重组人尿激酶原药效学研究

利用人血浆及其产生的血栓凝块 ,在试管中模拟纤溶酶原激活剂在体内引起血栓溶解的过程及麻醉开胸犬电刺激冠脉左旋支引起的冠脉血栓形成模型评价重组人尿激酶原的溶栓活性 ,并与尿激酶进行比较 .InVitro实验结果表明 :2 4 0IU /mL是 prouk血纤维蛋白专一的最大浓度 ,低浓度的重组prouk比天然 prouk具有更高的溶栓能力 ,这可能与其非糖基化结构有关 .当重组prouk浓度小于 1μg/mL时 ,它在血浆中几乎不降解任何纤维蛋白原 .犬静脉给予重组人尿激酶原 9× 10 4 、4 .5× 10 4 、2 .2 5× 10 4 IU·kg- 1 对冠脉血栓产生显著的溶栓效果 ,栓塞冠脉血管很快出现再通 ,残存血栓较溶剂对照分别减少了 6 9.2 %、5 7.0 %、4 3.1% ;心肌梗死范围明显缩小 ;与等剂量尿激酶溶栓作用相似 .血浆优球蛋白溶解时间明显缩短 ;溶栓不伴有明显的血浆纤维蛋白原降解 ,而尿激酶溶栓的同时 ,纤维蛋白原明显降低 .除高剂量组个别动物外 ,对伤口出血量增加出血时间无明显影响 .

重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体的药效学研究

犬静脉给予重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(K2tPA)1×106IU/kg、5×105IU/kg、2.5×105IU/kg对冠脉血栓产生显著的溶栓效果,栓塞冠脉血管很快出现再通,高、中、低剂量组残存血栓较溶剂对照组分别减少了72.7%、55.6%、42.5%;心肌梗死范围明显缩小.血纤维蛋白原明显降解,凝血酶原时间、凝血酶时间及陶土激活部分凝血酶时间明显延长,但抗凝血酶活性无显著改变.伤口出血量增加,出血时间延长.以上指标与等剂量(5×105IU/kg)的德国BoehringerMannheimGmbH产品Retavase作用相似.离体家兔血小板凝集实验结果表明:重组人K2tPA对家兔血小板聚集功能具有明显的抑制作用.

一种体内溶栓活性优于总蚯蚓纤溶酶的组分

目的筛选高效低毒的蚯蚓纤溶酶单一组分。方法通过亲和色谱从赤子爱胜蚓获得含多组分的总蚯蚓纤溶酶(EFE),经离子交换分离得到3个主要溶栓组分EfP-0-2,EfP-I-1和EfP-I-2,与EFE比较体内外溶栓效果和毒副作用。结果与其他组分比较,EfP-I-1的体外溶栓作用较强;当静脉注射4.5 mg.kg-1时,各组分对纤维蛋白原的影响均不明显,只有EfP-I-1能显著溶解动静脉旁路血栓;当静脉注射达6 mg.kg-1时,只有该组分对延长出血时间的影响不明显;急性毒性实验表明,该组分的LD50是EFE的2.17倍。结论EfP-I-1有较高的体内外溶栓活性和较低的毒副作用。由于该组分在总EFE中所占比例较高,并易于分离纯化,故适于作为单一组分的溶栓药物进行开发。

光化学法诱导大鼠冠状动脉血栓模型的建立和应用

目的建立光化学法诱导大鼠冠状动脉血栓致心肌梗死模型。方法大鼠分为激光和化学单独刺激组、联合刺激组和重组葡激酶处理组,通过注射光敏剂四氯四碘荧光素二钠(虎红)后激光照射冠状动脉形成血栓致心肌梗死动物模型,比较各组血管栓塞程度以及心电图Ⅱ导联ST段高度变化选择出最佳模型。并用该模型评价重组葡激酶溶栓作用效果。结果相对于单独刺激组,联合刺激组心脏激光照射处均出现明显损伤病灶。HE染色心肌细胞肿胀,排列紊乱,动静脉内均见血栓。心电图出现不同程度心律失常,ST段抬高。其中注射40 mg.kg-1虎红后照射15 min心律失常出现时间较早,心电图ST段抬高幅度高、维持时间长,而且死亡率低,为本研究中最佳光化学法冠状动脉血栓模型。重组葡激酶处理组能够部分溶解动静脉血管内血栓,减小血栓面积(P<0.01),抑制ST段抬高(P<0.05～0.01)。结论该文建立了最佳光化学法诱导大鼠冠状动脉血栓模型,适于溶栓药物研发评价。

