中草药淫羊藿和菟丝子对日本鳗鲡卵巢发育的影响

在水温(21±1)℃下,给体重(592.5±52.5) g的日本鳗鲡(Anguilla japonica)雌亲鱼投喂每千克体重含0.034 g淫羊藿和0.034 g菟丝子浸膏的饲料90 d,对照组投喂人工配合饲料,研究淫羊藿和菟丝子对卵巢发育的影响。结果显示,饲料中添加淫羊藿和菟丝子的雌鱼卵巢大部分卵母细胞属第Ⅱ时相,性腺指数和肝体比均显著高于对照组(P<0.05);卵母细胞油滴明显增多,部分卵母细胞胞质已充满油滴,核仁变小增多;血清雌二醇(E2)和11-酮基睾酮(11-KT)水平显著升高(P<0.05),实验组11-KT含量约为对照组的4倍;肝脏卵黄蛋白原基因vtg表达量升高,实验组和对照组卵巢cyp19a1仅微量表达,肝脏未检测到erα和erβ的表达;实验组肌肉总脂肪酸、饱和脂肪酸(SFA)、单不饱和脂肪酸(MUFA)和高度不饱和脂肪酸(HUFA)含量均显著高于对照组(P<0.05),最主要的高度不饱和脂肪酸花生四烯酸(AA)、二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)含量均显著高于对照组(P<0.05)。本研究表明,在亲鱼培育饲料中添加中草药淫羊藿和菟丝子促进了日本鳗鲡卵母细胞油滴和肝脏卵黄蛋白原增加,提高了肌肉高不饱和脂肪酸的积累,为卵黄生成和卵母细胞进一步发育做好更充分的准备。

太平洋双色鳗鲡(Anguilla bicolor pacifica)致病性类志贺邻单胞菌的鉴定和中药敏感性研究

从发病死亡的养殖太平洋双色鳗鲡(Anguilla bicolor pacifica)肝脏中分离到一株优势菌AMSH1,为研究其种属、毒力及中药敏感性,结合BIOLOG微生物鉴定系统和16S r DNA序列分析对该菌株进行鉴定,并通过人工回归感染试验确定其致病性。此外,还研究了10味中药单用、10种双联用和4种三联用对该菌株的体外抑菌作用。结果显示该菌株为类志贺邻单胞菌(Plesiomonas shigelloides)。经人工腹腔注射感染健康太平洋双色鳗鲡,证实该菌具有致病性,半致死量LD50为3.2×105CFU/g。药敏试验结果表明,10味中药均有较好的抑菌效果,其中五倍子(Galla chinensis)、丁香(Eugenia caryophllata)和生地榆(Sanguisorba officinalis)的效果最好,7种双联用复方和1种三联用复方均具有协同抑菌作用。本次引起太平洋双色鳗鲡发病的病原为类志贺邻单胞菌,该菌对太平洋双色鳗鲡的致病性及其中药药敏的研究属首次报道。建议选用含五倍子的中药双联用复方或三联用复方进行防治,皆绿色环保。

中华乌塘鳢嗅觉系统孕酮受体的免疫细胞化学研究

为了进一步探讨中华乌塘鳢[Bostrichthys sinensis(Lacépède)]感受性信息素(17α-P和17α,20β-P)的作用机制,以免疫细胞化学(SABC)法进行中华乌塘鳢嗅觉系统孕酮受体的免疫定位和数量分析。结果显示,孕酮受体免疫阳性细胞在性成熟中华乌塘鳢的嗅上皮、嗅神经和嗅球上均有分布,免疫阳性细胞数量由高到低依次为:嗅上皮、嗅球、嗅神经。半定量分析结果表明,中华乌塘鳢嗅觉系统的孕酮受体免疫阳性细胞的数量与其性腺发育程度有关。性成熟雄鱼和雌鱼嗅上皮的免疫阳性细胞数量分别显著或极显著(P<0.05或P<0.01)高于性未成熟雄鱼和雌鱼;性未成熟鱼嗅神经上未发现孕酮受体免疫阳性细胞;性成熟雌鱼嗅球上的免疫阳性细胞数量显著高于性未成熟雌鱼(P<0.05)。本研究证实了硬骨鱼类嗅觉系统中存在孕酮受体免疫阳性细胞。

Cd^(2+)对可口革囊星虫抗氧化酶活性的影响

研究Cd2+暴露对可口革囊星虫(Phascolosoma esculenta)的急性毒性及对其肠和体液超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和膜脂过氧化(LPO)产物丙二醛(MDA)含量的影响.结果显示:(1)Cd2+对可口革囊星虫96 h的半致死浓度为35.84μg/g(鲜泥土).(2)可口革囊星虫肠SOD和CAT活性均高于体液,而MDA含量低于体液.(3)在0～80μg/g Cd2+胁迫下,可口革囊星虫肠和体液抗氧化酶活性及MDA含量对Cd2+胁迫的响应趋势各有不同.体液比肠更敏感.

