海带配子体低温冷冻保存研究

设置3个不同的温度组A(-80℃)、B(-40℃)、C(-20℃)和1个对照组D(未冻存配子体细胞),对不同品种的海带配子体细胞段或细胞簇进行低温冷冻保存,15 d后取出,在适宜条件发育培养了6个月。结果表明,不同冻存温度、雌雄差异,对海带配子体细胞段或细胞簇存活率有显著的影响(P<0.05),A组和B组冻存的配子体细胞存活率显著高于C组。相同冻存条件下,细胞簇的成活率显著高于细胞段的存活率。A组和B组冻存的细胞簇成活率均为34%~43%,而A组和B组冻存的细胞段成活率均<30%,其中901雄配子体成活率>20%,其他均<10%。在复苏培养过程中,各组存活细胞段或细胞簇的生长状态均与对照组无显著差异。在发育培养过程中,A组和B组冻存的配子体细胞的发育进程及最终发育率无显著差异。

二甲基亚砜对海带配子体克隆低温冻存的影响

以海带配子体克隆为试验对象,采用4种体积分数二甲基亚砜(DMSO)冷冻保护液,对10个品种(系)20个克隆系进行了低温冷冻保存试验。结果表明,海带配子体克隆在-80℃冻存10 d,复苏后培养,DMSO各体积分数组均有海带配子体细胞存活,其中10%和15%体积分数组冻存的20个克隆系均有存活细胞,5%和20%体积分数组仅部分克隆系有存活细胞。对于相同克隆系,10%和15%体积分数组配子体存活率高于5%和20%体积分数组。指出,在海带配子体低温冻存中,10%和15%DMSO可作为冷冻保护液,为降低成本,优选10%DMSO作为冷冻保护液。提出,经-80℃冻存的海带配子体复苏后培养,进行繁育能力验证,能正常发育,形成孢子体,低温冻存不影响其繁育能力。

海草场生态系统及其修复研究进展

海草场能够提供重要的生态系统服务。自20世纪末以来,由于人类活动和自然灾害的影响,全球范围内的海草场出现了急剧衰退,由此也促进了海草场生态系统的研究以及海草场人工修复技术的发展。近年来,针对海草场生境流失的现状,中国也开始开展海草场修复工作。从以下方面进行论述:(1)海草的种类、分布,海草场生态系统功能及其生态系统服务:与陆地系统相比,全球海草物种多样性较低,了解海草的分布特征有助于通过了解海草如何适应当地环境压力,以揭示海草适应环境的能力;海草场提供重要而广泛的自然生态系统服务,特别是在维护近岸生态系统健康和满足人类需求过程中起到重要的作用;(2)海草场的衰退及其原因:认识并缓解人类压力对海草场的危害是促进海草场生态系统可持续发展的重要一环;(3)国内外海草场修复现状:以此阐明海草场修复原理,为海草场修复提供科学的方法;(4)总结与讨论:基于科学研究背景,为中国海草场生态系统保护和修复提出建议。海草场的修复和保护应当相辅相成,并与我国海岸长远规划相结合,以此推动我国海草场生态系统服务的可持续发展。

多肋藻雌配子体种质保存和扩培的温光条件研究

跟踪观察了温度和光照强度双因子对多肋藻雌配子体生长的影响,旨在探明其适宜的种质保存与扩增培养的温光条件。试验设置3个温度,分别为10、15和20℃,每个温度下设5个光照强度,分别为10、20、40、60和80μmol/(m^(2)·s),实验进行了4个月。结果表明,配子体在10℃,光强≤10μmol/(m^(2)·s)时适宜种质保存,15~20℃、20μmol/(m^(2)·s)时适宜短期扩增培养,15℃、20μmol/(m^(2)·s)时适宜长期扩增培养。

