基于缺氧诱导因子1α探讨黄芪鳖甲丸治疗膝关节骨性关节炎的作用机制

目的观察黄芪鳖甲丸对膝关节骨性关节炎(KOA)大鼠关节软骨的相关病理改变及相关蛋白在缺氧诱导因子1α(HIF-1α信号通路的表达。方法选取60只SD大鼠随机分为假手术组(10只)和造模组(50只)。假手术组保留大鼠卵巢,造模组在切除大鼠卵巢8周后进行关节腔注射碘乙酸钠1次,然后将造模组分为模型组、塞来昔布组、黄芪鳖甲丸高剂量组、黄芪鳖甲丸中剂量组及黄芪鳖甲丸低剂量组,每组10只。各给药组大鼠药物持续干预4周。在末次给药后检测大鼠血清雌二醇(E2)水平、关节灌洗液的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量,并测量大鼠膝关节横径,观察软骨的外观及病理变化,使用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠软骨的蛋白表达。结果黄芪鳖甲丸各剂量组大鼠膝关节横径、关节灌洗液IL-1β、TNF-α水平均显著少于模型组(P<0.05);黄芪鳖甲丸高、中剂量组大鼠血清E2水平高于模型组(P<0.05)。大体观察黄芪鳖甲丸高剂量组大鼠膝关节软骨表面较模型组光滑,且伴有光泽,缺损不明显;中剂量组大鼠膝关节软骨的中部稍有损伤,有血管增生。镜下观察黄芪鳖甲丸高、中剂量组大鼠膝关节软骨表层光滑,软骨细胞排列规整,细胞形态未见异常,潮线完整。黄芪鳖甲丸各剂量组大鼠软骨光镜软骨检测评价标准(Mankin’s)评分、软骨HIF-1α及基质金属蛋白酶-1(MMP-1)黄染颗粒光密度值(IOD)、软骨HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达量均显著低于模型组(P<0.05),黄芪鳖甲丸高剂量组大鼠软骨中葡萄糖载体-1(Glut-1)、MMP-1蛋白表达量低于模型组(P<0.05)。结论黄芪鳖甲丸降低软骨组织损伤及炎症程度,其作用可能与HIF-1α调控Glut-1、VEGF、MMP-1的表达有关。

穿心莲酸对动脉粥样硬化ApoE^(−/−)小鼠主动脉病理及 炎症小体NLRP3 通路的影响

目的观察穿心莲酸对高脂饮食诱导的ApoE^(−/−)小鼠动脉粥样硬化模型的干预作用。方法将高脂饲料喂食诱导动脉粥样硬化模型的ApoE^(−/−)小鼠随机分为模型组、瑞舒伐他汀组、穿心莲酸高、中、低剂量组,每组各10只,另取10只C57BL/6小鼠作为对照组,给药后检测小鼠血清血脂水平,观察主动脉病理形态变化,采用Westernblot法检测小鼠主动脉NLRP3相关通路蛋白的表达。结果高、中剂量的穿心莲酸均能显著降低高脂喂食诱导的动脉粥样硬化模型ApoE^(−/−)小鼠的血清胆固醇(TC)及低密度脂蛋白(LDL-C)水平,升高高密度脂蛋白(HDL-C)水平(P<0.05),主动脉病理切片油红O染色显示穿心莲酸高剂量组主动脉壁各层正常,斑块较少,脂质浸润明显减轻,高、中剂量穿心莲酸均可降低主动脉NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达(P<0.05)。结论穿心莲酸可能通过调控NLRP3通路减轻AS小鼠主动脉病变。