地奥心血康对大鼠心肌缺血再灌注损伤的治疗作用

目的观察地奥心血康(DAXXK)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的治疗作用及机制。方法 40只SD大鼠经结扎冠脉左前降支制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,造模成功后随机分为模型组、DAXXK-d(31.5 mg/kg)组、DAXXK–g(63.0 mg/kg)组、合心爽(24.8 mg/kg)组及假手术组,各组采用相应治疗给药,每天1次,连续7 d。彩色多普勒超声仪测定心脏功能与心脏构型,Millar导管法测定血流动力学,i-STAT 300型血气分析仪测动脉血氧饱和度、血氧分压,ELISA法测定炎性因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)–α、细胞间黏附分子(ICAM)–1、血管内皮细胞黏附分子(VCAM)-1,以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax,TUNEL法测定心肌细胞凋亡情况。结果与模型组相比,DAXXK可以增加左室缩短分数(FS),改善心脏收缩功能和舒张功能,增加左室内压最大上升/下降速率(±LVdp/dtmax)。DAXXK可减轻肺淤血导致的肺泡气体交换障碍,增加动脉血氧分压与血氧含量,改善肺功能,降低IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子水平以及ICAM-1、VCAM-1水平。DAXXK可使心肌细胞肿胀和炎性细胞浸润减轻、心肌细胞调亡减少、Bcl-2蛋白表达升高、Bax蛋白表达降低。结论用DAXXK治疗对心肌缺血再灌注损伤有明显的保护作用,其机制与抑制细胞凋亡,减轻炎性因子损伤有关。

当归注射液的抗脑缺血作用研究

采用线栓法制造大鼠大脑中动脉阻断(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)脑卒中模型,研究当归注射液在抗脑缺血方面的药效学作用.结果显示,大鼠静脉输注(iv)当归注射液(2、4、8g/kg)可剂量依赖性改善受损的神经功能,与模型对照组相比,神经功能受损程度分别降低了10.8%、20.0%、30.8%;脑梗死面积分别缩小了26.0%、45.9%、71.3%;脑水肿抑制率分别为41.2%、82.4%、88.2%;脑膜微循环血流量均有不同程度的改善,同时证明具有抗脂质过氧化作用.以上结果表明,当归注射液具有明显的抗脑缺血保护作用,其机制可能与减轻脑缺血后海马神经元的损坏,改善脑部血液循环,促进脑生理机能的恢复,提高超氧化物歧化酶(Superoxide Dis-mutase,SOD)的活性,同时使脑缺血大鼠脑组织丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的含量下降有关.

当归总苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤的改善作用

目的研究当归总苯酞对脑缺血再灌注损伤的改善作用。方法 SD大鼠口服给予当归总苯酞0.05,0.1和0.2 g·kg-1,每日1次,连续7 d。第7天给药30 min后采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻断再灌注损伤模型,于再灌前、再灌2和24 h进行神经功能评分,计算脑梗死面积和脑水肿比例,检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。另同样给予药物处理的大鼠于第7天股静脉注射10%高分子右旋糖酐5 m.lkg-1,检测脑膜微循环血流量。结果与假手术组相比,模型组神经功能评分增高,脑梗死面积明显增加,出现脑水肿,MDA含量增加,同时SOD活性降低。与模型组比较,当归总苯酞0.1和0.2 g·kg-1组神经功能评分分别降低了20.4%和28.7%(P<0.05);再灌2 h当归总苯酞0.05,0.1和0.2 g·kg-1可使神经功能评分分别降低15.5%,28.7%和29.9%(P<0.01);再灌24 h则分别降低11.9%,25.3%和37.4%(P<0.01),脑梗死面积分别缩小9.8%,41.7%和49.6%(P<0.05);脑水肿程度分别减轻9%,42%和52%(P<0.01);同时使脑组织MDA含量降低,最大降低幅度为62.0%(P<0.01);SOD活性升高,最大升高幅度为77.1%(P<0.01)。与假手术组相比,模型组脑血流量明显减少;与模型组相比,给予当归总苯酞可使大鼠脑血流量出现不同程度的回升(P<0.05),但仍明显低于假手术组(P<0.05)。结论当归总苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤具有明显的改善作用。