大叶藻组织培养中外植体消毒方法的研究

为探寻大叶藻组织培养中外植体的最佳消毒方法,采用75%乙醇、1.5%碘化钾、4%次氯酸钠和10%双氧水这4种消毒剂以及不同的处理时间组合,对大叶藻种子和幼苗进行消毒试验。结果表明,最有效的外植体消毒方法为:对大叶藻幼苗,先用无菌水冲洗3～4次,再以75%乙醇处理20s,然后再用无菌水冲洗3～4次,可以达到较好的消毒效果。对大叶藻种子,先以75%乙醇处理10min,再以1.5%碘化钾处理10min,然后用无菌海水冲洗3～4次,这样消毒效果最佳,且不影响种子的发芽率。

铁盐对海带雌配子体生长发育的影响

为探明铁盐对不同品种(系)以及相同品种(系)在不同生长条件下海带雌配子体的影响,通过添加不同质量浓度的Fe^(3+),对培养在低温弱光[(10.0±1.0)℃、2μmol/(m^(2)·s),L]和高温强光[(15.0±1.0)℃、80μmol/(m^(2)·s),H]条件下的“901”、韩国海带和“连杂1号”3个品种(系)海带雌配子体的生长发育进行了观察。试验设置0、0.5、1.0、1.5 mg/L 4个Fe^(3+)质量浓度,光照周期为10 L∶14 D,试验持续1个月。结果表明,铁盐能够促使“901”雌配子体生长与成熟、排卵进行孤雌生殖,Fe^(3+)质量浓度越高,配子体排卵的比率越高,“901”(L)配子体排卵的比率低于“901”(H)。韩国海带和“连杂1号”很少有雌配子体细胞排卵,Fe^(3+)质量浓度越高,其营养生长越旺盛。韩国海带(L)的相对生长率低于韩国海带(H),“连杂1号”(L)的相对生长率略低于“连杂1号”(H)。试验中所生成的孢子体均为畸形,且最后均死亡。

青霉素在海带配子体培养中的作用初探

海带配子体克隆技术的建立具有极其重要的应用价值。配子体克隆及其杂交为通过杂交方法培育优良品种和杂交海带提供了可能。为此,配子体克隆演变为海带种质资源保存和利用的主要手段。

海带配子体克隆规模化培育及育苗技术

海带配子体克隆能长期保存,可维持原有性别,对保护海带种质资源,研究海带生理、生化、遗传学、规模化培育及生产等方面均具有重要价值。本文分别从配子体克隆的规模化培养、采苗、幼苗培育3个方面探讨了海带配子体克隆规模化培育及育苗过程中的关键技术。

大叶藻(Zostera marina L.)胚的结构和种子萌发过程的研究

以采自山东荣成褚岛桑沟湾南岸成熟的大叶藻种子为材料,研究了种子的外部形态特征、胚乳成分及胚的解剖结构,并初步了解了大叶藻种子的萌发过程。结果表明,大叶藻种子是单子叶有胚乳的种子,呈暗褐色,椭圆形或长圆形,种皮革质且有17～20条纵肋,胚乳丰厚坚硬,胚乳细胞被淀粉粒充满;胚弯曲,由胚根、胚轴、胚芽和子叶组成,子叶U形棒状,其弯曲部有一裂缝,胚芽位于裂缝处,胚轴较短,其下是两个对生的胚根,有中央维管束贯穿胚根、胚轴、胚芽和子叶。在子叶出土萌发的植物类型中,大叶藻种子萌发过程是罕见的。萌发初期,子叶优先生长突破种皮而长出地面,此后胚根才开始生长并产生不定根。对大叶藻种子结构和萌发过程的研究,为探讨大叶藻种子萌发和幼苗更新的限制因素提供了一定的理论依据。

