大口黑鲈IRF3的分子特征及其免疫表达

【目的】克隆大口黑鲈(Micropterus salmoides)干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF3)基因,命名为MsIRF3,探究该基因在大口黑鲈先天性免疫防御中的重要作用。【方法】根据大口黑鲈基因组中IRF3基因序列设计引物,克隆MsIRF3基因;用生物信息学方法分析MsIRF3的结构特征和理化性质;用鰤诺卡氏菌(Nocardia seriolae)或维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)感染大口黑鲈,并用病原类似物脂多糖(LPS)、脂磷壁酸(LTA)和聚肌胞苷酸[Poly(I:C)]刺激大口黑鲈头肾白细胞,采用荧光定量PCR方法检测MsIRF3基因表达量的动态变化。【结果】MsIRF3的ORF全长为1404 bp,编码467个氨基酸。MsIRF3包含DNA结合结构域(DBD)、IRF关联结构域(IAD)及丝氨酸结构域(SRD)等3个典型结构域。同源性分析表明,MsIRF3与斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)IRF3的亲缘性最近。qRT-PCR分析表明,MsIRF3在健康大口黑鲈各组织中广泛表达,在肠和鳃中表达量相对较高(P<0.05)。鰤诺卡氏菌或维氏气单胞菌感染后,MsIRF3在肝脏、头肾和脾中表达量均上调(P<0.01)。LPS、LTA和Poly(I:C)刺激后,大口黑鲈头肾白细胞中MsIRF3均被诱导表达。【结论】MsIRF3基因在大口黑鲈防御病原体感染的免疫应答中发挥重要作用。

25-OH-D_(3)在水产养殖中的研究概况与展望

目前维生素D_(3)无论在陆生动物养殖还是在水产养殖中都有研究,甚至在医学中都有深入研究,特别是COVID-19疫情以来,其免疫作用受到广泛重视。25-OH-D_(3)作为有生物活性的1,25-(OH)2-D_(3)前体,是维生素D_(3)的主要代谢中间活性物质,发挥了重要的生理功能,水产养殖动物在钙磷代谢中,大多需要该维生素作为吸收、转化媒介,随着养殖单产越来越高,从生态环境中获取该维生素及钙磷越来越少,比以前更加需要维生素的额外添加,因此该维生素在水产养殖中有良好的应用前景,目前尚无深入研究和应用。本文概述了25-OH-D_(3)的主要来源及代谢过程,综述了维生素D_(3)及其活性代谢中间物质25-OH-D_(3)在人类、陆生动物、水产动物中的生理功能及研究进展,并对未来的研究方向与生产应用提出展望。

近海水域病原菌多样性研究进展

水产动物病原菌广泛分布于近海,不但影响海水养殖业的发展、海产品的质量安全,甚至还威胁到人类公众健康,因此,开展近海水域病原菌多样性的研究,对于海水养殖业的可持续发展及人类健康都具有重要意义。文章综述了近海水域水产动物病原菌多样性研究主要方法的原理、特点以及局限性,介绍了16S rRNA序列分析、分子杂交、指纹图谱等分子生物学技术,阐述了实时荧光定量PCR、竞争定量PCR等定量研究技术的应用,展望了病原菌多样性研究的发展趋势是原位、快速、高通量、灵敏、多技术联合和准确定量。

草鱼铜绿假单胞菌灭活疫苗发酵条件的优化

为优化铜绿假单胞菌JP802灭活疫苗菌液发酵及灭活条件。通过单因素试验对铜绿假单胞菌JP802摇瓶培养温度、pH、接种量、转速4因素进行了优化筛选,采用正交试验法对发酵条件的参数进行了优化,并进行了验证试验及5L发酵罐生长曲线;同时对铜绿假单胞菌JP802灭活疫苗发酵菌液灭活条件进行优化。试验结果表明,铜绿假单胞菌JP802株最适发酵条件为28℃,pH7.5,以10%接种量,转速270r/min,通气量4L/min,发酵培养12~14h。灭活条件优化结果表明在灭活温度为37℃条件下,福尔马林终浓度在0.40%,灭活48h即能完全灭活。通过对发酵条件的优化,可以获得更高产量的铜绿假单胞菌JP802发酵菌液。

