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不同基因转染方法对小鼠内耳毛细胞转染效率的比较
被引量:
3
1
作者
陈岩
赖垂金
+1 位作者
李雯
李华伟
《听力学及言语疾病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第2期166-169,共4页
目的对比不同的基因转染方法对小鼠内耳毛细胞的转染效率,以探寻简便、高效转染耳蜗毛细胞的方法。方法分离111只新生昆明小鼠(P2)耳蜗螺旋韧带及感染上皮,分别采用电穿孔法介导质粒载体(pGPHI/GFP/Neo)、腺病毒载体(Ad5/CMV/GFP)和慢...
目的对比不同的基因转染方法对小鼠内耳毛细胞的转染效率,以探寻简便、高效转染耳蜗毛细胞的方法。方法分离111只新生昆明小鼠(P2)耳蜗螺旋韧带及感染上皮,分别采用电穿孔法介导质粒载体(pGPHI/GFP/Neo)、腺病毒载体(Ad5/CMV/GFP)和慢病毒载体(LV/CMV/GFP)3种方法转染小鼠内耳毛细胞,于转染48小时后在荧光显微镜下观察并比较三种方法基因转染后小鼠内耳毛细胞绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的表达。结果电穿孔法介导质粒载体转染组和慢病毒载体转染组GFP阳性细胞极少;腺病毒载体转染组效率最高,耳蜗中回外毛细胞GFP阳性率为90.0%±4.1%,内毛细胞GFP阳性率为5%±0.4%。结论腺病毒载体能更有效地将外源基因导入耳蜗毛细胞内表达,是基因转染耳蜗毛细胞的理想载体。
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关键词
腺病毒载体
慢病毒载体
电穿孔法
基因转染
内耳毛细胞
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职称材料
硫酸卡那霉素对成年大鼠的耳毒性效应
被引量:
5
2
作者
张志存
余洪猛
+4 位作者
刘全
田洁
王天丰
赖垂金
周晓娅
《生理学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第2期171-176,共6页
本研究旨在观察硫酸卡那霉素(kanamycin sulfate,KM)对成年大鼠的耳毒性效应。6~7周龄的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠40只,随机分为2组:实验组,每天腹腔注射KM(500mg/kg)2周;对照组,注射等量生理盐水2周。通过检测脑干听觉诱发电位(audi...
本研究旨在观察硫酸卡那霉素(kanamycin sulfate,KM)对成年大鼠的耳毒性效应。6~7周龄的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠40只,随机分为2组:实验组,每天腹腔注射KM(500mg/kg)2周;对照组,注射等量生理盐水2周。通过检测脑干听觉诱发电位(auditory brainstem response,ABR)观察大鼠听力改变。ABR检测结束后,分离出耳蜗进行基底膜铺片、耳蜗冰冻切片,观察耳蜗螺旋神经节细胞(spiral ganglion cells,SGCs)的密度和耳蜗形态学改变。结果显示,注射KM2周后,大鼠在各频率的听觉阈值均有明显升高,其上升幅度超过60dB;随着时间推移,KM组SGCs密度逐渐降低,Corti器结构尚存,但外毛细胞及内毛细胞均有不同程度的缺失,以外毛细胞为甚;内毛细胞缺失与SGCs的密度下降相平行。以上结果表明,6~7周龄大鼠经过KM作用2周后,听力会明显下降,达到重度耳聋甚至全聋。KM的耳毒性作用与SGCs和内外毛细胞的损伤密切相关。
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关键词
硫酸卡那霉素
耳聋
脑干听觉诱发电位
大鼠
原文传递
题名
不同基因转染方法对小鼠内耳毛细胞转染效率的比较
被引量:
3
1
作者
陈岩
赖垂金
李雯
李华伟
机构
复旦大学附属眼耳鼻喉科医院
出处
《听力学及言语疾病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第2期166-169,共4页
基金
973及国家重大研究计划(2011CB504506)
国家自然科学基金(81100709)
