浅谈小学语文习作教学过程生活化的策略

习作教学是小学语文教学中的重要内容,其不仅能提高学生自主思考、独立表达能力,也能使教师通过学生的习作掌握其学习状态和思维特点,以此充分把控教学重点。围绕目前小学语文习作教学过程现状展开分析,并提出教学过程生活化的有效策略。

鸡生长激素受体胞外区原核表达分析

生长激素与其靶细胞膜表面的生长激素受体(GHR)结合,可以促进动物生长发育和调节新陈代谢。为获得鸡GHR蛋白,试验通过PCR扩增获得GHR胞外区序列。经双酶切后连接入原核p ET-32a(+)表达载体,构建了鸡GHR胞外结构域的原核表达载体。将该重组质粒转入E. coli BL21(ED3)表达菌株。通过IPTG诱导其表达GHR重组蛋白,并探讨不同IPTG浓度、诱导时间和诱导温度等条件对鸡GHR重组蛋白表达的影响。结果表明:诱导GHR重组蛋白表达的最适条件为IPTG终浓度2.00 mmol/L、诱导时间为4 h、培养温度为37℃,在此条件下,GHR重组蛋白表达量最高。研究结果为后续GHR抗体制备奠定了基础。

TAB182维持RPA2 mRNA稳定性促进DNA同源重组修复的研究

目的探讨TAB182促进同源重组(HR)修复的相关调控分子及机制。方法利用shRNA敲低人乳腺癌MCF-7细胞中的TAB182基因,TAB182敲低的MCF-7细胞为沉默组,使用shRNA阴性对照物的MCF-7细胞为TAB182阴性对照组。通过RNA测序分析,筛选与TAB182相关差异表达的HR修复基因。qRT-PCR验证相关基因的mRNA表达,Western blot验证相关蛋白的表达。RAD51和BrdU免疫荧光检测DNA断裂末端形成的3′单链DNA(ssDNA);流式细胞术检测细胞周期阻滞和细胞凋亡;集落形成实验检测细胞的放射敏感性。结果RNA测序分析和qRT-PCR验证结果一致,TAB182沉默组细胞中RPA2的mRNA表达降低(t=17.97,P<0.05)。相比于TAB182阴性对照组细胞,TAB182沉默组细胞RPA2在蛋白水平也显著减少。相比于TAB182阴性对照组,TAB182沉默组细胞中RAD51焦点(foci)的表达显著降低;3′ssDNA结合蛋白标志物BrdU在TAB182沉默组细胞的细胞核中foci形成显著减少。在放射菌素D作用后的第4、8、12 h,相比于TAB182阴性对照组,TAB182沉默组细胞RPA2 mRNA的衰减加快(t=5.37、3.79、3.69,P<0.05)。相比于TAB182阴性对照组,TAB182沉默组细胞放射敏感性增加(t=3.48,P<0.05);且TAB182沉默组放射诱发的凋亡率显著增加(t=11.05,P<0.05)、照射后24 h的周期阻滞时间延长(t=8.40,P<0.01)。结论TAB182通过维持RPA2 mRNA的稳定性,促进RPA2的表达,在DSBs的同源重组修复通路中发挥作用。TAB182的缺失可增强肿瘤细胞的放射敏感性。