水产源芽胞杆菌的分离鉴定及生物学功能分析

筛选具有较好生物学功能的芽胞杆菌(Bacillus),用以改善池塘养殖过程饲料等有机物降解、抑制水体中的病原菌,对从健康养殖鱼虾塘水体中分离的菌株,进行生化试验和16S rDNA序列分子鉴定;通过产酶、耐酸、耐高温试验,抑菌试验以及安全性试验研究分离菌株的生物学功能。试验共筛选出8株细菌,经生化试验及16S rDNA序列的分子鉴定,确定菌株ZHX17、ZHX18、ZHX31为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis),菌株ZHX14、ZHX15为地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)、菌株NSX4、NSX7、NSX9为枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)。试验结果表明,8株芽胞杆菌均具有较强的耐酸、耐高温特性,其中3株贝莱斯芽胞杆菌具有较强的分泌淀粉酶、纤维素酶、蛋白酶的能力,抑菌效果好于其他5株芽胞杆菌。安全性试验结果表明8株芽胞杆菌对草鱼、罗非鱼相对安全。8株芽胞杆菌同时具备分泌淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶3种胞外酶的能力,其中贝莱斯芽胞杆菌具有较强的病原菌抑菌能力,可以作为病原拮抗益生菌做进一步研究。

渔用疫苗发展现状及趋势

分析了国内外渔用疫苗产品研发与应用现状,目前全球超过140种疫苗获得生产许可,中国渔用疫苗相关研究涉及病原27种(类)。未来水生动物疫苗佐剂、抗原载体技术、规模化生产工艺和水产免疫基础等方面将成为研究热点,浸泡口服、多联多价疫苗及区域差异化免疫方案等将成为重要的技术需求,渔用疫苗将为水产动物疫病防治发挥重要作用。

草鱼铜绿假单胞菌灭活疫苗发酵培养基的优化及其在发酵罐的生长试验

为培养优质的铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa菌液,通过单因素试验对草鱼铜绿假单胞菌灭活疫苗发酵培养基的氮源、碳源和磷酸盐成分进行了筛选,采用正交试验法对培养基各主要成分的用量进行了优化组合,并经过验证试验绘制出了铜绿假单胞菌JP802在优化培养基条件下的5 L发酵罐生长曲线。结果表明:草鱼赤皮病铜绿假单胞菌JP802发酵培养基中最佳氮源为蛋白胨+牛肉膏+酵母膏,最佳碳源为葡萄糖,最佳磷酸盐为磷酸氢二钾;确立了培养基的优化配方为蛋白胨10 g/L、牛肉膏5.0 g/L、酵母膏2.5 g/L、葡萄糖5.0 g/L、磷酸氢二钾0.75 g/L、氯化钠5.0 g/L,JP802菌株在此培养基中发酵14 h菌体浓度达到最大(OD_(600 nm)值为6.44)。研究表明,通过对发酵培养基的优化,可以获得更高产量的铜绿假单胞菌JP802发酵菌液。

弧菌菌株发酵工艺初步研究

采用摇瓶培养和发酵罐培养并在不同培养时间测定菌液浊度和活菌数,为弧菌灭活疫苗生产工艺提供参数。研究结果表明,摇瓶培养装量以30%较为合适,培养基初始pH 7.5,发酵过程以不再控制为宜。初步确定了弧菌发酵培养工艺参数:弧菌菌株接种TSB,28℃摇瓶培养18～20 h,28℃种子罐通气搅拌培养12～14 h,28℃发酵罐通气搅拌培养12～14 h。

一株维氏气单胞菌发酵培养基优化及其制备疫苗免疫效力比较

采用单因素试验、响应面试验法对维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)发酵培养基的氮源、碳源、无机盐和磷酸盐成分及用量进行优化组合,确定优化培养基组成:胰蛋白胨10.8 g/L,葡萄糖5.0 g/L,牛肉膏3.0 g/L,磷酸二氢钾2.0 g/L,硫酸镁0.4 g/L,NaCl 5.0 g/L。并与基础培养基的发酵活菌数、制备的灭活疫苗免疫效力进行比较,经过验证试验绘制维氏气单胞菌在优化培养基条件下的7 L发酵罐生长曲线。在优化发酵培养基条件下,维氏气单胞菌活菌数为5.94×10^(9) cfu/mL,比基础培养基增幅43.13%;制备的灭活疫苗相对保护率为77.78%,比基础培养基提高了14.81%。7 L发酵罐发酵培养10 h,活菌数达到最大8.85×10^(9) cfu/mL。通过对发酵培养基的优化,可以获得低成本、优质高效的维氏气单胞菌发酵菌液,为今后维氏气单胞菌灭活疫苗规模化发酵培养提供参考。