应用植物凝集素研究鱼类寄生虫病原生物学的进展

近年来，随着水产养殖集约化程度的不断提高，养殖密度的不断加大，鱼类寄生虫病的发生率和危害性不断提高，给渔业生产造成很大损失。鱼类寄生虫病的危害性主要表现在4个方面：一是破坏鱼体组织如体表、鳃、肠道等，引起细菌感染；二是吸收鱼体营养，影响鱼体生长；三是破坏鳃丝，影响鱼类呼吸功能，造成死亡；四是影响商品价值。国内对淡水鱼类寄生虫的研究较多，如鞭毛虫、粘孢子虫、纤毛虫、吸虫、线虫和寄生甲壳动物等。国内对寄生虫的生物学和流行情况的研究和调查较多，而涉及鱼类寄生虫的病原学和致病机理的研究及其方法的报道较少。本文综述了植物凝集素在寄生虫病原研究中的应用现状，为寄生虫防治的深入研究提供基础资料。

中华乌塘鳢纤毛嗅神经元的分离及其电生理

应用酶消化和机械吹打相结合的方法,快速分离出中华乌塘鳢(Bostrychys sinensis)嗅囊中纤毛嗅觉感受神经元。再应用全细胞膜片钳技术记录中华乌塘鳢纤毛嗅觉感受神经元的静息电位、动作电位及电压门控离子通道电流等电生理学特征。结果表明,中华乌塘鳢纤毛嗅觉感受神经元具有典型的双级神经元结构特征,包括细胞体,轴突,树突以及树突顶端的嗅结和纤毛。嗅觉感受神经元静息电位为(57±6.37)mV,动作电位峰值为(38.30±0.95)mV。在60～+80 mV的阶梯去极化脉冲刺激中,内向电流在60～40 mV激活,20～0 mV达到最大值,内向电流峰值为(69.08±44.15)pA。外向电流在+40 mV时达最大值,峰值为(267.55±73.67)pA。本研究结果为纤毛嗅觉感受神经元上性信息素受体感受性信息素的电生理机制以及性信息素的应用提供了方法和理论基础。

花鳗鲡和太平洋双色鳗鲡混合苗种循环水高密度培育的研究

在自行设计的循环水系统中研究了从菲律宾引进的花鳗鲡（Artguilla marmorata）和太平洋双色鳗鲡（Angttilla bieolor pacifica）混合苗种的培育效果。结果显示：苗种存活率为87．99％，日增重、特定生长率和饵料系数分别为0．011g／d、1．87％／d和9．59；鳗苗培育I期放养密度对日增重、特定生长率和饵料系数有显著性影响（P〈0．05），日增重和特定生长率随密度的增大而减小，饵料系数随密度的增大而升高；鳗苗培育Ⅱ期不同放养密度对两种规格鳗苗的日增重、特定生长率和饵料系数均无显著性影响（P〉0．05）。结果表明：自行设计的循环水养殖系统培育花鳗鲡和太平洋双色鳗鲡的效果较好；鳗苗的放养密度在3638～4850ind／m^3是比较适宜的．

基于线粒体cyt b基因序列差异的组合PCR技术快速鉴定五种鳗鲡养殖种类的方法研究

在自然或人为因素下容易出现鳗苗种质混杂的现象,由于鳗鲡苗种在形态上十分相似,难以区分。为了保障鳗农的合法利益和提高养殖效益,急需建立一种能够在现场快速、高效使用的鳗鲡种质鉴定方法。本研究通过比对找出5种常见鳗鲡养殖种类:日本鳗鲡(Anguilla japonica)、美洲鳗鲡(A.rostrata)、花鳗鲡(A.marmorata)、太平洋双色鳗鲡(A.bicolor pacifica)、欧洲鳗鲡(A.anguilla)线粒体细胞色素B(cytochrome b,cyt b)基因的差异序列,基于5个cyt b基因序列差异较大的片段,设计多对引物,分别经过PCR验证和条件优化,挑选出4对引物:aj S1/A1、r-a S1/A2、bp-m S5/A3和m-a S4/A4。将这4对引物组合在同一个反应体系中进行PCR扩增,进行条件优化,筛选出组合PCR的最优条件:退火温度为58oC;退火时间为45s;循环数为27。结果表明,通过扩增产物凝胶电泳中条带的有无及大小可快速准确的鉴定出五个鳗鲡种类。本研究建立的组合PCR方法在3小时内可完成整个种类鉴定过程,同时可使用便携式小型仪器完成操作,可满足现场快速、高效鉴定的要求。此外,通过MEGA5.0软件构建5种鳗鲡线粒体cyt b基因序列NJ进化树,发现花鳗鲡和太平洋双色鳗鲡先聚为一支,再与日本鳗鲡聚在一起,而欧洲鳗鲡和美洲鳗鲡聚在一起,进化树图显示的遗传距离和它们的地理分布的远近相似。