重组瑞替普酶对犬冠脉血栓的溶栓作用研究

目的 评价溶栓新药注射用瑞替普酶的溶栓活性。方法 采用麻醉开胸犬电刺激冠脉左旋支引起的冠脉血栓形成模型,并与国外同类产品reteplase进行比较 结果 犬静脉给予注射用瑞替普酶20.0×104、10.0×104、50×104IU/kg对冠脉血栓产生显著的溶栓效果,栓塞冠脉血管很快出现再通,残存血栓较溶剂对照组分别减少了73.5％、38.0％、25.3％;心肌梗死范围明显缩小,与等剂量(10.0×104IU/kg)reteplas溶栓(62.2％)作用相似。结论瑞替普酶溶栓作用肯定,与国外同类产品溶栓作用相似。

爱地那非对阴茎勃起功能的影响

目的 研究开发新型阴茎勃起功能障碍防治药物。方法 采用阿扑吗啡刺激中枢兴奋引起清醒雄性大鼠勃起模型,通过记录海绵体内压,观察爱地那非对勃起潜伏期(TFR )、30min内勃起次数(PP30 )、勃起强度(AUC)、勃起持续时间(D)的影响;采用去势大鼠模型,观察柠檬酸爱地那非灌胃给药对电刺激大鼠阴茎TFR的影响;采用小鼠去势模型,观察小鼠捕捉潜伏期及捕捉次数影响。结果大鼠给予爱地那非1h后,可使阿扑吗啡诱导的TFR缩短,PP30 ,D ,AUC增加,3,10mg·kg- 1爱地那非使TFR分别缩短2 8.1% ,4 3.0 % ;2 4h后爱地那非10mg·kg- 1仍可缩短TFR ,较对照组比较缩短2 7.7%。3,10mg·kg- 1爱地那非使PP30分别增加4 2 .3% ,4 2 .3% ,可使D分别增加89.3% ,91.5 % ,AUC分别增加30 .3% ,74 .9% ,10mg·kg- 1仍可使2 4h后AUC明显延长。爱地那非6 ,2 0mg·kg- 1可使去势大鼠延长的TFR分别缩短4 7.9% ,78.8% ,使延长的TFR缩短一半所需的剂量为6 .4mg·kg- 1;爱地那非4 .5及15mg·kg- 1可使去势小鼠捕捉潜伏期分别缩短12 5 .8% ,15 3.0 % ,其延长的潜伏期恢复到正常所需的剂量为3.3mg·kg- 1。爱地那非1.5 ,4 .5和15mg·kg- 1可使去势小鼠爬背次数分别增加1.7,1.9和3.3倍,其爬背次数恢复到正常所需剂量为11.4mg·kg- 1。

重组人脑钠肽及米力农对麻醉犬血流动力学及肾功能的影响

目的 观察重组人脑钠肽 (rhBNP)对麻醉犬血流动力学和肾功能的作用。方法 给麻醉开胸犬恒速输注rhBNP(采用累积给药方式 ) ,或iv米力农后 ,进行血流动力学测定 ,并测定尿量、尿钠和血钠含量。结果 rhBNP可使MAP ,LVSP ,LVdp dt,PAP ,LVEDP ,TPR及RVR呈剂量依赖性下降 ,CO有增加趋势 ,尿量和尿钠排出量呈剂量依赖性增加。米力农则明显降低MAP ,PAP ,LVEDP ,TPR ,RBF及RVR ,升高LVSP ,LVdp dt和CO ,加快心率 ,对尿量、尿钠排出量和血钠无明显影响。结论 rhBNP能明显降低心脏前后负荷 ,改善心脏功能 ;可舒张肾动脉 ,有扩张血管和利尿排钠作用。米力农则有正性肌力和频率作用 ,无利尿利钠作用。

