肥胖对14岁以上扁桃体切除术患者术后出血的影响

目的探讨年龄>14岁患者扁桃体切除术后出血的发生率,评价与术后再出血相关的危险因素。方法选取2012年8月—2018年8月中南大学湘雅二医院840例住院行扁桃体切除术的成年患者(年龄>14岁)的临床资料,同时采用Logistic回归模型评估其危险因素。结果扁桃体切除术后出血发生率为3.21%(27/840),扁桃体切除术后出血最常发生在手术后的5或6 d,分别有11和8例患者。男性、慢性阻塞性呼吸暂停综合征、BMI≥30 kg/m2患者扁桃体切除术后出血发生率更高(P<0.05)。多因素Logistic回归分析提示,肥胖[■=3.914,(95%CI=1.473,10.401),P=0.006)]和男性[■=10.331,(95%CI=2.981,35.8041),P=0.000)]是扁桃体切除术后出血发生的独立危险因素。结论肥胖和男性是成人扁桃体切除术后出血的独立危险因素,在扁桃体切除术前以减轻体重为目的营养方法对于预防术后并发症的发生很有必要。

斑马鱼Slc26A4基因敲除品系的构建

目的SLC26A4是大前庭水管综合征(enlarged ves-tibular aqueduct syndrome,EVAS)的致病基因,也是中国第二位致聋基因。研究发现SLC26A4突变能够导致Pendred综合征(PS),包括甲状腺肿、听力丧失和前庭导水管增大,但其具体的分子机制尚不清楚。为了研究该基因在内耳发育中的具体分子作用机制,本文利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建斑马鱼Slc26A4基因敲除品系。方法首先通过分析软件筛选出Slc26A4基因的敲除位点,利用PCR技术扩增该基因的sgDNA,再以sgDNA为模板转录得到sgRNA,将sgRNA和Cas9蛋白共同注射到斑马鱼胚胎中。结果经基因型鉴定,CRISPR/Cas9系统对斑马鱼Slc26A4基因的敲除有效。但基因敲除不影响整体胚胎发育,斑马鱼外观未出现明显畸形。结论使用CRISPR/Cas9系统成功建立了斑马鱼Slc26A4基因敲除突变品系,为研究该基因在内耳发育过程中的作用奠定了基础。

Dandy-Walker综合征致病基因的研究进展

Dandy-Walker综合征为罕见的先天性脑发育异常,是一组遗传方式不同,临床表现多样化的多因子遗传性疾病。针对Dandy-Walker综合征进行的连锁分析和基因定位揭示了Dandy-Walker综合征的多种表型与基因型之间的相互关系,为尚未明确的发病机制及分子基础的深入研究提供了思路,并为基因诊断和治疗明确了方向。

CBL联合模块教学在八年制耳鼻喉科见习中的应用

目的探讨CBL(case-based learning,CBL)联合模块教学在八年制学生耳鼻咽喉头颈外科见习中的教学效果。方法教学对象为在本科室耳鼻咽喉头颈外科见习的2014级及2015级八年制学生共91名,其中2014级学生共55名为对照组,采用传统教学法;2015级学生共36名为试验组,采用CBL联合模块教学。通过期末考试成绩及调查问卷评价教学效果及教学满意度。结果试验组学生的期末考试总分优于对照组(P<0.05);调查问卷显示试验组在培养临床思维、加深对学科理解、加强实践能力方面显著优于对照组(P<0.05);结论与传统教学法相比CBL联合模块教学能更好地让八年制学生深入学习耳鼻喉相关知识,更能激发学生学习兴趣,培养其临床思维能力。