基于响应面法的维氏气单胞菌灭活疫苗菌液发酵工艺优化及免疫效力比较

为优化维氏气单胞菌Aeromonas veronii灭活疫苗菌液发酵工艺,通过单因素试验确定温度、培养基初始pH、转速、接种量对菌液活菌数的影响,应用响应面法的Box-Behnken进行优化,对不同发酵条件下发酵菌液制备灭活疫苗的安全性及免疫效力进行了比较。结果表明:当最优发酵条件为温度28℃、培养基初始pH 7.5、摇床转速230 r/min、接种量5%时,维氏气单胞菌CA07株发酵获得最大的活菌数为11.13×10^(9) CFU/mL,较单因素试验确定的最高活菌数值提高20.59%,与预测值基本相符;优化发酵条件能提升发酵菌液活菌数,从而显著提高制备的灭活疫苗的相对免疫保护率,即使制备的灭活疫苗稀释3倍,免疫鲫鱼Carassius auratus的相对保护率仍可达到70%以上,以维氏气单胞菌LY02株攻毒,相对免疫保护率达40%以上。研究表明,通过响应面法优化维氏气单胞菌灭活疫苗发酵工艺,在显著增加菌液产量的同时可提高疫苗的免疫效力。

大菱鲆鳗弧菌灭活疫苗原液发酵条件的优化

为实现大菱鲆鳗弧菌灭活疫苗中试生产,通过对大菱鲆鳗弧菌菌株VAM003二级种子培养时间、盐度、培养基、接种量、补料等发酵条件的优化筛选,确定大菱鲆鳗弧菌菌株VAM003灭活疫苗发酵原液的发酵工艺条件。鳗弧菌菌珠VAM003接种于含2. 5%Na Cl的TSB液体发酵培养基,28℃振荡培养12～14 h,制备二级种子液,按发酵罐培养基总量的10%接种二级种子液,28℃补料发酵10～12 h。在该条件下鳗弧菌菌株VAM003发酵活菌数达到1. 20×1010cfu/m L,比优化前提高120%以上。

哈氏弧菌EcGY020401优化培养

目的:为规模化制备弧菌疫苗提供相关数据。方法:利用摇瓶和小型发酵罐培养,通过平板计数测定培养菌液的活菌数。结果:哈氏弧菌(Vibrio harveyi)EcGY020401株最适盐度为20～25g/L,合适的pH为7.5～7.7,葡萄糖浓度最适浓度为2～5g/L,用TSB优化培养基:胰蛋白胨5g/L、蛋白胨15g/L、大豆蛋白胨3g/L、酵母膏1g/L、葡萄糖4g/L、磷酸氢二钾5g/L、氯化钠15g/L、pH7.5,培养EcGY020401菌株,可达2.95×1010cfu/mL;小型发酵罐培养,10h可达到生长最大值,菌液浓度为3.46×1010cfu/mL。结论:用优化TSB培养基,采用发酵罐培养弧菌,可降低成本,提搞培养效率。

海水鱼哈维氏弧菌、溶藻弧菌病二联灭活疫苗对斜带石斑鱼和卵形鲳鲳参的注射、浸泡免疫研究

针对我国南部沿海地区流行菌株构建海水鱼哈维氏弧菌、溶藻弧菌病二联灭活疫苗,对斜带石斑鱼、卵形鲳鲳参等进行人工感染攻毒实验,并利用构建的二联灭活疫苗进行免疫保护原性试验。实验结果显示,溶藻弧菌EpGS021001株对斜带石斑鱼的LD50为2.0×10~5CFU/g体重,敏感程度最高;而哈维氏弧菌SpGY020601株对卵形鲳鲳参的LD50为1.4×10~6CFU/g体重,敏感程度最低。免疫保护试验结果显示,注射免疫和浸泡免疫均有一定保护作用,疫苗浓度在相当于1.5×10~9CFU/mL以上时,注射免疫相对免疫保护率(RPS)均可在80%以上;同样浓度浸泡免疫时,RPS在55%以上。可见病原对鱼类的敏感性不同,因此选择疫苗产品要针对不同品种、不同模式和不同接种途径。