海带属配子体DNA提取及ISSR-PCR体系优化

为了建立一个重现性好、稳定性高,适用于海带属ISSR遗传分析的PCR反应体系,从海带属配子体材料中提取基因组DNA作为模板,应用正交设计试验对反应体系中各因子的不同浓度进行组合优化。结果显示:适用于海带ISSR扩增反应的最佳体系(20μL)为:1×PCR buffer,1.2 mmol/L Mg2+,0.2 mmol/L d NTPs,1.0μmol/L ISSR引物,40 ng模板DNA,0.25 U Taq DNA聚合酶;扩增PCR程序为:95℃预变性3 min;95℃变性45 s,52℃退火45 s,72℃延伸2 min,共38个循环;最后72℃延伸10 min。在优化的海带ISSR反应条件下,扩增条带稳定,重现性好,为应用ISSR分子标记技术进行海带属遗传多样性研究和分子鉴定奠定了技术基础。

海带配子体采集过程中的污染防控

海带是一种自然分布于北太平洋和北大西洋的冷水性大型经济食用海藻,自1927年从日本海域引入我国海域[1-2]之后,渐渐适应了我国的海洋环境条件,并发展成为重要的人工栽培经济海藻[3-6]。目前,我国的辽宁省、山东省、江苏省、浙江省、福建省和广东北部等沿海地区,为主要的海带养殖区域。

污染严重的海带配子体分离纯化

针对海带(Saccharina japonica)配子体保存过程中严重污染材料的分离纯化进行研究。(1)液相培养分离纯化法:将克隆材料经超声波细胞粉碎仪打碎后重新附着到90 mm培养皿中,利用微毛细吸管在显微镜下分离出状态好且无菌丝附着的细胞段,继续保存。(2)固相培养分离纯化法:将克隆材料4000 r/min离心5~10 min,弃上清,加灭菌PESI培养液重新悬浮藻液,利用5 mL无菌注射器吸取2 mL粉碎后的配子体细胞,逐点注射入固相平板上,接种后利用Parafilm封口膜密封培养皿,平板培养约60~120 d后观察,将未长出菌落且藻斑直径达2 mm的克隆团挑出,然后在PESI液体培养基中复苏继续保存。

“东方6号”杂交海带福建霞浦移栽试验

在福建省宁德市霞浦县北壁镇试栽培"东方6号"杂交海带,并与当地栽培的"连杂1号"杂交海带,在长宽、鲜干比、主要成分等方面进行对比,发现"东方6号"杂交海带有良好的经济性状,并表现出了较强的抗逆性,能够适应当地的水温和光照条件,适宜引进当地。

海参池中养殖铜藻的初步试验

在海参养殖池中培养铜藻,探索铜藻在海参池中的适宜生长条件。试验发现,铜藻移栽15 d后基本适应海参池的生存环境,在4月中旬至6月上旬,水温在14~20℃,铜藻的生长状态良好,增重也较快;到6月中下旬,水温超过22℃,海参池中出现大量污损生物,如海鞘、紫贻贝等,严重影响铜藻的生长,此时铜藻不适宜在海参养殖池中生长。

基于大叶藻成苗率的新型海草播种技术评价

蛤蜊播种技术是一种新型海草播种技术,该技术中,种子通过糯米糊粘在蛤蜊贝壳上,随蛤蜊穴居被埋入底质。为评价蛤蜊和糯米糊对种子成苗率的影响,以菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)和大叶藻(Zostera marina)种子为试验对象,设置了直接播撒种子(A1组)、直接埋种(A2组)、包埋糯米后播撒(B1组)、包埋糯米后埋入底质(B2组)、蛤蜊播种(C)5种处理,每种处理设置3个重复,在实验室的水槽中对其进行试验。结果表明:糯米糊对种子萌发有负面影响,但由于蛤蜊的行为使底质具有透气性,减轻了糯米糊对种子萌发的影响,种子成苗率可达到23.2%;海区试验中利用蛤蜊播种的两个样方中的成苗率分别为19.1%和9.9%。试验表明,蛤蜊播种技术适合作为一种经济、有效的播种技术用于海区海草床的建立和修复。