连归清心片抗心肌缺血作用研究

目的研究连归清心片对实验性急性心肌缺血动物的保护作用及可能机制。方法采用冠脉结扎致急性心肌缺血模型,测量犬心外膜心电图ST段、心肌梗死范围及血清心肌酶活性;以二磷酸腺苷(ADP)、花生四烯酸(AA)及胶原(CG)诱导大鼠血小板聚集,测定血小板最大聚集率;以体内血栓形成仪刺激大鼠动脉,测定血栓形成时间;以高分子右旋糖酐诱导高黏滞血症,测量大鼠血液流变学指标。结果连归清心片可明显改善心肌缺血犬心电图ST段的异常改变,显著减轻心肌缺血程度,缩小心肌缺血范围和缺血心肌的梗死范围,抑制血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH-L)与肌酸激酶同工酶(CK-MB)活力的升高;抑制血小板聚集,延迟血栓形成,降低血液黏稠度,改善红细胞的变形性和聚集性。结论连归清心片对缺血心肌具有明显的保护作用。

脑心清片对麻醉开胸犬血流动力学的影响

目的采用实验动物模型评价脑心清片对麻醉开胸犬血流动力学的影响。方法建立麻醉开胸犬的血流动力学研究模型,采用专用软件测量相应的血流动力学参数的改变,计算冠脉阻力、总外周阻力、心脏指数等参数。各组均以给药前各项指标为对照进行统计学处理,计算机监视记录结果及分析。结果十二指肠给予脑心清2、4 g生药/kg对麻醉开胸犬血流动力学各项指标无明显影响,8 g生药/kg给药后有降低系统血压的趋势,并显著降低总外周阻力。结论脑心清片具有明显抗心肌缺血作用,能明显改善心肌缺血后心脏血液流变学,其抗心肌缺血作用可能主要与其降低总外周阻力等有关。

重组水蛭素对血栓形成的抑制作用

目的研究重组水蛭素的抗血栓及抗凝作用。方法采用犬冠状动脉内皮损伤与临界狭窄引起犬不稳定型心绞痛模型及大鼠颈动脉电刺激血栓形成模型。结果静脉给予重组水蛭素0.6、2.0、6.0mg/kg,能抑制因狭窄及局部损伤犬冠状动脉引起的血小板依赖性血栓形成,表现在周期性冠状动脉流量降低发生次数呈剂量依赖性减少,分别减少了27.0%、43.6%、55.9%。重组水蛭素具有明显的抗凝作用,0.6、2.0、6.0mg/kg延长犬凝血酶时间(TT)、白陶土活化的部分凝血活酶时间(APTT)。重组水蛭素引起一定程度的出血作用,麻醉犬伤口失血量及黏膜出血时间较肝素钠组稍轻。重组水蛭素对麻醉犬血压及心率无明显影响。静脉给予重组水蛭素0.3、1.0、3.0mg/kg,呈剂量依赖性延长动脉血栓的形成时间,与对照组比较分别延长了22.8%、55.0%、72.0%(P值均<0.01)。结论重组水蛭素具有明显的抗血栓和抗凝作用,对不稳定型心绞痛具有明显的治疗作用。

家兔微血栓栓塞中风模型的建立及应用

目的研究脑血栓模型的建立及应用。方法采用微血栓经颈内动脉栓塞兔大脑中动脉的方法,建立微血栓栓塞中风模型并观察应用巴曲酶的效果。结果微栓子量达到(0.63±0.57)mg时可使一半动物出现中风症状,模型科学、可靠。巴曲酶0.5BU/kg治疗后6h能明显提高致半数卒中微栓子量(ES50),1.0BU/kg作用更明显,治疗后6h及24hES50分别提高了2.2倍、1.8倍;巴曲酶1.0BU/kg给药后1h可使组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)含量明显增加,较模型对照组增加了23.25%;巴曲酶0.5BU/kg及1.0BU/kg给药后可使纤维蛋白原(Fbg)含量明显降低,以给药后6h最明显;巴曲酶0.5BU/kg及1.0BU/kg给药后对脑出血类型及出血率无明显影响。结论采用微血栓经颈内动脉栓塞大脑中动脉形成微血栓栓塞中风模型,方法成功,药物评价结果可靠。

