人参炔三醇抑制氧化低密度脂蛋白诱导泡沫细胞形成的作用机制研究

目的探讨人参炔三醇(panaxytriol,PXT)抑制氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)诱导单核巨噬细胞脂质沉积的作用机制。方法单核细胞THP-1经佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)诱导成巨噬细胞后,采用不同浓度(0、1、5、10、20μmol/L)PXT处理单核巨噬细胞24小时,通过MTT法检测其对细胞存活率的影响。THP-1单核巨噬细胞经PMA刺激后,利用oxLDL诱导脂质蓄积,PXT处理后利用流式细胞仪,荧光显微镜和油红O染色检测巨噬细胞对oxLDL的摄取。采用Western blot检测细胞内白细胞分化抗原36(cluster of differentiation,CD36)、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)、清道夫受体B1(scavenger receptor class B type 1,SRB1)的蛋白表达水平变化。结果MTT实验结果显示,与正常组比较,20μmol/L PXT处理THP-1单核巨噬细胞24小时后显著抑制了细胞活力(P<0.05),且其他浓度对细胞活力均无显著影响。流式细胞检测、细胞荧光成像和油红O染色结果显示,与模型组比较,PXT浓度依赖地降低巨噬细胞内DiI-oxLDL荧光强度与细胞内脂质蓄积(P<0.05)。Western blot结果显示,与模型组比较,PXT浓度依赖地降低了巨噬细胞中CD36蛋白的表达(P<0.05),而对其他蛋白无显著影响。结论PXT通过抑制清道夫受体CD36的表达,抑制巨噬细胞对oxLDL的吞噬及泡沫细胞的形成,具有潜在的抗动脉粥样硬化活性。

沉香提取物保护胆汁酸诱导胃黏膜损伤的药理机制

目的胃黏膜上皮细胞损伤是胆汁反流性胃炎最重要的病理特征之一。沉香在我国传统用药中用于治疗胃病已有数千年的历史。然而胆汁酸诱导胃黏膜上皮细胞损伤的病理机制以及中药沉香改善胆汁反流性胃炎的作用靶点尚未完全阐明。本研究探讨牛磺胆酸(TCA)通过调节内质网应激途径促进细胞凋亡的作用,并探讨了沉香提取物(CPE)对胃黏膜上皮细胞的保护作用和作用机制。方法利用TCA(0.5,1.0,1.5,2.0μmol·L^(-1))处理人胃黏膜上皮细胞GES-1细胞24 h后,利用CCK-8试剂盒检测GES-1细胞存活率,确认TCA诱导细胞损伤的IC50为1.467μmol·L^(-1)。选择1.5μmol·L^(-1)的TCA诱导GES-1细胞损伤,同时采用CPE(1,5,10 mg·L^(-1))处理细胞后,检测CPE对细胞存活率的改善作用。利用Hoechst33342染色和Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测TCA对细胞凋亡的激活以及CPE的改善作用。通过Western印迹法检测胱天蛋白酶7、活化胱天蛋白酶7、PARP、活化PARP等凋亡蛋白表达情况。进一步通过Western印迹法检测内质网应激相关蛋白Bip,PERK,eIF2α,CHOP的表达,探讨胆汁酸处理和CPE对内质网应激的影响。体内实验采用胆汁反流性胃炎小鼠检测体重变化、血浆炎症因子IL-6,IL^(-1)β,TNF-α水平,采用HE染色、TUNEL染色、免疫组化进一步验证CPE对胆汁反流性胃炎的治疗作用。结果TCA剂量依赖性地降低GES-1细胞的存活率(IC50=1.467μmol·L^(-1)),CPE 5和10 mg·L^(-1)显著增加TCA损伤细胞的存活率(P<0.05)。Hoechst33342染色和流式细胞术分析结果显示,TCA处理后细胞凋亡率显著提高,CPE给药后剂量依赖性抑制了TCA诱导的细胞凋亡(P<0.05)。Western印迹法结果显示,TCA处理GES-1细胞后,通过增加胱天蛋白酶7和PARP的裂解激活了GES-1细胞的凋亡。进一步的实验表明,TCA可上调内质网应激继而诱导细胞凋亡,CPE抑制内质网应激相关蛋白PERK和eIF2α的磷酸化,降低CHOP的表达水平,从而发挥其抗凋亡作用。体内实验胆汁反流性胃炎小鼠血浆炎症因子水平以及胃黏膜上皮细胞凋亡和CHOP蛋白水平也明显增加,CPE给药后明显降低。CPE通过抑制PERK/eIF2α/CHOP信号通路,有效抑制TCA激活的GES-1细胞凋亡,并且CPE对胃黏膜的抗凋亡作用也在体内得到验证。结论CPE通过调控PERK/eIF2α/CHOP信号通路介导的内质网应激抑制TCA诱导的胃黏膜上皮细胞凋亡,为胆汁反流性胃炎的治疗提供了潜在的药物。

