雷公藤红素抑制舌鳞癌细胞和人单核/巨噬细胞分泌血管内皮生长因子实验研究

目的探讨雷公藤红素(Tri)对人单核/巨噬细胞(THP-1细胞)、舌鳞癌细胞(Tca8113细胞)分泌血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的影响。方法在酸性微环境中,加入不同浓度的Tri,分别与Tca8113细胞、THP-1细胞+Tca8113细胞、THP-1细胞一起培养72h,ELISA法检测细胞上清液中VEGF、VEGF-C含量,分析Tri对这两种生长因子的影响。结果随着Tri浓度以0、5、10、20、50μg/m L逐渐增高,各组的VEGF、VEGF-C值逐渐降低,且均与Tri浓度成负相关(P均<0.001)。VEGF值:THP-1组分别为(57.41±2.13)、(53.12±1.23)、(46.43±2.11)、(44.24±1.14)、(38.15±0.93)μmol/L;Tca8113组分别为(61.45±2.73)、(58.14±1.63)、(55.33±2.15)、(50.22±1.66)、(41.11±1.45)μmol/L;THP-1+Tca8113组分别为(56.72±2.13)、(54.22±1.23)、(47.42±2.14)、(43.52±1.16)、(39.12±0.83)μmol/L。VEGF-C值:THP-1组分别为(61.25±1.13)、(55.34±2.11)、(51.23±1.30)、(48.22±2.13)、(45.21±1.62)μmol/L;Tca8113组分别为(61.33±2.16)、(57.43±2.35)、(53.12±2.62)、(49.43±2.34)、(43.13±1.65)μmol/L;THP-1+Tca8113组分别为(60.35±2.13)、(55.74±2.15)、(50.13±1.61)、(47.42±2.14)、(40.11±1.55)μmol/L。THP-1+Tca8113细胞中各Tri剂量组VEGF、VEGF-C水平与THP-1细胞中各Tri剂量组的VEGF、VEGF-C水平相近,差异无统计学意义(P>0.05),但均低于Tca8113细胞中各Tri各剂量组VEGF、VEGF-C水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论随Tri浓度的增加,Tri对THP-1和Tca8113细胞分泌VEGF、VEGF-C因子的抑制作用逐渐增强,THP-1细胞可提高Tri对VEGF、VEGF-C的抑制作用,有助于抑制舌癌的生长和转移。

雷公藤红素联合顺铂对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞作用机制的研究

目的探讨雷公藤红素联合顺铂对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞作用机制。方法将Tca8113细胞分为对照组(0μmol/L顺铂和0μg/m L雷公藤红素)、顺铂组(15μmol/L顺铂)、雷公藤红素组(50μg/m L雷公藤红素)以及联合组(15μmol/L顺铂和50μg/m L雷公藤红素),MTT法检测细胞活力,酶联免疫吸附法测定血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、抗凋亡蛋白(Bcl-2)、凋亡蛋白(Bax)水平。结果顺铂组、雷公藤红素组以及联合组Tca8113细胞存活率分别为:(0.61±0.12)%、(0.59±0.12)%、(0.27±0.11)%,顺铂组、雷公藤红素组Tca8113细胞存活率低于对照组的(1.00±0.00)%,差异有统计学意义(P<0.05),联合组Tca8113细胞存活率低于对照组、顺铂组与雷公藤红素组,差异有统计学意义(P均<0.05),雷公藤红素组Tca8113细胞存活率低于顺铂组,但差异无统计学意义(P>0.05);顺铂组、雷公藤红素组Tca8113细胞VEGF、VEGF-C、Bcl-2水平低于对照组[VEGF:(39.14±1.78)μmol/L、(41.11±1.45)μmol/L比(61.45±2.73)μmol/L,P<0.05;VEGF-C:(43.11±1.37)μmol/L、(43.13±1.65)μmol/L比(61.33±2.16)μmol/L,P<0.05;Bcl-2:(52.47±0.98)μmol/L、(53.47±1.03)μmol/L比(78.47±1.33)μmol/L,P<0.05],Bax水平高于对照组[(45.14±0.89)μmol/L、(44.14±1.12)μmol/L比(43.14±1.36)μmol/L,P<0.05)];联合组VEGF、VEGFC、Bcl-2水平显著低于对照组、顺铂组与雷公藤红素组[VEGF:(23.1±2.13)μmol/L分别与(61.45±2.73)μmol/L、(39.14±1.78)μmol/L和(41.11±1.45)μmol/L比较,P<0.05;VEGF-C:(21.45±1.47)μmol/L分别与(61.33±2.16)μmol/L、(43.11±1.37)μmol/L和(43.13±1.65)μmol/L比较,P<0.05;Bcl-2:(36.47±1.25)μmol/L分别与(78.47±1.33)μmol/L、(52.47±0.98)μmol/L和(53.47±1.03)μmol/L比较,P<0.05];Bax水平高于对照组、顺铂组与雷公藤红素组(79.14±1.45)μmol/L分别与(43.14±1.36)μmol/L、(45.14±0.89)μmol/L和(44.14±1.12)μmol/L比较,P<0.05];雷公藤红素组VEGF、VEGF-C、Bcl-2、Bax水平与顺铂组相近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论雷公藤红素联合顺铂对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞作用优于顺铂和雷公藤红素单独作用,作用机制可能与其抑制VEGF、VEGFC、Bcl-2表达,促进Bax表达相关。