甲基睾酮暴露对鳗鲡精巢发育的影响

在水温(21±1)℃和盐度35下,将体质量(266.45±18.65)g的鳗鲡雄鱼放入直径1.5m、高1.0m、水量1000L的圆形养殖桶中,每桶10尾,水中甲基睾酮质量浓度为50μg/L,对照组加入5mL无水乙醇,不投喂,每5d换水1/2。45d通过组织切片观察性腺组织结构和测定性腺发育相关激素水平,研究甲基睾酮对雄鱼性腺发育的促进作用及可能的机制。试验结果显示,暴露45d后,雄鱼性腺指数为(1.63±0.68)%,显著高于对照组(P<0.05),约为对照组的8倍。试验组雄鱼精巢为乳白色片状,处于第Ⅳ期、精子生成期(S5);对照组精巢为红色细带状,边缘为锯齿状,处于第Ⅱ期、精原细胞增殖期(S1)。试验组血清雌二醇质量浓度为(182.06±30.52)pg/mL,显著高于对照组(P<0.05);11-酮基睾酮质量浓度为(7.30±2.15)pg/mL,与对照组无显著差异。试验结果表明,甲基睾酮可作用于鳗鲡精巢并促进精子的发生。

介导鱼类孕激素快速、非基因作用的受体研究进展

许多研究发现某些孕激素受体介导的生物学反应较迅速,而经典的通过基因起作用的孕激素核受体介导的生物学反应都较慢,因此有学者提出生物体可能存在不通过基因起作用的孕激素受体,并研究了其结构和功能,探讨了其快速反应的机制。迄今为止,在鱼类已发现了3类可能的非基因作用的膜受体。第1类为孕激素脂联素受体家族(PAQR)的3个成员,即PAQR7(mPRα),PAQR8(mPRβ)和PAQR5(mPRγ),这些成员存在于多种硬骨鱼类中,具有和G蛋白偶联受体(GPCRs)相似的7次跨膜结构域。其中对mPRα和mPRβ的研究较多,它们可以诱导鱼类卵母细胞成熟和增强鱼类精子的活动性。第2类为孕酮受体膜组成部分(PGRMCs),是一类小分子蛋白。目前发现有PGMRC1和PGMRC2两种,对PGMRC1的研究较多,它的作用与mPRβ的作用相似,都参与孕酮的调节作用。第3类是孕激素核受体(nPRs),研究发现一些细胞中的孕激素核受体也能够参与介导孕激素的快速生物学反应。本文对介导鱼类非基因作用的孕激素受体在结构、功能和作用机制等方面的研究进展进行了介绍。

多子小瓜虫滋养体糖蛋白残基的种类和分布研究

应用伴刀豆凝集素A、麦胚凝集素、大豆凝集素和荆豆凝集素Ⅰ,检测寄生于金鱼皮肤、鳃和鳍上的多子小瓜虫滋养体糖蛋白残基的种类和分布。研究结果发现,伴刀豆凝集素A和麦胚凝集素免疫阳性染色在金鱼皮肤、鳃和鳍寄生的滋养体上均有分布,麦胚凝集素免疫阳性染色强于伴刀豆凝集素A,未见有大豆凝集素和荆豆凝集素Ⅰ免疫阳性染色。鳃上寄生的滋养体伴刀豆凝集素A免疫阳性染色最强,皮肤次之,鳍最弱。鳍上寄生的滋养体麦胚凝集素免疫阳性染色最强,皮肤次之,鳃最弱。研究结果表明,滋养体有单糖D-甘露糖和D-葡萄糖,以及氨基衍生物乙酰氨基葡萄糖。寄生于鳃上的滋养体D-甘露糖和D-葡萄糖可能较多,寄生在鳍上的滋养体乙酰氨基葡萄糖可能较多。