乙硫氨酸对小鼠脂肪代谢影响的研究

目的观察乙硫氨酸所致小鼠脂肪肝模型不同时间脂代谢的变化,为利用该模型研究抗脂肪肝药物及选择适宜的给药时间提供科学依据。方法小鼠分为6组,分别检测正常组血脂、肝脂及灌服乙硫氨酸后6、12、24、36、48h各组动物的血脂、肝脂变化。结果小鼠灌服乙硫氨酸后,血清TG在造型后6～48h显著升高,血清TC在造型后6～36h显著升高;肝脏TG在造型后6～36h显著升高,肝脏TC在造型后24～36h显著降低。结论乙硫氨酸诱导的小鼠脂肪肝模型在6～36h比较稳定。

体外溶栓放射分析方法

用１２５Ｉ标记的纤维蛋白原与富血小板人血浆制成类天然栓子，栓子侵入含溶栓剂的富血小板血浆中温育，通过测量血浆的放射性活度，计算出溶栓率，建立起体外溶栓放射分析方法，并对有关影响因素进行了初步的分析，也对重组葡激酶（ＳＴＡＲ）、链激酶（ＳＫ）和组织纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）的溶栓效果进行了观察。这为血液凝溶基础研究、溶栓药物的筛选和溶栓剂的溶栓效果评价提供了理想的手段。

nmhaFGF对大鼠缺血再灌注损伤心肌的保护作用

目的:研究非促分裂型酸性成纤维细胞生长因子(nmhaFGF)对缺血再灌注损伤心肌的保护作用。方法:大鼠冠脉左前降支闭塞30min后再灌注3h,再灌注前10min尾静脉注射不同剂量nmhaFGF。测定各组大鼠室性心动过速(VT)和心室颤动(VF)的潜伏期、持续时间和发生率,评定心律失常分数;再灌注24h后,测定血清AST、LDH、CK-MB含量,并计算大鼠心肌梗死面积。结果:静脉注射nmhaFGF(20,40,80μg/kg)能明显抑制缺血再灌注引起的心肌损伤。和模型组相比,nmhaFGF各组大鼠的VT和VF发生率减少,出现心律失常的潜伏期延迟,持续时间缩短;另外心肌梗死区占左室面积的百分比及梗死区占危险区百分比均有所降低;此外,血清心肌酶含量AST、LDH、CK-MB显著降低;以80μg/kgnmhaFGF作用较明显,其作用强度与8mg/kg普萘洛尔相当。结论:nmhaFGF对大鼠缺血再灌损伤心肌具有保护作用。

舒脑欣滴丸对大鼠脑膜微循环障碍的影响

目的探讨舒脑欣滴丸(SNX)对大鼠脑膜微循环障碍的治疗作用。方法70只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、SNX 13mg/kg组、SNX 26mg/kg组、SNX 52 mg/kg组、脑心通和尼莫地平组各10只。各组分别采用相应药物连续灌服给药7 d,每天1次,末次给药后1 h,大鼠尾静脉注射15%高分子量右旋糖酐5 mL/kg,制备脑微循环障碍模型。监测各组不同时间点硬脑膜表面血流量,测定血浆NO、ET-1水平。结果与正常对照组比较,模型对照组注射15%高分子量右旋糖酐后5~120 min时脑膜微循环血流量减少(P均<0.01)。与模型对照组比较,造模后30~90 min时SNX 26mg/kg组、SNX 52 mg/kg组脑软脑膜血流量增加(P<0.05或<0.01);与模型对照组比较,SNX 52 mg/kg组大鼠血浆内皮因子NO水平升高,ET-1浓度降低(P<0.05或<0.01)。SNX 52 mg/kg与临床等效剂量的脑心通、尼莫地平作用相当。结论SNX能改善大鼠脑微循环障碍。

灯盏花素对麻醉犬稳定型劳累性心绞痛的治疗作用

目的研究灯盏花素对麻醉犬稳定型劳累性心绞痛的治疗作用。方法麻醉犬狭窄冠状动脉前降支并快速起搏心脏造成稳定型劳累性心绞痛模型,用心电图ST段变化、冠脉流量及冠脉阻力等指标观察灯盏花素静脉给药对稳定型心绞痛的治疗作用。结果麻醉犬狭窄冠状动脉前降支并快速起搏心脏后,心电图ST段明显下降,硝酸甘油可明显抑制这种变化,病理模型可靠;静脉注射灯盏花素可减小快速起搏后ST段的降低程度,降低冠脉阻力。结论灯盏花素预防性给药对麻醉犬稳定型心绞痛有缓解作用。