教育部博士点基金博导类计划(20120071110077)联合资助
文摘
目的对比不同的基因转染方法对小鼠内耳毛细胞的转染效率,以探寻简便、高效转染耳蜗毛细胞的方法。方法分离111只新生昆明小鼠(P2)耳蜗螺旋韧带及感染上皮,分别采用电穿孔法介导质粒载体(pGPHI/GFP/Neo)、腺病毒载体(Ad5/CMV/GFP)和慢病毒载体(LV/CMV/GFP)3种方法转染小鼠内耳毛细胞,于转染48小时后在荧光显微镜下观察并比较三种方法基因转染后小鼠内耳毛细胞绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的表达。结果电穿孔法介导质粒载体转染组和慢病毒载体转染组GFP阳性细胞极少;腺病毒载体转染组效率最高,耳蜗中回外毛细胞GFP阳性率为90.0%±4.1%,内毛细胞GFP阳性率为5%±0.4%。结论腺病毒载体能更有效地将外源基因导入耳蜗毛细胞内表达,是基因转染耳蜗毛细胞的理想载体。
关键词
腺病毒载体
慢病毒载体
电穿孔法
基因转染
内耳毛细胞
Keywords
Inner ear
Cochlear hair cells
Gene transfer
Electroporation
Adenovector
Lentivirus vector
分类号
R764.35 [医药卫生—耳鼻咽喉科]
下载PDF
职称材料
题名
硫酸卡那霉素对成年大鼠的耳毒性效应
被引量:
5
2
作者
张志存
余洪猛
刘全
田洁
王天丰
赖垂金
周晓娅
机构
复旦大学附属眼耳鼻喉科医院耳鼻喉科
复旦大学脑科学研究院
复旦大学附属眼耳鼻喉科医院中心实验室
出处
《生理学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第2期171-176,共6页
基金
supported by the Natural Science Foundation of Shanghai Science and Technology Committee
China(No.10ZR1406000)
+1 种基金
the Open Research Fund Program of the Institutes of Brain Science
Fudan University(2008-2010)
文摘
本研究旨在观察硫酸卡那霉素(kanamycin sulfate,KM)对成年大鼠的耳毒性效应。6~7周龄的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠40只,随机分为2组:实验组,每天腹腔注射KM(500mg/kg)2周;对照组,注射等量生理盐水2周。通过检测脑干听觉诱发电位(auditory brainstem response,ABR)观察大鼠听力改变。ABR检测结束后,分离出耳蜗进行基底膜铺片、耳蜗冰冻切片,观察耳蜗螺旋神经节细胞(spiral ganglion cells,SGCs)的密度和耳蜗形态学改变。结果显示,注射KM2周后,大鼠在各频率的听觉阈值均有明显升高,其上升幅度超过60dB;随着时间推移,KM组SGCs密度逐渐降低,Corti器结构尚存,但外毛细胞及内毛细胞均有不同程度的缺失,以外毛细胞为甚;内毛细胞缺失与SGCs的密度下降相平行。以上结果表明,6~7周龄大鼠经过KM作用2周后,听力会明显下降,达到重度耳聋甚至全聋。KM的耳毒性作用与SGCs和内外毛细胞的损伤密切相关。
关键词
硫酸卡那霉素
耳聋
脑干听觉诱发电位
大鼠
Keywords
kanamycin sulfate
hearing loss
auditory brainstem response
rat
分类号
R764 [医药卫生—耳鼻咽喉科]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
不同基因转染方法对小鼠内耳毛细胞转染效率的比较
陈岩
赖垂金
李雯
李华伟
《听力学及言语疾病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015
3
下载PDF
职称材料
2
硫酸卡那霉素对成年大鼠的耳毒性效应
张志存
余洪猛
刘全
田洁
王天丰
赖垂金
周晓娅
《生理学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
5
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