土鳖虫生物活性肽对高脂血症大鼠肠道菌群调节作用研究

目的考察土鳖虫生物活性肽(active peptide of Eupolyphaga,APE)对高脂血症大鼠血脂和肠道菌群的调节情况。方法采用高脂饲料饲养SD大鼠诱导形成高脂血症大鼠模型,以辛伐他汀为阳性药,采用酶联免疫方法(ELISA)考察APE对高脂血症大鼠血脂的影响,同时运用16rS高通量测定技术(V4-V5)对APE干预模型大鼠肠道微生物菌群的结果进行测定。结果APE可显著降低模型大鼠血清中血脂指数,改善肝脏病理变化程度;同时肠道菌群结果显示,也可显著增加厚壁菌门中的柔菌属、乳酸杆菌属、双歧杆菌属的相对丰度,降低拟杆菌门、软壁菌门的瘤胃球菌属、普氏菌属、普雷沃菌属的相对丰度。结论APE具有降血脂的功效,同时也可修复高脂血症大鼠紊乱的肠道菌群谱,推测其作用机制为APE经肠道菌群干预脂质代谢途径发挥降血脂的功效。

保元汤活性成分4’,7,8-三羟基二氢黄酮抑制过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞损伤的作用机制研究

目的 研究保元汤中4’,7,8-三羟基二氢黄酮(4’,7,8-trihydroxydihydroflavonoid, TF)对过氧化氢(hydrogen peroxide, H_(2)O_(2))诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)氧化损伤的改善作用,并进一步阐明其药理机制。方法 用不同浓度的TF处理HUVEC血管内皮细胞6小时后给予15μmol/L和30μmol/L H2O2刺激1小时,检测细胞存活率并确定TF起效剂量。利用2,2-二苯基-1-苦肼基自由基(2,2-dipheny 1-1-picrychydrazy 1,DPPH)分析实验、DCF-DA荧光探针和蛋白免疫印迹法(Western Blot)分别检测TF对自由基的清除作用,以及H_(2)O_(2)损伤后TF对HUVEC细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平和细胞凋亡相关蛋白磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,P-Akt)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)以及腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly adenosinediphosphate-ribose polymerase, PARP)表达的调控作用。结果 TF给药处理能显著提高H2O2损伤后HUVEC细胞的存活率(P<0.01)。机制研究表明,TF能显著加速自由基的清除,降低细胞中ROS水平,并通过调控P-Akt/PARP/Bcl-2通路抑制HUVEC细胞的凋亡。结论 TF作为保元汤的活性成分,能保护内皮细胞对抗H2O2诱导的氧化损伤,其作用机制可能与其加速自由基的清除、提高细胞清除ROS能力和抑制细胞凋亡有关。

