IL-17及IL-22在大鼠肝移植排斥反应中的表达及意义

目的探讨IL-17及IL-22在大鼠肝移植排斥模型及耐受模型中的表达差异及意义。方法建立大鼠原位肝移植动物模型,分为排斥组和耐受组(各15只),取术后1、3、5、7 d大鼠血浆及肝组织标本,应用ELISA检测其血浆IL-17浓度,应用免疫组化染色、Western blot及荧光定量PCR检测其肝组织内IL-17及IL-22的细胞、蛋白及mRNA的表达情况。结果大鼠原位肝移植模型建立成功,结果显示排斥组IL-17血浆浓度显著高于耐受组;在肝组织中,IL-17及IL-22的淋巴细胞阳性率、蛋白表达水平及mRNA表达水平排斥组显著高于耐受组,且排斥组肝组织中STAT3 mRNA表达水平升高。结论 IL-17及IL-22参与肝移植术后急性排斥反应的发生过程,并推测其通过激活STAT3通路发挥效应。

阿西美辛海藻酸钙凝胶微丸释药影响因素考察

目的:考察阿西美辛海藻酸钙凝胶微丸的释药机制。方法:采用滴制法制备阿西美辛海藻酸钙微丸,考察海藻酸钠浓度,钙离子浓度,投药量,滴头直径大小对药物释放的影响。结果:海藻酸钠浓度增加,钙离子浓度增加,滴头直径增加,释药速率减慢。结论:在体外释放度实验中,阿西美辛海藻酸钙凝胶微丸具有良好的缓释作用,海藻酸钙凝胶微丸是一种非常有潜力的药物载体。

大鼠骨髓间充质干细胞体外培养条件的优化及生物学特性

目的建立一种新的高效体外骨髓间充质干细胞纯化培养方法,并对所获得细胞进行生物学行为研究。方法采用全骨髓培养获得原代骨髓间充质干细胞,经体外成脂、成骨诱导分化并检测细胞表面分子表达对所获得干细胞进行鉴定,传代后低密度接种(3×103/cm2)结合机械擦除对所培养细胞进行纯化,并对未纯化及纯化细胞分别进行集落形成单位实验、生长曲线及细胞周期分析来研究其生物学特性。结果全骨髓贴壁法可以成功培养出骨髓间充质干细胞,细胞呈现干细胞特性生长;可在体外成功地进行成脂、成骨分化;阴性表面标记分子CD34、CD45表达率均小于2%,阳性表面标记CD73、CD90表达率均高于95%。经纯化后的细胞具有更优的生物学行为,表现在:克隆形成率达到(28.80±5.00)%(P<0.01);培养12d后细胞数量增加(26.18±4.80)倍(P<0.05);处于S+G2/M期的细胞比例达到(45.98±1.60)%(P<0.01)。结论低密度接种结合机械擦除方法可以获得高纯度骨髓间充质干细胞,且该细胞具有更佳的生物学特性。

芹菜素对MDA-MB-231细胞增殖及侵袭转移的影响

目的:研究芹菜素对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及侵袭转移能力的影响,探讨其作用机制。方法:芹菜素处理MDA-MB-231细胞,MTT法及流式法检测细胞增殖、粘附和周期变化;Millicell小室检测新生血管形成、侵袭转移能力的改变;免疫细胞化学检测Bcl-2、Bax、cyclinB1、VEGF、MMP-9、E-cd蛋白的表达差异。结果:芹菜素明显抑制MDA-MB-231细胞增殖,诱导细胞凋,G2/M期细胞比例由4.79%增至36.12%(P<0.05);细胞的黏附、新生血管形成能力均显著降低;侵袭转移穿膜细胞数明显低于对照组,分别由88.67、106.33降至45.67、68(P<0.05);Bcl-2、cyclinB1、VEGF、MMP-9蛋白表达明显降低;Bax,E-cd的表达则增加。结论:芹菜素有效抑制MDA-MB-231细胞增殖,阻滞细胞于G2/M期,诱导细胞凋亡;抑制细胞粘附、新生血管形成、侵袭与转移的能力,其机制与抑制Bcl-2、cyclinB1、VEGF、MMP9表达,促进Bax、E-cd表达有关。

HIF-1α表达对人乳腺癌细胞侵袭转移能力的影响

为研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在人乳腺癌细胞中的表达及其与乳腺癌细胞侵袭转移能力的相关性,采用在培养基中加入CoC12模拟化学缺氧培养细胞,RT-PCR和Western-blot、免疫细胞化学检测HIF-1α在人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231中mRNA水平和蛋白质水平在缺氧前后的表达差异,及Millicell小室人工重组基底膜侵袭迁移实验检测缺氧前后两株细胞侵袭迁移能力的改变.结果发现:缺氧后,两株细胞的HIF-1αmRNA水平和蛋白质水平均较缺氧前增高(p<0.01),MDA-MB-231和MCF-7之间有显著差异(p<0.01);MDA-MB-231的侵袭转移能力明显增加(p<0.01),MCF-7的侵袭转移能力略有增加(p<0.05).表明缺氧上调HIF-1α转录及蛋白表达,进而促进乳腺癌细胞的侵袭转移能力.

