提高大型仪器使用效率的新尝试

为提高大型仪器使用效率,暨南大学分析测试中心结合实际,进行了一系列尝试,包括聘请教授,组成技术顾问团;仪器小组管理,并要求仪器管理人员"一专多能";实行严格的预约上机制度;增加晚班制,延长服务时间;建立入职导师制;开设专题讲座;通过国家计量认证,全面提高实验室管理和服务等等,将分析测试中心建设成为有特色的公共平台。

脱水淫羊藿素对小鼠巨噬细胞免疫功能的影响

目的:研究脱水淫羊藿素(AHI)在体外对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞免疫功能的影响。方法:分离制备小鼠骨髓来源巨噬细胞;CCK-8法检测不同终浓度的AHI对巨噬细胞的毒性;采用Griess试剂盒检测AHI对巨噬细胞产生NO的影响;流式细胞术(FCM)检测AHI对巨噬细胞吞噬E.coli颗粒的影响;利用FCM结合双色免疫荧光染色技术检测AHI对巨噬细胞早期活化标志CD69的表达情况;使用流式液相蛋白定量检测技术(CBA)检测AHI对LPS刺激巨噬细胞分泌细胞因子的影响。结果:终浓度为2.5、5、10μmol/L的AHI对活化的小鼠巨噬细胞均具有明显的免疫抑制作用,特别是5μmol/L AHI能明显抑制经LPS刺激的巨噬细胞早期活化,释放NO,吞噬E.coli颗粒,以及分泌IL-6、MCP-1、TNF和IL-12p70四种细胞因子。结论:AHI对LPS诱导的小鼠巨噬细胞的活化具有明显的抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂。

淫羊藿素、脱水淫羊藿素对T淋巴细胞的比较研究

通过分离制备小鼠淋巴细胞;CCK-8法检测脱水淫羊藿素(AHI)、淫羊藿素(ICA)对淋巴细胞的毒性;流式细胞术(FCM)结合双色免疫荧光染色技术检测AHI、ICA对con A刺激T淋巴细胞早期活化标志CD69,中期活化标志CD25的表达情况;利用活性染料CFSE,结合流式细胞术分析AHI、ICA对T淋巴细胞增殖的影响;流式细胞术分析AHI、ICA对T淋巴细胞周期的影响;流式细胞术实时分析AHI、ICA对T淋巴细胞钙离子内流的影响;使用流式蛋白定量检测技术(CBA)检测AHI、ICA对T淋巴细胞分泌细胞因子的影响.结果显示AHI与ICA对活化的小鼠T淋巴细胞具有明显的免疫抑制作用,特别是ICA,能明显抑制经con A刺激的T淋巴细胞早中期活化、增殖、钙离子内流,并阻滞细胞周期在G0/G1期,以及分泌IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF和IL-12p70细胞因子;ICA比AHI对活化的小鼠T淋巴细胞具有更明显的免疫抑制作用.

脱水淫羊藿素对腹膜炎小鼠的保护作用

目的研究脱水淫羊藿素(AHI)对酵母多糖诱导的小鼠腹膜炎的影响。方法采用酵母多糖诱导腹膜炎模型,观察各组小鼠的生存情况,收集腹腔液,分别进行白细胞计数,Griess试剂联合酶标仪检测一氧化氮(NO)、流式细胞术检测小鼠腹腔渗出液中IL-6、IL-10、TNF-α、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的水平;采用Fluo4-AM标记,激光扫描共聚焦显微镜实时检测AHI对骨髓巨噬细胞钙离子内流的影响;Western blot法检测AHI对一氧化氮合酶(iNOS)的影响。结果 4 mg/kg体质量的AHI能提高腹膜炎小鼠的存活,减少腹腔白细胞的数量,降低NO、IL-10、TNF-α、MCP-1、IL-6的分泌;5μmol/L的AHI能抑制小鼠巨噬细胞的钙内流和iNOS的表达。结论 AHI对酵母多糖诱导的腹膜炎小鼠具有保护作用,可能与抑制巨噬细胞的钙离子内流、iNOS表达有关。

蛋白酶体抑制剂MG132的浓度对人白血病细胞K562凋亡的影响

探讨蛋白酶体抑制剂MG132在诱导人白血病K562细胞凋亡过程中作用。分别以不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG132处理人白血病细胞K562,通过MTT法检测K562细胞活力,应用AnnexinⅤ和PI双染的细胞流式法检测K562细胞凋亡率和细胞内活性氧(ROS)水平,应用酶标仪法检测K562细胞内Caspase-3活性变化的情况。结果表明,随着MG132浓度的增加,各个指标与对照组比较差异均有显著性(P<0.05):K562细胞增殖明显受到抑制;细胞凋亡率明显增加,且当MG132浓度为900 nmol/L时,细胞凋亡率达36.5%;同时,ROS水平和caspase-3活性明显升高。因次,蛋白酶体抑制剂MG132可显著抑制人白血病细胞K562增殖并促进其凋亡。