湖南郴州非综合征型聋患者GJB2、SLC26A4和线粒体DNA12SrRNA基因突变分析

目的探讨湖南郴州非综合征型聋患者的分子病因特点。方法采取湖南郴州154名非综合征型聋患者的外周血,提取DNA,采用基因芯片筛查GJB2、SLC26A4和线粒体DNA12SrRNA基因的热点突变,基因芯片法未确诊的样本则采用DNA测序法进一步检测。结果两种方法共在34例(22.08%,34/154)患者中检出7种GJB2基因突变,其中235delC(13.63%,21/154)发生率最高,其次是299delAT(9.09%,14/154);在8例伴有大前庭水管的患者中检测出7种SLC26A4基因突变,包括一种新突变Q696X;3例患者被检出线粒体DNA12SrRNA基因突变。结论湖南郴州非综合征型聋患者中GJB2、SLC26A4和线粒体DNA12SrRNA基因突变的发生率与中国大部分地区相似,Q696X为新发现的SLC26A4基因突变。

基因芯片联合DNA测序法在大前庭水管综合征患者基因诊断中的应用

目的应用基因芯片联合DNA测序法对大前庭水管综合征患者进行基因突变检测,分析中国人患者的基因型及探讨其基因诊断策略。方法采集30例大前庭水管综合征患者的外周血,提取基因组DNA。耳聋基因芯片筛查SLC26A4基因的2个突变ⅣS7-2A>G和H723R,发现纯合突变或复合杂合突变即停止筛查。如未发现突变或发现单纯杂合突变则采用DNA测序法检测SLC26A4基因其余外显子,直至发现另一个突变。如仍未发现突变则检测FOXI1基因。结果在30例大前庭水管综合征患者中,基因芯片法联合DNA测序法共检出28例有SLC26A4基因突变(93.33%)。共发现16种突变类型,其中ⅣS7-2A>G突变的发生率最高,其次为H723R。新发现4种突变类型(G368X、ⅣS8-1G>T、ⅣS13+9C>T和Q696X),未发现FOXI1基因突变。结论在中国人大前庭水管综合征患者中,SLC26A4基因的ⅣS7-2A>G突变的发生率最高,其次为H723R。针对这两个突变热点的基因芯片适用于对中国人群进行SLC26A4基因突变的筛查。发现的4例新突变类型对大前庭水管综合征的病因研究和基因诊断具有重要意义。

极重度感音神经性聋儿童的病因学分析

目的分析申请人工耳蜗植入患者的病因学情况,明确环境及遗传因素在极重度感音神经性聋患者发病中的作用。方法对2004年11月～2011年6月申请行人工耳蜗植入的386例极重度感音神经性耳聋患者进行回顾性调查,总结分析患者体格检查,听力学及影像学检查资料,对患者术前情况进行评估。对已知的耳聋的危险因素的分布情况进行探讨,并对常见的致聋病因进行多因素分析。方法在114例患者中发现162个导致耳聋的危险因素,包括11个产前因素,88个围产期因素,45个产后因素和21个遗传因素。统计表明内耳畸形、耳毒性药物、遗传家族史、产后缺氧或发热以及中耳炎是可能引起极重度感音神经性耳聋的因素,而内耳畸形是极重度感音神经性耳聋最主要的危险因素。结论遗传和环境因素均可导致极重度聋。对公众普及保健知识,避免使用耳毒性药物对耳聋防治非常重要。听力筛查有助于尽早干预,减少极重度耳聋的发生。

斑马鱼adgrf3a基因敲除品系的构建

adgrf3a基因编码的ADGRF3A蛋白是黏附类G蛋白偶联受体(aGPCRs)家族的一员,主要在受精后5 d的胚胎以及成年斑马鱼的头部和性腺中表达。它含有一个GPS蛋白水解位点和7个跨膜结构域,与G蛋白相互作用行使其功能。斑马鱼是研究早期发育和成体内生理和病理的重要模式生物。为了研究adgrf3a在斑马鱼早期发育中的作用,我们利用CRISPR-Cas9技术构建了adgrf3a基因敲除斑马鱼品系。首先,通过分析软件筛选出该基因的敲除位点,利用聚合酶链式反应扩增该基因的向导DNA(sgDNA),再以sgDNA为模板进行体外转录得到向导RNA(sgRNA)并纯化回收,将纯化后的sgRNA和Cas9蛋白共同注射到斑马鱼1细胞期胚胎中,得到F0代嵌合体。随后,对斑马鱼胚胎进行基因编辑的有效性检测,结果表明,注射的胚胎出现了碱基缺失的现象,即sgRNA有效,将剩余胚胎培养至成鱼。将嵌合体与野生型斑马鱼杂交所得的F1代斑马鱼进行基因型鉴定,筛选adgrf3a突变杂合子,并对其adgrf3a突变位点进行Sanger测序,建立能够稳定遗传的adgrf3a基因杂合突变品系。之后,adgrf3a突变杂合子斑马鱼自交,获得adgrf3a纯合子突变斑马鱼。体视显微镜观察其成像发现,adgrf3a突变纯合子斑马鱼与野生型整体上未出现明显差异,然而,体内组织与器官的发育是否发生变化需要进一步验证。该基因敲除品系的建立为研究adgrf3a在早期发育及病理过程中的作用奠定了基础。