胰腺癌组织中硫酸软骨素蛋白多糖4的表达及其临床意义

目的探讨硫酸软骨素蛋白多糖4（chondroitin sulfate proteoglycan 4,CSPG4）在胰腺癌（pancreatic carcinoma）中的表达及其临床意义。方法收集2007年6月至2010年6月西南医院肝胆外科的胰腺导管腺癌及正常胰腺组织（距肿瘤边缘〉2 cm）标本各160例,其中男性124例,女性36例;年龄33-75（56.98±10.75）岁。应用免疫组织化学染色法检测其中CSPG4的表达,分析CSPG4的表达与临床病理参数的相关性;采用Kaplan-Meier法分析胰腺癌中CSPG4的表达与患者预后的关系,Cox回归模型分析胰腺癌患者预后的影响因素。结果胰腺导管腺癌组织中CSPG4的阳性表达率显著高于正常胰腺组织（46.25%vs 10.00%,P〈0.01）。胰腺癌中CSPG4的表达与有无淋巴结转移或血管侵犯、肿瘤T分期、TNM分期显著相关（P〈0.01）。胰腺癌中CSPG4阳性表达患者术后总生存率显著低于阴性表达者（P〈0.01）。CSPG4的表达是影响胰腺癌患者预后的独立危险因素之一（P〈0.01）。结论 CSPG4在胰腺导管腺癌中异常高表达,其表达水平是评估患者预后的独立预测指标,提示CSPG4可能成为胰腺癌治疗的一个新靶点。

骨髓间充质干细胞在肝细胞损伤恢复中的作用

目的:研究骨髓间充质干细胞(BMSCs)在肝细胞损伤恢复中的作用,并探讨可能机制。方法:(1)培养原代肝细胞及BMSCs并鉴定;(2)建立损伤肝细胞模型;(3)MTT法检测不同条件下肝细胞增殖情况;(4)加入BMSCs、bax抑制剂、BMSCs+bax抑制剂进行共培养,采用Western-blot和real-time PCR法检测TGF-β1、bcl-2、bax等指标。结果:(1)BMSCs+HGF共培养组中的OD值明显高于BMSCs或HGF单独联合培养组(P<0.05),BMSCs与HGF单独共培养组之间OD值差异无统计学意义,而它们与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)bax1抑制剂共培养组与BMSCs共培养组的OD值差异无统计学意义,两者与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),BMSCs+Bax-1共培养组的OD值与BMSCs或bax1共培养组差异无统计学意义。(3)Western-blot法及real-time PCR检测结果提示TGF-β1、bax在bax1抑制剂共培养组与BMSCs共培养组中均显著低于对照组(P<0.05),而BMSCs+Bax-1抑制剂共培养组与两者单独共培养差异无统计学意义,Bcl-2结果与前两者相反。结论:BMSCs在肝细胞损伤恢复中能促进肝细胞增殖,BMSCs促进肝细胞增殖通过调节TGF-β1/bcl-2(bax)这个信号通道减少凋亡来实现的。

口服二乙基亚硝胺诱导建立同系小鼠肝硬化模型

目的尝试采用二乙基亚硝胺(DEN)喂饲小鼠成功诱导和建立小鼠肝硬化模型。方法选取纯系C57BL/6小鼠60只,随机分为实验组和对照组,各30只。实验组小鼠喂饲含DEN的饮水诱发肝硬化,对照组小鼠喂饲蒸馏水。采用HE染色、Masson染色等方法观察两组小鼠肝脏组织形态、纤维化,并连续30 d监测两组小鼠体质量变化,用行为学方法观察两组小鼠的自主运动差异判断其精神状态变化。结果随着喂饲DEN时间的增加,HE染色和Masson染色均显示实验组小鼠肝脏纤维化组织增生,肝硬化程度逐渐加重,各时间点的半定量评分系统评分与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组小鼠的体质量随着DEN喂饲时间的增加而明显降低,而对照组小鼠的体质量却略有增加,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组小鼠的运动总路程少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DEN喂饲可诱发C57BL/6小鼠逐渐从肝纤维化到肝硬化,最终成功建立了前所未有的可作为研究人类肝硬化的一种理想动物模型。

钙信号对乳腺癌细胞HIF-1α表达及侵袭转移能力的影响

目的:探讨低氧条件下钙信号对乳腺癌细胞HIF-1α表达及其侵袭转移能力的影响.方法:在培养基中加入150μmol/LCoCl2模拟化学缺氧;将实验分成对照组、CoCl2组、CoCl2和钙通道阻滞剂维拉帕米(verapamil,VPL)组.用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组中HIF-1α的mRNA水平;蛋白印迹实验和免疫细胞化学检测乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231中HIF-1α蛋白的表达;Millicell小室人工重组基底膜侵袭迁移实验检测各实验组中细胞侵袭迁移能力的改变.结果:两株细胞各实验组都存在HIF-1α的mRNA转录和蛋白的表达,CoCl2组HIF-1αmRNA水平和蛋白水平较对照组显著增高(P<0.01),加VPL干预后,HIF-1αmRNA水平和蛋白水平都大大降低(P<0.01),MCF-7和MDA-MB-231间有显著差异(P<0.01);两株细胞的侵袭迁移能力VPL+CoCl2组较CoCl2组明显降低(P<0.05),MDA-MB-231更明显(P<0.01).结论:阻断钙信号转导途径可以使HIF-1α的表达下调,进而抑制乳腺癌细胞的侵袭转移能力.

梗阻性黄疸患者mtDNA损伤缺失及突变分析

目的对梗阻性黄疸患者mtDNA片段的缺失及突变进行分析，为探讨mtDNA缺失及突变在胆汁淤积性肝损伤的作用机制打下基础。方法严格按照入组条件随机选取梗阻性黄疸患者30例（病例组）和对照组10例，利用17对相互错配重叠的引物进行PCR扩增，并结合大量基因测序结果对梗阻性黄疸患者肝细胞mtDNA的损伤缺失情况进行初步定位。结果梗阻性黄疸患者肝部分细胞mtDNA分别出现8429～9591约1．1kb、16024-60约0．6kb、1889～3031约1．1kb的片段缺失和4977bp片段的共同缺失，以及D-loop区的部分碱基的高突变。结论梗阻性黄疸患者mtDNA存在多片段缺失及多点突变。