丹酚酸A对高脂饮食引起的NAFLD小鼠肠道菌群异常的研究

目的探讨丹酚酸A(SAA)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠的肠道菌群结构和数量的影响。方法给C57BL/6小鼠喂养高脂饮食建立NAFLD模型。将18只小鼠随机分为对照(Ctrl)组、高脂(HF)组(NAFLD模型组)和高脂+丹酚酸A腹腔注射(HF+SAA)组。饲养10周后分别收集三组小鼠粪便并提取总DNA,利用Illumina Miseq™高通量测序技术获得小鼠粪便中16s rDNA V4区序列,并基于RDP数据库对比分析了三组中每只小鼠粪便中细菌的种类和丰度。结果SAA能有效的减轻C57BL/6小鼠由高脂饮食喂养引起的小鼠体重升高。HF组小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)和肝脏中甘油三酯(TG)含量较对照组升高,而HF+SAA组小鼠较高脂组血清中ALT、FFA、TG和肝脏中TG降低。HF组小鼠肠道菌群紊乱,本研究发现HF组的厚壁菌门和变形菌门与对照组比较丰度偏高,而HF+SAA组能明显下调这个菌门的菌群丰度;HF组的拟杆菌门与对照组比较丰度偏低,HF+SAA组能明显上调菌门的菌群丰度。结论高脂饮食能诱导C57BL/6小鼠的肠道菌群失调以及脂代谢异常,而SAA能够有效改善高脂饮食引起的肝损伤和被破坏的肠道菌群结构,减轻NAFLD引起的脂代谢异常,减少NAFLD小鼠肝脏脂质病变。

激活自噬改善长链饱和游离脂肪酸诱导的血管内皮细胞黏附分子-1的表达

[目的]揭示自噬对长链饱和游离脂肪酸(long-chain saturated free fatty acids,L-SFAs)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)血管内皮细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)表达的影响及其作用机制。[方法]采用软脂酸(palmitic acid,PA)和硬脂酸(stearic acid,SA)对HUVECs进行处理,检测激活或抑制自噬对L-SFAs诱导下细胞内VCAM-1的mRNA及蛋白表达的影响。采用丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)通路抑制剂筛选参与自噬调控VCAM-1的分子信号通路,对关键靶点的蛋白表达水平进行检测。[结果] L-SFAs可显著上调HUVECs中VCAM-1的m RNA及蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),且作用呈剂量及时间依赖性。激活自噬可显著抑制PA诱导的VCAM-1表达增加(P<0.01);采用自噬抑制剂及siRNA干扰手段抑制自噬则能够促进VCAM-1的表达(P<0.05,P<0.01)。特异性抑制p38可显著抑制PA诱导的VCAM-1转录激活(P<0.05);调控自噬可显著逆转PA诱导的p38磷酸化水平的变化(P<0.05)。[结论]激活自噬通过下调L-SFAs诱导的p38磷酸化增加,从而抑制血管内皮细胞VCAM-1的表达,自噬调控有望成为改善血管内皮功能的有效策略。

齐墩果酸通过AMPK介导的信号通路激活自噬改善脂毒性诱导的肝细胞损伤

目的 研究中药单体齐墩果酸(OLA)对棕榈酸(PA)诱导的Aml-12小鼠肝细胞脂毒性的保护作用,并揭示其潜在分子机制.方法 给予Aml-12小鼠肝细胞不同浓度OLA(10、20、40μmol/L)预处理2h后添加PA干预12h诱导肝细胞脂毒性.通过检测细胞乳酸脱氢酶释放量、Hoechst细胞核染色检测OLA对PA诱导脂毒性的保护作用;通过Western blot及siRNA干扰等技术检测OLA保护脂毒性的潜在分子机制.结果 PA干预以剂量依赖关系诱导肝细胞脂毒性.OLA干预显著改善PA诱导的肝细胞脂毒性(P<0.05),并呈明显的剂量依赖关系.机制研究表明激活自噬可显著抑制PA诱导的脂毒性,而抑制自噬加重PA诱导的脂毒性.OLA显著激活肝细胞自噬,且抑制自噬显著阻断OLA保护脂毒性的作用.此外,OLA显著激活自噬调控上游分子腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的磷酸化水平,采用化学抑制剂或siRNA干扰抑制AMPK可显著抑制OLA对脂毒性的保护作用.结论 OLA通过激活自噬显著改善PA诱导的肝细胞脂毒性,AMPK激活参与OLA对脂毒性的保护作用.OLA具有潜在防治非酒精性脂肪性肝病的作用.

白术内酯Ⅰ抑制MAPK/NF-κB信号通路改善对乙酰氨基酚诱导的小鼠急性肝损伤

该文旨在揭示白术内酯Ⅰ改善对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导的小鼠急性肝损伤作用及潜在机制。将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、APAP组(APAP 500 mg·kg^(-1))、APAP+白术内酯Ⅰ低剂量组(APAP 500 mg·kg^(-1)+白术内酯Ⅰ60 mg·kg^(-1))、APAP+白术内酯Ⅰ高剂量组(APAP 500 mg·kg^(-1)+白术内酯Ⅰ120 mg·kg^(-1))。通过腹腔注射APAP 500 mg·kg^(-1)诱导小鼠发生急性的肝损伤,白术内酯Ⅰ先于APAP处理2 h进行灌胃干预,对照组接受等剂量溶剂灌胃及腹腔注射。通过检测小鼠血浆谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平和肝脏组织HE染色评价白术内酯Ⅰ对APAP诱导的肝损伤的保护作用;检测小鼠肝脏组织中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量及过氧化氢酶(CAT)的活力,评价白术内酯Ⅰ对APAP诱导的肝脏氧化应激的影响;采用Western blot检测肝脏p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase,p38 MAPK)、c-jun N末端激酶(c-jun N-terminal kinease,JNK)和核因子-κB p65(nuclear factor kappa-B p65,NF-κB p65)信号通路蛋白表达水平,通过real-time PCR检测肝脏组织中炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)的基因表达水平。与APAP组相比,白术内酯Ⅰ低、高剂量组均能显著降低APAP诱导的血浆ALT及肝脏MDA水平上升,并增加肝脏CAT活性和GSH含量。研究表明白术内酯Ⅰ可以显著抑制APAP上调的MAPK磷酸化水平及NF-κB p65,并且降低NF-κB p65下游靶点IL-1β、IL-6的转录活性。白术内酯Ⅰ可改善APAP诱导的小鼠急性肝损伤,其作用机制可能与抑制APAP激活的MAPK/NF-κB p65信号通路有关。