人工耳蜗植入的颅内并发症相关分析

随着人工耳蜗植入(Cochlear Implant, CI)技术日臻成熟,CI现已成为一种相对安全有效的手术。与CI相关的颅内并发症发生率很低,但后果十分严重,需密切观察、及时处理。本文结合文献就脑膜炎、脑脊液漏、颅内血肿、颅内气肿四种CI相关的颅内并发症致病因素、临床表现及处理措施等方面进行综述。

体外受精胚胎移植婴儿先天性聋临床和基因检测分析

目的通过对体外受精胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)技术生育的先天性聋婴儿家庭的患儿及其父母进行基因检测和遗传学分析,从遗传学角度探讨其致聋病因,为预防辅助生殖技术生育听觉缺陷婴儿提供借鉴。方法对三组通过IVF-ET技术生育出先天性聋患儿家庭进行病史和遗传学调查,同时对出生婴儿及其父母进行耳科和全身检查,听力学评估,并通过全外显子组测序(whole exome sequencing,WES)对三组家庭11名成员进行耳聋基因检测和Sanger测序验证所携带耳聋致病基因及突变位点。结果三组家庭通过IVF-ET技术生育5名新生儿,共发生4例先天性感音神经性聋。父母及家族中其他成员均无耳聋表现。WES和Sanger测序结果显示,在三组家庭聋儿及其父母中共发现4种与耳聋相关的基因突变。家庭1突变基因为MYO3A:NM_017433:exon32:c.4462A>G:p.K1488E;MYO15A:NM_016239:exon4:c.3693-2A>G,MYO15A:NM_016239:exon22:c.5638G>A:p.G1880R,该MYO15A基因2个新的突变位点过去未见报道。家庭2突变基因为SLC26A4:NM_000441:exon10:c.1229C>T:p.T410M,SLC26A4:NM_000441:exon19:c.2168A>G:p.H723R。家庭3突变基因为TPO:NM_175721:exon13:c.2404C>T:p.R802W,TPO:NM_175721:exon14:c.2515C>T:p.P839S。结论三组家庭先天性聋患儿均发现已知的耳聋基因突变,其父母携带相同的突变基因,符合遗传规律,其先天性聋与遗传因素有很大相关性。MYO15A基因2个新突变位点的致病性尚待进一步研究。结果提示在应用辅助生育技术时全面耳聋基因筛查的必要性。

人工耳蜗植入术后中耳乳突感染的手术治疗

目的急性化脓性中耳炎是儿童常见疾病,接受人工耳蜗植入的儿童也是中耳乳突感染的高发人群。由于人工耳蜗植入术后中耳乳突的结构改变,易造成感染扩散,甚至累及并需手术取出植入体。本文评估人工耳蜗植入术后中耳乳突感染患儿在常规抗生素治疗基础上,早期外科干预的方法和效果。方法对2015年1月至2019年10月因人工耳蜗植入术后发生中耳乳突感染住院行手术治疗的9例儿童患者,总结其临床表现、外科治疗过程和预后。结果在所有研究对象中,感染相关症状出现时间最早为术后1月,最晚为术后3年4个月。经过外科干预7例感染控制,预后良好。2例因反复感染、炎症累及范围广,最终取出植入体。结论人工耳蜗植入术后中耳乳突区感染,单纯抗生素治疗不能及时控制,应及时进行外科干预。早期手术治疗,可防止感染累及植入体,避免感染导致再次植入手术。

