不同毒力的分枝杆菌感染促进小鼠RAW264.7巨噬细胞自噬及mTOR和AKT磷酸化

目的探讨不同毒力分枝杆菌感染对巨噬细胞自噬水平的影响。方法分别用表达绿色荧光蛋白(GFP)的结核分枝杆菌标准株H37Rv、卡介苗(BCG)和耻垢分枝杆菌Ms1-2c株(Ms)感染小鼠RAW264.7巨噬细胞,流式细胞术检测巨噬细胞的自噬水平,激光共聚焦显微镜观察细胞内吞噬体与溶酶体的共定位,Western blot法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化的mTOR(p-mTOR)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化的AKT(p-AKT)蛋白表达。结果与对照组相比,RAW264.7巨噬细胞感染H37Rv、BCG和Ms 24 h后,感染组的自噬水平均显著增加,Ms感染组的自噬水平最高;各感染组的LC3-Ⅱ蛋白表达均上调,H37Rv、BCG和Ms感染的细胞内吞噬体与溶酶体的共定位率分别为(11.33±0.88)%、(18.33±0.88)%和(48.67±0.66)%,Ms感染组的分枝杆菌与溶酶体共定位最明显。分枝杆菌感染巨噬细胞后,mTOR和AKT表达无明显改变,但其磷酸化水平均显著升高。结论分枝杆菌感染诱导巨噬细胞发生自噬,同时促进mTOR和AKT的磷酸化。

孕中期血清胱抑素C水平与妊娠期糖尿病胰岛素抵抗的相关性分析

目的探讨血清胱抑素C(Serum cystatin C,CysC)在孕中期与妊娠期糖尿病胰岛素抵抗的相关性。方法选取孕中期(24~28周)孕妇291例,分为妊娠期糖尿病组(GDM组)128例和正常孕妇组163例为研究对象,比较两组糖化血红蛋白(HbA1c)、CysC、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、餐后30min血糖及胰岛素、餐后1h血糖及胰岛素,餐后2h血糖及胰岛素、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)水平,并对结果进行相关性分析。结果GDM组HbA1c、FPG、FINS、CysC及HOMA-IR均明显高于正常妊娠对照组(P<0.05),差异有统计学意义;在孕中期妊娠产妇中血清CysC与HbA1c、HOMA-IR、FPG、HbA1c、PG-60min、PG-120min呈正相关(r=0.396;r=0.207;r=0.287;r=0.340;r=0.230;P<0.05);ROC曲线分析,CysC对孕中期妊娠期糖尿病预测灵敏度为77.3%,特异度为72.4%,AUC为0.768,最佳截断值为0.75mg/L;CysC和HOMA-IR是孕中期并发妊娠期胰岛素抵抗的独立危险因素。结论CysC在孕中期孕妇中与胰岛素抵抗相关,是预测GDM的独立危险因素,对早期诊断孕中期GDM有重要意义。