黄芩苷诱导JurkatT细胞凋亡的体外研究

目的:研究黄芩苷(BA)抑制Jurkat T细胞(人T淋巴细胞白血病细胞株)的生长和诱导其凋亡的作用及机制。方法:以噻唑兰(MTT)比色法测定BA对细胞生长的抑制率;胞内[Ca2+]i和线粒体跨膜电势(ΔΨm)分别用F luo-4/AM和D iOC6(3)荧光探针标记,流式细胞仪检测;PI染色流式细胞术分析细胞周期分布及凋亡率;凋亡细胞形态以Hoechst33342/PI染色后荧光显微镜观察。结果:BA明显抑制Jurkat细胞增殖(P<0.01),并呈时间、浓度依赖性;BA可浓度依赖的诱导Jurkat细胞[Ca2+]i浓度上升、线粒体膜电势ΔΨm降低,将细胞周期阻滞在S期,凋亡率增加,荧光显微镜下可见经BA(100 mg/L)作用的细胞呈现典型的凋亡核固缩表现,胞核呈致密浓染的颗粒状荧光。结论:BA体外显著抑制Jurkat T细胞增殖及诱导其凋亡,其机制可能与胞内[Ca2+]i及线粒体依赖的凋亡通路有关。

蛋白酶体抑制剂MG132诱导K562和HeLa细胞凋亡程度存在明显差异

蛋白酶体抑制剂MG132诱导人白血病细胞K562和宫颈癌细胞HeLa凋亡,用3个不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG132处理人白血病细胞K562和宫颈癌细胞HeLa,通过MTT检测、annexinⅤ/PI双染法、流式细胞术、酶标仪和Western印迹分别检测MG132对K562细胞和HeLa细胞的生长效应、细胞凋亡率、细胞内活性氧(ROS)水平和caspase-3活性变化的影响.蛋白酶体抑制剂MG132诱导K562细胞凋亡明显,对HeLa细胞诱导凋亡不明显.结果表明,蛋白酶体抑制剂MG132特异性诱导不同肿瘤细胞凋亡的程度存在明显差异.

黄缘盒龟肝脏与肾脏的超微结构

在透射电子显微镜下观察黄缘盒龟的肝脏和肾脏的超微结构.结果显示肝实质内结缔组织少,肝小叶分界不清楚;肝细胞具两种形态,即L细胞和D细胞.肾小球由毛细血管构成;肾小囊外壁由扁平细胞构成,内壁可见足细胞附于其上;颈段由单层纤毛立方上皮细胞构成,细胞核较大,细胞游离面有很多纤毛伸向管腔,细胞核周围排列密集的线粒体;近曲小管由单层柱状上皮细胞构成,细胞核圆形,位于细胞中部,胞质内含有丰富的线粒体;中间段由单层纤毛立方上皮构成;远曲小管由单层柱状上皮细胞构成,细胞核位于细胞中部,其周围分布有许多线粒体,细胞底部可见丰富的质膜内褶;收集管由单层柱状上皮细胞组成,胞质内可见较丰富的膜迷路.黄缘盒龟肝脏的超微结构与其他爬行动物相似.肾脏结构与其生态习性有关.

乌龟脑细胞辐射损伤的研究

在细胞培养的基础上,利用透射电镜和流式细胞术对乌龟脑细胞的辐射损伤进行了研究。在电镜下观察,未辐射脑细胞为不规则的几何形状,有突起伸出;细胞核不规则,几何状或椭圆形,核仁和核周间隙明显;线粒体基质电子密度均匀,内部嵴结构清晰;内质网清晰可见;细胞质匀质,内部充满大量糖原颗粒。乌龟脑细胞受辐射后,细胞外碎片增多;核出现明显的分叶,并可见核碎片;核染色质固缩、边集;线粒体、内质网和部分细胞质出现空泡化;可见凋亡小体。流式细胞术的检测结果显示:辐射组和未辐射组的细胞大部分都处于G_0/G_1期,分别占检测细胞总数59.7%和61.9%:在主峰前,辐射组细胞出现细胞凋亡峰:在G_2/M期,辐射组细胞的细胞数较未辐射组有所减少。研究结果表明,乌龟脑细胞经辐射后出现了凋亡现象。