痰热清对胸外科术后患者血清炎性细胞因子的影响研究

目的:探讨痰热清用于治疗胸外科术后患者的临床疗效,及其对血清TNF-α、IL-6、IL-8等炎性细胞因子的影响。方法:选择本院胸外科2014年2月至2015年12月诊治的90例胸外科术后(肺癌术后48例,食管癌术后42例)的患者作为研究对象,采用随机数字表法随机分为2组,每组各45例。对照组给予西医常规的抗感染方案行抗感染治疗。观察组则在对照组的基础上加用痰热清注射液治疗,于术后即给予痰热清20 m L静脉滴注治疗,连续治疗7 d。观察2组的临床疗效。同时采用ELISA方法检测2组患者血清中治疗前及治疗后TNF-α、IL-6、IL-8含量的变化。结果:经治疗后,观察组的临床疗效优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);2组患者治疗后白细胞、中性粒细胞的含量均有所下降,差异均具有统计学意义(P<0.05);白细胞、中性粒细胞下降明显低于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);观察组气道分泌物有效清除率、肺部感染发生率等优于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);2组患者血清中治疗后TNF-α、IL-6、IL-8的含量均有所下降,差异均具有统计学意义(P<0.05);而观察组的下降程度较对照组更为明显,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:胸外科术后即使用痰热清注射液联合抗生素抗感染治疗更能有效地改善胸外科术后患者的临床症状,并能降低其血清中TNF-α、IL-6、IL-8等炎性细胞因子的含量,说明痰热清注射液发挥抑制机体炎性反应,改善临床症状,可能与之通过抑制组织中TNF-α、IL-6、IL-8等炎性反应因子的生成或释放进入血清,降低血清中炎性细胞因子的含量有关,但其具体机制仍需后期进一步深入探讨。

黄芪注射液对LPS所致THP‐1源性巨噬细胞炎症的干预作用

目的探讨黄芪注射液对脂多糖(LPS)所致THP‐1源性巨噬细胞炎症反应的影响作用。方法用10 nmol/L佛波酯(PMA)诱导THP‐1单核细胞分化为巨噬细胞,LPS刺激细胞产生炎症反应的同时,加以不同浓度的黄芪注射液进行干预。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞因子IL‐4、IL‐10和IL‐1β的分泌水平;RT‐qPCR技术检测细胞因子IL‐1β、CASPASE‐1、IL‐6、IL‐18、IL‐4、IL‐10 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法检测NLRP3和CASPASE‐1的蛋白表达水平。结果与正常组相比,LPS模型组抗炎因子IL‐4、IL‐10的分泌水平和mRNA的表达水平明显减少(P<0.05);促炎因子IL‐1β的分泌水平和IL‑1β、CASPASE‑1、IL‑6、IL‑18的mRNA表达水平明显增加(P<0.05,P<0.01);NLRP3和CASPASE‐1的蛋白表达水平明显上调(P<0.01)。与模型组相比,黄芪注射液给药组抗炎因子IL‐4、IL‐10的分泌水平和mRNA的表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01);促炎因子IL‐1β的分泌水平和IL‑1β、CASPASE‑1、IL‑6、IL‑18的mRNA表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01);NLRP3和CASPASE‐1的蛋白表达水平明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论黄芪注射液调控巨噬细胞极化及炎症相关的多种细胞因子,其调控机制可能通过抑制NLRP3/caspase‐1炎症小体的活性,从而抑制LPS所致的巨噬细胞炎症及免疫应答。

白杨素对7-酮基胆固醇诱导的巨噬细胞炎症及脂代谢紊乱的影响

目的:探讨白杨素对7-酮基胆固醇(7-KC)所致RAW264.7细胞炎症和脂代谢紊乱过程中的作用及可能机制。方法:采用MTT法检测细胞活性,筛选白杨素的安全给药浓度。以2μg/mL 7-KC孵育RAW264.7细胞从而构建巨噬细胞脂代谢紊乱模型,并设置空白组、模型组、瑞舒伐他汀组以及白杨素高(5μmol/L)、中(1μmol/L)、低(0.1μmol/L)剂量组。采用硝酸盐还原酶法检测各组细胞上清液中一氧化氮(NO)分泌量;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测ABCG1、LXRα、IL-17A、IL-10、IL-6、MCP-1的mRNA表达水平;western blotting法检测NF-κB P65、iNOS、SR-B1的蛋白表达水平。结果:与模型组相比,白杨素组细胞分泌的NO减少(均P<0.05),细胞内IL-6、MCP-1的mRNA和NF-κB P65、iNOS的蛋白表达水平降低,细胞内ABCG1、LXRα、IL-17A、IL-10的mRNA和SR-B1的蛋白表达水平升高(均P<0.05)。结论:白杨素可抑制7-KC诱导的巨噬细胞炎症反应,调节脂质转运相关蛋白和基因,其作用机制可能与抑制NF-κB的激活有关。