内耳畸形人工耳蜗植入手术难点及其处理

目的:探讨内耳畸形患儿行人工耳蜗植入手术的难点及其处理方法。方法:186例内耳畸形行人工耳蜗植入术的患儿(内耳畸形组)中,孤立的半规管发育不良6例(3.23%),孤立的大前庭导水管综合征137例(73.66%),Mondini畸形26例(13.98%),不全分隔Ⅲ型6例(3.23%),不全分隔Ⅰ型1例(0.54%),内听道狭窄3例(1.61%),耳蜗发育不良7例(3.76%);随机抽取200例内耳结构正常的人工耳蜗植入患儿为对照组。所收集的资料包括内耳异常的类型、术中表现和临床处理策略以及术后言语康复情况。结果:内耳畸形组中,148例次(77.49%)手术顺利,6例次(3.14%)电极插入不完整,29例次(15.18%)术中出现脑脊液井喷,8例次(4.19%)内耳畸形患儿手术中因为圆窗结构异常而开窗位置定位困难。内耳畸形组术中均采用面隐窝入路,17.8%的患儿存在明显的面神经结构异常,明显多于对照组,仅1例患儿在术后1周出现面神经延迟麻痹,治疗后恢复良好;6.81%的内耳畸形患儿采用扩大圆窗入路进行电极插入,明显少于对照组(28%)。内耳畸形组和对照组行人工耳蜗植入的术后言语康复效果比较差异无统计学意义。结论:内耳畸形患儿行人工耳蜗植入术安全可行且效果显著。内耳畸形患儿发生面神经及圆窗等中耳结构异常的概率更高,因此术前应特别注意阅读影像学结果,以预测术中可能发生的风险。术前制定最安全的手术计划,包括电极的类型和开窗的方式,并且手术必须由经验丰富的外科医生实施或者指导,以根据术中所见调整最优的手术方案。

P19ink4d蛋白在耳聋发生和发展中的表达及研究

目的:建立稳定有效的噪声性听觉损伤模型,并观察P19ink4d在小鼠耳蜗中的变化,为探索噪声性聋的发病机制提供新的思路。对极重度感音神经性聋患者进行P19ink4d基因测序,试图发现P19ink4d基因突变致聋的家系,建立国人P19ink4d基因突变谱。方法:将CBA/J小鼠在101dB的宽带噪声持续暴露2h后,通过小鼠听性脑干反应(ABR)阈值测量、耳蜗基膜铺片及DAB毛细胞染色方法检测毛细胞的病理损伤过程,并采用免疫荧光法和Western blot检测基膜P19ink4d蛋白的表达,检测噪声对耳蜗毛细胞形态、数量及对P19ink4d蛋白的影响。在400例重度或极重度感音神经性聋儿童患者中,采用遗传性聋基因芯片排除由4个常见致聋基因突变致聋的患者,对未携带或仅带有单个杂合突变的患者应用PCR-DNA测序法对P19ink4d基因序列进行测定,分析有无突变。结果:噪声刺激后,各实验组听力与刺激前及对照组(未暴露噪声组)相比均明显下降;1d组较其他实验组下降更明显,7d与14d组间听力下降程度无明显差异。通过铺片检测发现随着时间的延长,外毛细胞排列发生混乱、变形以及缺损数量逐渐增加,内毛细胞未见明显缺失。噪声暴露3h后,外毛细胞P19ink4d蛋白免疫荧光染色明显增强,至噪声暴露后24h,P19ink4d蛋白的荧光染色强度基本恢复。通过Western blot检测发现噪声刺激后显示P19ink4d蛋白在3～6h出现暂时性的上调。本研究在400例极重度感音神经性聋患者中均未发现致P19ink4d基因的致病突变。结论:P19ink4d在耳蜗毛细胞上的表达在噪声刺激后显著增加,可能作为特异性基因在噪声性聋的发生、发展中起着重要作用。