17α-P和PGE_2暴露对中华乌塘鳢排卵以及嗅觉系统孕酮和PGE_2受体表达的影响

将性成熟中华乌塘鳢(Bostrichthys sinensis)分别暴露于性信息素17α-P和PGE2 24 h和48 h后,检测其排卵率,并应用免疫细胞化学(SABC)法检测嗅觉系统上17α-P受体(PR)和PGE2受体(EPs)免疫阳性细胞数量的变化。结果发现暴露后雌鱼排卵率升高,且暴露48 h后的排卵率高于暴露24 h后的排卵率;嗅觉系统PR和EPs免疫阳性细胞数量增加。雌鱼排卵率的升高与PR和EPs免疫阳性细胞数量的增加具有一致性。研究结果提示,环境中的17α-P和PGE2有可能通过中华乌塘鳢嗅觉系统受体PR和EPs的介导,影响其生殖状态。

大黄鱼(Pseudosciaena crocea)致病性维氏气单胞菌的分离鉴定与药敏特性研究

本研究从自然发病的养殖大黄鱼(Pseudosciaena crocea)肝脏处分离得到1株优势菌9L2,经形态学观察和传统生理生化鉴定,显示该菌为发酵型革兰氏阴性短杆菌,有动力,氧化酶阳性,水解赖氨酸及色氨酸等。利用Biolog细菌鉴定方法进行种属鉴定,确定9L2为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii),相似性达100%。同时对其16S rDNA基因进行PCR扩增、测序和系统发育分析,结果表明该菌与气单胞菌属的菌株亲缘关系最近,与维氏气单胞菌(登录号为LMG13695)的16S rRNA基因序列相似性达99.79%。经人工腹腔注射感染吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)的试验结果表明,9L2对罗非鱼的半数致死剂量LD_(50)为1.08×10~3CFU/g。24种抗生素药敏试验结果表明,该菌株对诺氟沙星、新生霉素、呋喃妥因、头孢曲松等13种药物高度敏感,对洛美沙星、卡那霉素等5种药物中度敏感,对利福平、青霉素等6种药物产生耐药性。20种中药体外抑菌试验结果表明,其中11种对致病菌体外抑菌效果较好,平均抑菌浓度范围为0.11—7.20mg/mL。

7株鳗鲡致病性气单胞菌毒力基因胞外产物及其活性比较

为探讨致病性气单胞菌的致病力与其胞外产物和毒力因子之间的关系,联合利用PCR、SDS-PAGE、平板扩散及分子进化等方法对7株鳗源气单胞菌的胞外毒力因子进行比较研究。结果显示,该7株致病菌所含有的胞外毒力基因(hly、aer、ast、act、alt、ahpA、epr和exu)在种类和数量上差异显著,其中hly可能是鳗源气单胞菌重要的致病因子;不同致病菌的胞外蛋白在种类和数量上都存在差异,其中分子质量约为50.7ku的蛋白,其分泌量高且在鳗源气单胞致病菌中较保守;该7株致病菌胞外产物均具有溶血、酪蛋白酶和卵磷脂酶活性,胞外产物活性与毒力基因的分布一致;胞外毒素基因hly和ahpA具有较高的属间保守性,而exu则具有较好的种间特异性。

DCS仿真培训系统软件的开发及实现

简要介绍了分散控制系统（DCS）μXL的仿真训练器软件的设计开发思路，软件采用模块化结构，功能完备。该仿真训练器能较好地适用于操作人员（技术人员及大中专在校生）的技能培训和实习。

高效液相色谱法检测优化诃子没食子酸萃取工艺

为优化诃子的鞣质类抗菌成分的萃取工艺,建立-种定量检测诃子萃取液中没食子酸质量浓度的高 效液相色谱法,其回归方程为4=92.48C-28.566,没食子酸质量浓度在4 - 2 0 μg ·ml^-1范围与峰面积呈良好的线 性关系.所用色谱柱为 Hypersil 0DS （ 4.0 mm×250 mm,5μm ） ,流 动 相 为 F（甲醇）： F （ 0 .1%磷酸 ）= 4 ： 9 6 ,检测 波长 270 mn,流速 1.0 mL · min^-1 ,柱温 25℃.同时利用该方法作为超声辅助萃取诃子没食子酸的评价指标,采用 正交实验设计优化获得最佳萃取工艺条件为溶剂60% 乙醇,料液比 1：2 0 ,温度 50℃：,萃取时间80min.

