干预小鼠进食,探讨对小鼠下丘脑中蛋白质磷酸化修饰和相关信号通路的影响,为完善蛋白磷酸化调控网络提供有价值的信息.将实验小鼠平均分为3组,分别为对照组(con)、禁食组(D2)和禁食后恢复组(DR),每组小鼠数量为3只.在48 h内,con组正常提供饲料,D2组不提供饲料,DR组前44 h不提供饲料、后4 h提供饲料.同时解剖3组小鼠并提取下丘脑组织,提取、纯化和酶解下丘脑组织的蛋白质,并采用二氧化钛富集分离技术富集磷酸化肽段,运用高通量液相色谱-质谱联用进行检测,以鉴定样品中的磷酸化蛋白质组.利用非标记定量方法筛选差异表达的磷酸化蛋白以及位点,对鉴定数据进行GO富集和KEGG通路分析,并探究磷酸化蛋白间的相互作用关系.结果显示,共鉴定到4810个磷酸化蛋白质,对应于14259个磷酸化位点发生了变化.采用数学统计方法分析,成功确认小鼠下丘脑中有681个磷酸化蛋白差异显著,观察到这些差异蛋白与蛋白结合、激酶行为、转运、轴突生成等分子活动和生物学过程有关,并富集到了MAPK、细胞内噬和环磷酸腺苷信号通路等11个主要的信号通路.这说明禁食会对小鼠下丘脑中多种蛋白质的磷酸化修饰水平产生显著的影响,为完善小鼠下丘脑磷酸化信号调控网络提供了有价值的信息.

小鼠垂体瘤细胞冷暴露后蛋白质甲基化修饰分析

目的:研究小鼠垂体瘤细胞(mouse pituitary tumor cell, AtT20)冷暴露后蛋白质甲基化的变化,以及高效富集和大规模鉴定AtT20细胞的甲基化肽。方法:使用胰蛋白酶和肽N-糖苷酶F(peptide N-glycosidase F,PNGase F)消化蛋白质,利用亲水相互作用色谱(hydrophilic interaction liquid chromatography, HILIC)尖端富集甲基化肽,最后利用质谱法对甲基化肽进行整体分析;通过PhosphoSitePlus?数据库比对新的甲基化位点和蛋白,利用DAVID数据库进行GO功能富集和KEGG通路富集分析,最后对两组细胞所得的甲基化肽和甲基化位点进行差异分析。结果:共鉴定到55个甲基化蛋白和83个甲基化位点,其中78.3%的甲基化位点是未被报道过的;鉴定到的甲基化蛋白主要分布在核染色体、核小体和细胞核中,参与了基因沉默的调控、RNA剪接和mRNA加工等生物过程;KEGG通路富集表明这些蛋白与中性粒细胞胞外陷阱形成、酒精中毒和系统性红斑狼疮等相关。甲基化肽和甲基化位点差异分析显示有7条显著变化的甲基化肽和2个显著变化的位点。结论:AtT20细胞短期冷暴露后蛋白质甲基化变化不显著,首次对AtT20细胞进行全面甲基化蛋白质鉴定,发现了多个未被报道过的甲基化蛋白质和甲基化位点,以期为AtT20细胞的研究提供理论参考。

基于质谱技术的神经肽研究进展

神经肽是一类重要的内源活性物质,在神经系统中发挥重要的作用,并连接大脑和其他神经器官。基于质谱技术的神经肽组学研究旨在对神经肽进行大规模研究,在分子水平上得到重要信息,进一步加深对神经系统调控机制以及神经疾病致病机理的理解。文中综述了利用质谱技术进行神经肽研究的基本策略,包括样品处理、定性定量方法以及质谱成像等研究进展。

高通量质谱法用于小鼠脑部神经肽的鉴定

神经肽在参与调控人体各种生理功能上发挥着重要的作用,如痛觉、睡眠、情绪、学习与记忆等生理活动都受到神经肽的影响。神经肽主要存在于机体的神经组织内,其他体液和器官中也有少量的分布。目前对全脑组织神经肽高通量鉴定的研究仍不足,高通量检测这些神经肽对了解神经肽的组成和功能具有重要的意义。本研究通过对小鼠全脑组织内源性肽段的萃取,运用液相串联质谱(LC-MS/MS)技术对全脑组织的神经肽进行检测,共鉴定到1 830条内源性肽段和99条预测神经肽肽段。这些内源性肽段的鉴定在疾病的治疗和机制研究以及药物的研发方面提供了参考价值,也为研究新的神经肽及其功能奠定了基础。

高通量质谱法用于小鼠器官内源性肽的鉴定

内源性肽以细胞因子、生长激素、激素肽等形式在人体的内分泌、神经、细胞生长和生殖各个领域发挥功能。神经肽是一种内源性肽,与痛觉、睡眠、情绪、学习与记忆等生理活动相关,不但存在于脑部神经细胞,也存在于其他体液和器官内并发挥重要作用。目前对器官内源性肽的研究仍不足,尤其是其中的神经肽。文中应用液质联用串联质谱高通量鉴定胰腺、心脏、肝脏和肾脏中内源性肽的分布以及神经肽的种类。鉴定结果显示,在肝脏中内源性肽和神经肽的数目最多,而胰腺中最少;所鉴定到的内源性肽具有器官特异性,在4个器官中分别呈现不同的动态分布;4个器官中神经肽的LPV(最长肽变异体)数目差异较大,而且基因家族的分布也各不相同,比如胰腺中的神经肽多属于Glucagon家族,心脏中的神经肽分别属于ACBD7、Granins、PEBP等几个家族。鉴定结果将为疾病的机制研究和治疗药物的研发提供参考。