高温季节加州鲈的病毒病防控与肝脏保健

加州鲈是广东地方特色名优品种,对地方水产养殖经济增长有巨大贡献。但随着加州鲈养殖规模不断扩大,其相关病害频发,特别是病毒病阻碍加州鲈养殖健康发展。然而目前鱼类病毒病还没有特效药物,所以外调水体,内服保肝提高免疫力,进行综合防控显得格外重要。本文综述加州鲈相关病毒病的临床诊断、防控措施,以期为加州鲈养殖提供参考。

高温季节高密度养殖加州鲈鱼病防控

加州鲈,即大口黑鲈,属广温肉食性淡水鱼类,是目前广东省乃至全国重要的特种养殖鱼类。1983年引入我国广东,成为地方特色名优品种,养殖产业规模不断扩大,深受行业重视。自2020年2月底以来,线上、线下已经检测出多起加州鲈病害,其病原主要包括细菌、病毒等。特别是病毒病,如大口黑鲈溃疡病病毒等。

印度尼西亚的水产养殖、病害及其防控概况

印度尼西亚(简称印尼,下同)是东盟“一带一路”热带地区重要国家,也是发挥我国水产养殖技术装备优势开展水产养殖国际合作、实施渔业“走出去”的重点国家,印度尼西亚是全球第二大海产品生产国和第三大水产养殖生产国(FAO,2020),其水产养殖总产量和产业价值也在东盟10国中首屈一指,因此越来越多的水产养殖相关企业到这里发展,大大促进了该国的水产养殖业发展。

水产立体养殖模式传播禽流感的风险分析

立体养殖模式是水产养殖的重要类型,在我国具有悠久的历史,曾被联合国粮农组织作为合理利用物质能量典型在全球进行推广。但现存落后的立体养殖模式存在传播人兽共患病的隐忧,对公共卫生造成威胁,特别是禽流感传播被疑与水产立体养殖模式有关。因此,论文对水产养殖可能传播禽流感的推测进行了总结,概述我国水产立体养殖模式类型与现状,并对其传播禽流感的风险进行了分析,提出了相关建议。

浸泡免疫中的抗原呈递及其佐剂研究进展

浸泡免疫的成功与否很大程度上与选定的佐剂有关,不断深入研究浸泡免疫接种过程中黏膜免疫发生机理,系统比较佐剂对疫苗效果的影响,研究开发“高效稳定、廉价实用”的新型佐剂,对于提高疫苗接种效果,有重要理论意义和实践价值。本研究综述了鱼用疫苗浸泡接种后摄入抗原发生的黏膜免疫作用机理、细胞学基础和影响因素;详细列举目前在研和商品化使用的浸泡免疫佐剂,系统介绍其作用原理和分类原则,并分析了矿物盐佐剂、矿物油佐剂、植物来源佐剂、动物来源佐剂、微生物来源佐剂、人工合成有机佐剂等在鱼类浸泡免疫中使用效果和优缺点;展望该研究领域的发展前景,随着浸泡免疫基础理论研究深入,不断筛选和构建新型佐剂,研究和开发新投递方式和操作方式,促进重大鱼病防治进步。

马来西亚的水产养殖及其病害防控概况

目前,东盟各国都在加强本国渔业资源的开发,广东省与东盟国家在渔业养殖、捕捞、加工以及市场等方面具有明显的互补性。据不完全统计,截止2019年底,广东省内主要企业对东南亚投资项目40多个,涉及饲料、动保、养殖、造船、海港、深海网箱等,已经成为重要发展区域。马来西亚是东盟“一带一路”热带地区重要国家,也是发挥我国水产养殖技术装备优势,开展水产养殖国际合作,实施水产养殖“走出去”的重要节点国家。

广东省池塘健康养殖各因素的管理与展望

广东省气候温暖湿润,生态环境多样性丰富,水产养殖水面广阔,山塘水库、养殖池塘星罗棋布,养殖品种繁多,养殖历史悠久,技术经验丰富,生产产值高。2020年,广东渔业经济总产值3840.71亿元,渔业产值1608.79亿元,均占全国近12%以上(表1),是农业经济的重要组成部分。但养殖过程中病害的频发、暴发,影响严重,特别是在气候温暖的华南地区,如草鱼在包括广东在内的主要养殖地区,年养殖成活率仅为30%。