蕲蛇蛇毒中一个新的类凝血酶的分离纯化与表征

使用DEAE SephadexA 5 0、POROS 5 0HS及POROS 2 0PI等色谱分离技术 ,从蕲蛇粗毒中分离提纯得到 1个具有凝血活力的组分 ,经SDS PAGE和PAGE检测均为一条带 ,非还原条件下相对分子质量 2 4 .3kDa,还原条件下相对分子质量 33.0kDa ;其凝血活力为 91 .0NIHu mg.该组分不具有激活因子ⅩⅢ的活性 ,肝素不影响该组分的凝血活性 ,EDTA部分抑制其活性 ,苯甲基磺酰氟 (PMSF)则会产生不可逆抑制作用 .该酶N 末端氨基酸序列为VIGGNGXDINEHRFLVAFF 。

对数期金黄色葡萄球菌的离子交换色谱行为及其表征

建立了高效离子交换色谱和激光光散射仪联用的分离 检测系统研究对数期金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的方法。实验采用TSKgelSuperQ TOYOPEARL650C色谱柱,以20mmol/L的哌嗪 盐酸缓冲液(pH6 0)为流动相,倍增系数为21的光散射系统检测,发现对数期的S.aureus表现出两个有规律变化的色谱峰。透射电镜观察显示前峰的S.aureus为圆形,后峰为椭圆形且有一条明显的横隔壁。采用3 (4,5) 双甲基 2 噻唑 (2,5) 苯基溴化四氮唑盐(MTT)试剂测定这两个色谱峰,发现后峰的增殖能力比前峰高65 3%。实验结果表明,前峰为停止分裂的金黄色葡萄球菌、后峰为处于裂殖状态的金黄色葡萄球菌。该方法可作为研究微生物的一种快速而精确的新型分析方法。