外源性ATP对牙龈成纤维细胞NLRP3炎症小体活化的影响

目的 :观察外源性三磷酸腺苷(ATP)对牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)和热灭活牙龈卟啉单胞菌(HP.gingivalis)感染的人牙龈成纤维细胞NLRP3炎症小体(inflammasome)的活化以及下游因子IL-1β分泌的影响。方法:组织块法体外培养人牙龈成纤维细胞(h GFs)获取原代细胞,经5 mmol/L ATP预处理,用100 MOI P.gingivalis、100 MOI HP.gingivalis体外刺激h GFs,实时定量PCR检测NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β的基因表达;Western免疫印迹技术检测细胞内NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白的表达;ELISA法检测白细胞介素1β(IL-1β)的分泌。采用Graphpad prism 6软件包对数据进行t检验或单因素方差分析。结果 :与对照组相比,P.gingivalis下调NLRP3、ASC mRNA,上调IL-1β基因表达,下调NLRP3、IL-1β胞内蛋白水平。HP.gingivalis诱导NLRP3、IL-1β、ASC基因和胞内蛋白的表达,P.gingivalis或者HP.gingivalis单独刺激对Caspase-1 mRNA水平及IL-1β分泌均无影响。ATP/P.gingivalis或ATP/HP.gingivalis共刺激均明显上调NLRP3、ASC、Caspase-1和IL-1β基因及胞内蛋白水平,增加上清液中IL-1β的分泌水平。结论:外源性ATP可调控牙周主要致病菌P.gingivalis感染的人牙龈成纤维细胞NLRP3炎症小体的激活,介导炎症因子IL-1β的成熟与分泌。