封闭循环流水养殖的花鳗鲡脂肪酸特征分析

为探寻封闭循环流水养殖模式下养殖的较大型（≥2 kg）花鳗鲡（Anguilla marmorata）各可食部的脂肪酸特征,利用索氏抽提法获得各部位的粗脂肪,以37种脂肪酸甲酯混标标准品为标准,气相色谱外标法检测脂肪酸的组成。检测结果显示,鱼皮中粗脂肪含量最高为26.96%,鱼肉的粗脂肪含量为10.36%;不同可食部的脂肪酸组成基本相似,饱和脂肪酸9种,单不饱和脂肪酸6种,多不饱和脂肪酸8种,饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸间的比例大约都为1∶3∶1,三大类脂肪酸中含量最高的分别为软脂酸C16∶0、油酸C18∶1n9c和二十二碳六烯酸C22∶6n3,油酸在不同可食部中均超过20 g/100 g总脂,C22∶6n3（DHA）在不同可食部中含量在4.42~5.59 g/100 g总脂之间。研究表明,较大型花鳗鲡是人体所需脂肪酸的良好食物来源。

循环水养殖系统培育日本鳗鲡和美洲鳗鲡苗种的研究

采用具有气泡反冲洗型珠子过滤器的循环水养殖系统对日本鳗鲡和美洲鳗鲡进行了苗种培育的研究。2种鳗苗的放养密度约为传统模式的8～10倍,试验期间换水量约为20%～45%。结果显示:日本鳗苗和美洲鳗苗成活率均≥96.74%,高于传统模式。投喂水丝蚓阶段,日本鳗苗特定生长率和饲料系数分别为(7.08±0.08)%/d和4.92±0.03,美洲鳗苗分别为(4.83±0.06)%/d和4.74±0.19。投喂配合饲料阶段,日本鳗苗分别为(2.30±0.19)%/d和1.30±0.02,美洲鳗苗分别为(1.69±0.05)%/d和1.76±0.06。研究表明,该循环水养殖系统可适用于日本鳗苗和美洲鳗苗的培育,并具有节能、减排和无药残等优点,为开发资源节约型和环境友好型的鳗鲡育苗模式提供参考。

一种高效率筛选抗菌中药的微量点菌药敏实验新方法

通常检测药物抗菌活性的方法有试管二倍稀释法、牛津杯法、滤纸片法、平板二倍稀释法等,在筛选具有抗菌活性的中药时,均需预先粗提药材的有效部位,并去除萃取溶剂,操作繁琐、耗时长、效率低。自然界中药用植物种类繁多、数量庞大,为了能够快速高通量筛选其中的抗菌药材,本研究建立了一种简便易行的药敏实验方法。实验利用超微粉碎机将15种中药药材粉碎成粒径为5~10μm微粉后,将药粉按一定比例添入M-H琼脂培养基内,经过121℃高压灭菌20 min,制成不同浓度梯度的固体药敏培养基,再在同一个药敏琼脂平板上同时接种9株致病菌;培养24 h后,没有供试菌菌落形成的最低浓度为该中药的最低抑菌浓度（MIC）,此方法称为超微药粉琼脂稀释法。采用该方法测得中药抑菌浓度与同种药材粗提液的滤纸片法和平板二倍稀释法相比,超微药粉琼脂稀释法测得中药的抑菌效果更显著,三种方法检测获得致病菌对各种中药敏感程度的级别基本一致。三种方法的比较结果说明,超微药粉琼脂稀释法的药敏实验结果准确、灵敏度高,而且操作简便、快捷、耗时短,易于判断;并且一个药敏琼脂平板可同时测试多株致病菌,处理量大,效率高。本法可作为一种从天然植物药材中广泛初步筛选具有抗菌活性中药的高效方法,在实验研究中具有很好的实用价值,为抗菌中药开发应用提供基础的参考数据。

石榴皮有效抑菌部位萃取工艺的比较分析

[目的]优化石榴皮有效抑菌部位的萃取工艺。[方法]采用超声辅助萃取法,选取纯水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、正己烷6种溶剂萃取石榴皮抑菌药液。通过琼脂平板法测定石榴皮抑菌药液对9株水产常见致病菌的最低抑菌浓度,正交试验方法考察溶剂浓度、料液比、温度、超声时间对抑菌率的影响,进一步优化石榴皮抑菌药液的萃取工艺。[结果]比较不同溶剂抑菌效果,表明乙醇为最佳萃取溶剂,其萃取部位平均最低抑菌浓度为0.517 mg/m L。在乙醇体积分数70%、料液比1∶20 g/m L、萃取温度60℃、超声时间40 min的最佳萃取工艺条件下,萃取药液平均最低抑菌浓度为0.442 mg/m L。[结论]研究可为石榴皮在水产养殖细菌性疾病防控中的应用和石榴皮抗菌剂的研制及工业化生产提供理论依据。