食管癌组织中NK细胞浸润对患者预后的影响

目的:探讨自然杀伤细胞(NK细胞)不同浸润程度与食管癌预后的关系。方法:将本院92例食管癌组织进行CD57染色,对NK细胞进行计数,将不同NK细胞浸润程度样本分为3组:轻度浸润组(NK细胞≤50个)30例,中度浸润组(50个<NK细胞<150个)35例,高度浸润组(NK细胞≥150个)27例。对3组患者的临床资料数据进行分析,同时采用Cox比例风险回归模型对影响预后的因素进行统计学处理。结果:(1)3组5年生存率差异有统计学意义(P<0.05),随着NK细胞浸润程度的加重,5年生存率逐渐升高;(2)随着TNM分期的进展,食管癌患者5年生存率逐渐降低(P<0.05);在Ⅲ-Ⅳ期食管癌患者中高度浸润组患者的5年生存率高于轻度浸润组(P<0.05);(3)Cox比例风险回归模型分析显示,TNM分期、肿瘤直径、NK细胞浸润程度以及肿瘤分化程度是影响食管癌预后的独立危险因子(P<0.05)。结论:NK细胞浸润程度越高食管癌患者预后越好,可将NK细胞表达量作为食管癌疗效的评定指标。

穿心莲酸对高脂饲料喂养C57BL/6及NLRP3基因敲除小鼠脂质及炎症水平的影响

目的研究穿心莲酸对高脂饲料喂养C57BL/6及NLRP3基因敲除小鼠脂质及炎症水平及其相关蛋白的影响。方法将18只C57BL/6小鼠和18只NLRP3基因敲除小鼠分别随机分为3组,每组6只,雌雄各半。分别为对照组(Control)、模型组(HFD)、穿心莲酸(ANDA,12.5 mg·kg^(-1))组。对照组小鼠给予维持饲料,其余小鼠每笼每天给予20 g高脂饲料喂养(high fat diet,HFD),连续8周。第5周起,ANDA组连续灌胃给药4周,其他组小鼠灌胃给予蒸馏水,每天1次。收集血样及肝脏,测定血清中TC、TG、HDL-c、LDL-c及IL-1β水平;Western Blot测定肝脏中caspase-1、IL-1β、CYP7A1及LXRα的蛋白表达水平。结果给予高脂饲料喂养后,WT小鼠和NLRP3-/-小鼠血清TC、TG、LDL-c水平均较对照组显著升高、HDL-c水平显著下降(P<0.01);与对应模型组相比较,穿心莲酸均能降低高脂饲料喂养的WT小鼠和NLRP3-/-模型小鼠血清TC、TG、LDL-C含量,提高HDL-c含量(P<0.01或P<0.05)。穿心莲酸明显下调高脂饲料喂养WT小鼠血清IL-1β的含量(P<0.01),对NLRP3-/-模型小鼠作用未见显著差异。穿心莲酸能下调高脂饲料喂养WT小鼠蛋白caspase-1、IL-1β的肝脏表达(P<0.01),对NLRP3-/-模型小鼠未见显著差异。穿心莲酸仅调控NLRP3-/-模型小鼠的肝脏CYP7A1蛋白表达(P<0.01),对WT模型小鼠未见显著差异。穿心莲酸对WT和NLRP3-/-模型小鼠肝脏LXRα蛋白表达均无显著作用。结论穿心莲酸具有一定调控血脂和抗炎作用,NLRP3基因敲除后穿心莲酸仍具有改善高脂饲料所致的血脂变化作用,增强了对肝CYP7A1蛋白表达的作用,但对下调caspase-1、IL-1β的炎症蛋白表达作用显著弱化。穿心莲酸的抗炎作用机制可能与NLRP3炎症小体通路相关。