子宫颈神经内分泌小细胞癌胎盘转移的电镜观察

目的:观察子宫颈神经内分泌小细胞癌合并妊娠的胎盘超微结构。方法:利用透射电镜观察一例子宫颈神经内分泌小细胞癌合并妊娠的癌组织及胎盘超微结构。结果:在胎盘的合体滋养层内及绒毛间质均可见到癌细胞,有些癌细胞的胞质尚可见电子致密的神经内分泌颗粒。结论:电镜检查有助于证实宫颈神经内分泌小细胞癌的胎盘转移。

卵巢浆液性囊腺癌神经内分泌细胞的形态学观察

目的:观察卵巢浆液性囊腺癌神经内分泌细胞(neuro endocrine cells,NECs)的大体形态和超微结构特征。方法:采用免疫组化SP法检测嗜铬素A在41例卵巢浆液性囊腺癌和22例正常卵巢组织中的表达,图像分析仪定量分析其表达情况;应用透射电子显微镜观察正常卵巢、卵巢浆液性囊腺癌各3例组织中NECs的超微结构特征。结果:卵巢浆液性囊腺癌组织NECs分布范围及染色强度均明显高于正常卵巢组织(P<0.01),随组织分级程度下降,NECs的表达增强。其超微结构以胞质内出现神经内分泌(neuroendocrine)颗粒为特征,兼具恶性上皮性肿瘤细胞的特征。结论:卵巢浆液性囊腺癌中的NECs是肿瘤的一部分,它们的出现可能与患者不良预后有关。

卵巢浆液性囊腺癌神经内分泌分化的胚性重演

目的研究卵巢神经内分泌细胞(neuroendocrine cells,NECs)在浆液性囊腺癌的"胚性重演",探讨其生物学意义。方法采用免疫组化SP法检测嗜铬素A(CgA)、突触素(Syn)在40例卵巢浆液性囊腺癌、20例正常卵巢和6例胎儿卵巢中的表达,图像定量分析其表达情况;应用透射电子显微镜分别观察三者组织中NECs的超微结构特征。结果卵巢浆液性囊腺癌组织NECs分布范围及染色强度高于胎儿卵巢,均明显高于正常卵巢组(P<0.05),随组织分化程度下降,NECs的表达增强,其超微结构特征亦与胎儿卵巢有相似之处。结论 NECs在卵巢浆液性囊腺癌和胎儿卵巢有相似的细胞结构特征,提示它们在胎儿卵巢发育和浆液性囊腺癌组织发生中可能存在相同的调节因素。

克雷伯氏菌对三苯基锡的酶促降解特性

研究了肺炎克雷伯氏菌对三苯基锡(TPhT)的酶促降解性能,并对酶促反应影响因素的作用机制进行了探讨,以期为阐明有机锡的微生物降解机制提供实验依据.研究证明,菌体、分泌物和胞内降解酶均具有降解TPhT的能力,在30℃转速为130.rm in-1的摇床中避光处理2 h后,对3 mg.L-1TPhT的降解率分别为10.9%、5.3%和47.9%.影响因素实验表明,降解介质、pH、温度、TPhT浓度和金属离子均会对TPhT的酶促降解效果产生影响,其中TPhT酶促反应的最适pH和温度分别为8和50℃.Mg2+、Mn2+、Fe2+和Fe3+在合适的浓度范围内,均会促进TPhT的降解.当Mg2+的浓度为15 mg.L-1时,胞内酶对TPhT的降解率高达73.8%.金属离子的促进效果主要与其对酶的激活、作为电子受体或电子供体参与TPhT酶促降解等作用有关.TPhT的降解速率与其浓度呈现理想的线性关系.该反应的Vm ax和Km分别为0.15 mg.(L.m in)-1和47.1 mg.L-1.

牛蒡子苷元对炎性刺激剂 PMA/ionomycin 诱导淋巴细胞活化的抑制作用 (英文)

探讨牛蒡子苷元(arctigenin)对phorbol-12-myristate-13-acetate(PMA)/ionimycin(Ion)诱导的淋巴细胞活化、细胞因子表达、细胞增殖和细胞周期分布的影响。PMA/Ion处理小鼠淋巴结淋巴细胞,流式细胞术检测Arc对淋巴细胞CD69和CD25的表达、细胞因子的释放、细胞增殖以及细胞周期分布的影响。结果显示,浓度低于1.00μmol·L-1时,Arc未表现出明显的细胞毒性,但可有效抑制PMA/Ion刺激的淋巴细胞CD69、CD25的表达和TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10释放;同时,Arc显著抑制PMA/Ion活化的淋巴细胞增殖,并将细胞周期阻滞在G0/G1期。以上结果提示:牛蒡子苷元可通过抑制淋巴细胞活化、细胞因子释放和细胞增殖发挥抗炎效应。