基于网络药理学的土鳖虫破血逐瘀作用机制研究

目的:基于网络药理学分析土鳖虫对破血逐瘀相关疾病的作用机制。方法:经文献查阅并结合PubChem、SwissADME、SwissTargetPrediction和TCMSP等数据库对土鳖虫已知成分及其对应靶点进行搜集,并与经GeneCards、OMIM、TTD、HPO数据库搜索得到的“破血逐瘀”相关靶点进行交互分析得到共同靶点;通过蛋白-蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)分析、基因本体(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析,构建土鳖虫“成分-靶点-疾病”网络,探讨土鳖虫破血逐瘀功效的作用机制。同时采用体外纤溶实验评价土鳖虫水溶性蛋白质与其他成分的活性差异。结果:筛选得到土鳖虫活性化合物54个,共对应靶点653个;与血瘀相关的17种疾病的16141个作用靶点经交互分析得出两者共有靶点26个。GO和KEGG分析结果表明,土鳖虫已知成分主要涉及嘌呤代谢通路、细胞能量代谢通路、环磷酸鸟苷(cGMP)信号通路、Toll样受体信号通路、醛固酮合成代谢通路、三酰甘油合成通路等13条信号通路,通过干预DNA转录、细胞能量代谢等生物功能发挥药效。同时体外纤溶实验得出土鳖虫水溶性蛋白质较其他成分表现出更强的纤溶活性。结论:土鳖虫已知活性成分并不能很好的证明其对破血逐瘀相关疾病的治疗有显著的效果。结合土鳖虫水溶性蛋白质促纤溶作用,为下一步土鳖虫纤溶物质基础的研究提供参考。

血竭乙酸乙酯提取物改善ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化的药效与作用机制研究

探讨血竭乙酸乙酯提取物(EtOAc extract of Draconis Sanguis,DSE)改善ApoE基因敲除小鼠(ApoE^(-/-))动脉粥样硬化的体内药效及作用机制。ApoE^(-/-)小鼠随机分为对照组,模型组,依折麦布阳性药(5 mg·kg^(-1))组和DSE低(100 mg·kg^(-1))、高(200 mg·kg^(-1))剂量组,灌胃给药,持续16周,在给药期间除对照组外,各组小鼠均给予高脂饲料喂饲。给药16周后测量小鼠体质量、肝脏及附睾脂肪质量,检测血脂水平、主动脉流出道斑块面积等指标的差异,评估DSE的体内药效。体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),利用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱发内皮细胞氧化应激,检测DSE对内皮细胞氧化应激相关蛋白的影响。结果表明,低、高剂量的DSE均改善了动脉粥样硬化ApoE^(-/-)小鼠的附睾脂肪质量和附睾脂肪指数,降低血浆总胆固醇、甘油三酯、非高密度脂蛋白胆固醇水平,减少主动脉流出道斑块面积。体外实验证实,ox-LDL显著增加HUVEC中脂质过氧化标志物4-羟基壬烯醛(4-HNE)的水平,确认DSE通过抑制ox-LDL诱发的血管内皮细胞氧化应激,改善ApoE^(-/-)小鼠的动脉粥样硬化病变程度。

普洱茶素Ⅱ改善高脂血症ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化作用机制研究

目的 研究普洱茶素Ⅱ对高脂血症诱发动脉硬化ApoE基因敲除小鼠(ApoE-/-)的治疗效果及作用机制。方法ApoE-/-小鼠通过喂养高脂饲料建立动脉粥样硬化动物模型,造模成功后将小鼠随机分为对照组、模型组、阿托伐他汀(30mg/kg)组和普洱茶素Ⅱ低、高剂量(50、100 mg/kg)组,给药6周后检测小鼠血浆总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglycerides,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)和非高密度脂蛋白胆固醇(nonhigh density lipoprotein cholesterol,non-HDL-C)水平,以及主动脉流出道斑块面积等指标的差异。体外培养人脐静脉内皮细胞HUVEC和人外周血单核细胞THP-1,检测普洱茶素Ⅱ对氧化低密度脂蛋白(oxidized low density protein,ox-LDL)诱发单核与内皮细胞黏附的影响,利用Western blotting对蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)/血管细胞黏附因子(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)通路相关蛋白表达进行检测。结果 普洱茶素Ⅱ显著抑制了高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠的体质量、肝脏质量、肝脏指数、附睾脂肪质量和附睾脂肪指数(P<0.05、0.01),降低血浆TC、TG、non-HDL-C水平(P<0.05、0.01),升高HDL-C水平(P<0.05),减少主动脉流出道脂质沉积。体外实验证实,普洱茶素Ⅱ显著抑制HUVEC与THP-1细胞间的黏附(P<0.05),抑制ox-LDL诱导的HUVEC细胞中VCAM-1、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)和Akt/NF-κB通路相关蛋白表达(P<0.05、0.01)。结论 普洱茶素Ⅱ能够显著改善ApoE-/-小鼠的肥胖、脂代谢紊乱、主动脉斑块沉积,通过调控Akt/NF-κB/VCAM-1通路抑制内皮细胞与单核细胞的黏附,进而抑制动脉粥样硬化的发生与发展。