雷公藤红素对单核／巨噬细胞在舌癌中的影响

目的探讨雷公藤红素（Tri）对人单核／巨噬细胞系（THP-1细胞）和舌癌细胞（Tca8113）的影响。方法在酸性微环境中，加入不同浓度的Tri分别与Tca8113细胞、THP-1细胞＋Tca8113细胞、TH-1细胞进行培养24h、48h、72h后，MTT检测州在不同的浓度下，THP-1细胞对Tca8113的杀伤作用。结果THP-1细胞单独培养，随着Tri浓度的升高，细胞数量先增加后减少；THP-1细胞＋Tca8113细胞混合培养以及Tca8113细胞的单独培养，随着Tri浓度的升高，细胞数量逐渐减少，与浓度成负相关（r=-0．452，P〈0．05）。结论Tri在低浓度时，能促进THP-1细胞杀Tca8113细胞的作用，但浓度过大时，则有明显的杀伤THP-1细胞的作用。

雷公藤红素联合平阳霉素对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察雷公藤红素联合平阳霉素对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响。方法:对Tca8113细胞进行常规培养,应用MTT法测定不同浓度雷公藤红素、平阳霉素、雷公藤红素联合平阳霉素(联合组)对Tca8113细胞的增殖抑制作用,采用流式细胞学对Tca8113凋亡细胞进行定量分析。结果:联合组对Tca8113细胞的增殖抑制率明显高于两药物单用组,各时间点差异具有统计学意义(P<0.05);与空白组比较,各用药组Tca8113细胞的凋亡率明显升高,联合组细胞的凋亡率明显高于两药物单用组,24、48 h比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:雷公藤红素与平阳霉素联合用药可提高Tca8113细胞增殖率和凋亡率,雷公藤红素具有化疗增敏作用。

miRNA-20a-BCL-2信号通路介导雷公藤红素、平阳霉素对舌鳞癌细胞增殖与侵袭的实验研究

目的探讨miRNA-20a-BCL-2信号通路介导雷公藤红素、平阳霉素对舌鳞癌细胞(Tca8113)增殖与侵袭。方法 Tca8113细胞液于DMEM培养液中培养,作为对照组;雷公藤红素组、平阳霉素组、联合组(雷公藤红素+平阳霉素)的培养方法为10%胎牛血清DMEM培养液分别含有20μg/mL的雷公藤红素、20μmol/mL的平阳霉素以及20μg/mL雷公藤红素+20μmol/mL平阳霉素。以上各组每孔设6个平行样,培养48h,培养结束后,检测Tca8113细胞活力、凋亡、侵袭情况,实时荧光逆转录法测定miRNA-20a、BCL-2 mRNA水平,酶联免疫吸附法测定MMP-9、cyc D1、VEGF蛋白水平。结果与对照组比较,雷公藤红素组、平阳霉素组、联合组增加Tca8113细胞抑制率[(72.56±0.98)%、(59.43±0.44)%、(92.44±0.16)%比(0.00±0.00)%,P<0.05],Tca8113细胞凋亡率[(42.32±9.43)%、(43.09±8.21)%、(60.54±9.88)%比(29.34±8.32)%,P<0.05],降低Tca8113miRNA-20a RNA水平[(1.53±0.17)、(1.52±0.20)、(0.53±0.10)比(1.97±0.25),P<0.05],Tca8113 BCL-2RNA水平[(4.13±0.36)、(4.16±0.39)、(2.32±0.29)比(5.16±0.21),P<0.05)],Tca8113穿膜数[(434±25)个、(458±54)个、(223±33)个比(757±19)个,P <0.05],Tca8113 MMP-9水平[(465.32±15.32)μmol/L、(469.98±43.76)μmol/L、(196.14±19.23)μmol/L比(567.98±23.76)μmol/L,P<0.05],Tca8113cyc D1水平[(345.87±13.98)μmol/L、(352.87±16.98)μmol/L、(172.87±9.54)μmol/L比(578.00±15.09)μmol/L,P <0.05],Tca8113 VEGF水平[(630.87±14.87)μmol/L、(625.87±15.76)μmol/L、(245.76±32.76)μmol/L比(916.91±28.97)μmol/L,P<0.05]。结论雷公藤红素联合平阳霉素能抑制miRNA-20a-BCL-2信号通路及下游细胞因子的表达,进而抑制Tca8113增殖、侵袭。

基于miR-224和TPD52探讨雷公藤红素诱导舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡的机制

目的基于miR-224和TPD52探讨雷公藤红素诱导舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡的机制。方法分为对照组(舌癌Tca8113细胞组)和雷公藤红素低、中、高剂量组(12.5、25和50μg/ml雷公藤红素),以上各组每孔设6个平行样,培养72 h。培养结束后测定各组细胞癌细胞活力,单克隆形成数,细胞凋亡率,miR-224与TPD52 mRNA水平,Bax和Caspases-3蛋白水平。结果雷公藤红素低、中、高剂量组细胞A值、细胞存活率水平和单克隆形成数目低于舌癌Tca8113细胞组,凋亡率高于舌癌Tca8113细胞组,差异有统计学意义(P<0.01),且随着雷公藤红素剂量的增加,雷公藤红素各剂量组A值、细胞存活率水平和单克隆形成数目逐渐降低,凋亡率水平逐渐升高,剂量-效应关系明显(P<0.01)。雷公藤红素低、中、高剂量组miR-224 mRNA表达水平、Bax和Caspases-3蛋白表达水平高于舌癌Tca8113细胞组,TPD52 mRNA低于Tca8113细胞组,差异有统计学意义(P<0.01),随着雷公藤红素剂量的增加,雷公藤红素各剂量组miR-224 mRNA表达水平、Bax和Caspases-3蛋白表达水平逐渐升高,TPD52 mRNA表达水平逐渐降低,剂量-效应关系明显(P<0.01)。结论雷公藤红素可诱导舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡;其机制可能与雷公藤红素促进miR-224表达,抑制TPD52的表达进而促进Bax和Caspases-3高表达有关。