伴视力减退的鼻窦黏液囊肿的临床诊断和治疗

目的:总结引起视力减退的鼻窦囊肿的临床表现和治疗要点。方法:回顾性研究2002-2010年间收治的伴有视力下降的鼻窦囊肿患者23例,其中累及额窦或额筛窦10例,单纯累及筛窦6例,累及蝶窦或蝶筛窦7例。患者常以眼部症状为主,因此大多数首诊于眼科。因蝶窦与视神经紧密相邻,蝶窦和蝶筛窦囊肿引起严重视力障碍较其他窦腔囊肿更严重。CT和MRI是确诊鼻窦黏液囊肿的重要手段。对患者实施鼻内镜手术,开放鼻窦开口,清除窦腔内囊肿及行视神经减压。术后均使用激素治疗并常规行鼻内镜复查。结果:术后所有患者眼部突出、复视、眼球运动障碍等症状好转,但视力恢复程度不一,与手术时机和视力下降严重程度有关。未及时手术者视力恢复效果较差,而视力完全丧失无光感者,即使行视神经管减压术,预后仍明显低于有残余视力者。结论:鼻内镜手术是治疗伴视力减退的鼻窦囊肿的有效手段,提高对该病的警惕和早期影像学检查对于其诊断非常重要,早期诊断和及时手术治疗是恢复患者视力的关键。

食管异物致穿孔并发致死性大出血治疗的研究

目的:总结分析食管异物致食管穿孔并发颈动脉或主动脉大出血的临床特点和治疗方法。方法:回顾性分析47例食管异物导致颈动脉和主动脉大出血患者的治疗经过,对异物类型、手术进路及方法和术后处理等进行总结。结果:24例颈段食管异物伴颈动脉大出血者,经食管镜或颈侧切开取出异物后,经颈部切口对动脉瘘口进行修补止血,19例治愈。23例胸段食管异物伴主动脉大出血者,均行开胸手术取异物,并对主动脉瘘口进行修复后,成功抢救3例,死亡20例。结论:对食管异物致食管穿孔损伤颈部动脉或主动脉者,最安全的治疗方式是经颈侧切开或开胸取出异物并进行血管修补和食管修复。对复发性颈总动脉出血者需行动脉结扎。对伴纵隔炎的患者,主动脉瘘口修复后,最好采用食管旷置以控制感染促进穿孔愈合。

中国人非综合征型学语前聋患者Taperin基因突变筛查研究

目的:应用耳聋基因芯片联合DNA测序法对134例非综合征型聋患者进行静纤毛表达的Taperin基因的突变检测,分析该基因在中国人遗传性聋患者中的突变率及类型特点。方法:采集134例非综合征型聋患者和100例听力正常者的外周血,提取基因组DNA。用遗传性耳聋基因芯片排除常见的4个致聋基因突变患者,对未携带或仅带有单个杂合GJB2或SLC26A4突变的患者应用PCR-DNA测序法对Taperin基因序列进行测定,分析有无突变。结果:在134例非综合征型聋患者组中,基因芯片方法排除出19个患者携带常见致聋基因突变;剩下115例患者应用DNA测序法对Taperin基因进一步检测,结果在2例患者中发现A187S杂合突变。经同源性分析,A187S发生在保守的氨基酸残基。在家族成员中也检出携带了上述突变的杂合子。此外,在患者和对照组中发现2种多态157C>T和318C>T。结论:在中国人非综合征聋患者中发现Taperin基因1种新突变A187S,可能与耳聋有关。还在中国人中发现Tapetin基因的2种多态157C>T和318C>T。在中国人非综合征型耳聋患者中Taperin基因的突变携带率约为1.74%。

原发性颞骨尤文肉瘤1例

尤文肉瘤(Ewing's sarcoma,ES)是继骨肉瘤之后第二常见的原发性恶性肿瘤,占儿童恶性肿瘤的3%[1],主要影响躯干和长骨。在所有的ES患者中,只有1%〜6%影响到颅骨、上颌骨、额骨、顶骨、筛骨或颍骨[2]。我院曾收治1例中年男性颗骨ES患者,现报告如下。