沉香提取物对皮质酮诱导PC12细胞损伤的保护作用及机制研究

目的利用皮质酮诱导大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株PC12损伤,模拟糖皮质激素诱发神经功能障碍的病理过程,探讨沉香提取物对神经细胞的保护作用及其机制。方法采用400μmol/L皮质酮诱导的PC12细胞作为神经元损伤模型,给予沉香提取物(5、10、20μg/mL)干预细胞24 h后,利用CCK-8试剂盒检测细胞存活率;采用Hoechst 33258染色和流式细胞术检测细胞凋亡率;通过Western blotting检测凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparate protease-3,Caspase-3)、cleaved Caspase-3、聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]、cleaved PARP表达情况。结果与对照组比较,皮质酮处理PC12细胞24 h后细胞存活率显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),cleaved PARP/PARP和cleaved Caspase-3/Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,给予沉香提取物24 h后细胞存活率显著升高(P<0.05、0.01),凋亡率显著降低(P<0.01),cleaved PARP/PARP和cleaved Caspase-3/Caspase-3蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论沉香提取物通过调控Caspase-3/PARP通路改善皮质酮诱导的PC12细胞凋亡,从而保护神经元。

柴胡总皂苷降血脂作用及机制研究

目的:研究柴胡总皂苷对高血脂模型SD大鼠的血脂中总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)、高密脂蛋白(high density lipoprotein,HDL),超氧化歧化酶(super oxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、一氧化氮(nitric oxide,NO)、组织性纤溶酶原激活物(tissue-plasminogen activator,t-PA)等因子含量和对3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methyl glutaryl coenzyme A reductase,HMGCR)、乙酰辅酶A羧化酶(acetyl CoA carboxylase,ACC)、t-PA的mRNA表达的影响。方法:采用水作为溶剂提取柴胡总皂苷,并采用正丁醇萃取、D101大孔树脂分离得到柴胡总皂苷组分,SD大鼠,60只,雄性,平均分为6组,分别为空白组、模型组、阳性药组、柴胡高剂量组、中剂量组、低剂量组;除空白组外,其他各组采用高脂乳剂+高脂饲料饲养SD大鼠造成大鼠高血脂模型,以辛伐他汀(1.5 mg·kg-1)为阳性药物,柴胡总皂苷高中低剂量分别为15.500,7.750和3.875 g·kg-1,分别测定各组大鼠血液内的血脂因子和活化因子含量变化,同时测定大鼠肝脏内相关基因的表达情况。结果:与空白组相比,模型组大鼠血液中TG,TC,LDL含量明显升高(P<0.01),HDL含量下降(P<0. 01),与模型组比,辛伐他汀组(P<0.01)与柴胡总皂苷各组分(P<0.05)均能降低血液内血脂4项,同时也可以调节血液中的MDA/SOD指数,并能明显改善NO,t-PA含量。同时测定各组肝脏t-PA,HMGCR和ACC的mRNA表达量,结果表明与模型组比较,柴胡总皂苷各组分均能下调肝脏中HMGCR和ACC的mRNA表达量(P <0. 05),上调t-PA的mRNA表达量(P<0.05)。结论:柴胡总皂苷可以通过降低MDA含量、升高SOD,t-PA含量,并下调肝脏中HMGCR和ACC的mRNA表达量来达到对大鼠血液血脂4项的调节。