新型vip3Aa基因的克隆与杀虫活性的测定

为了给生物防治提供更多的基因资源,以从黑龙江省分离的100株苏云金芽胞杆菌进行PCRvip3类基因鉴定,对vip3类基因进行克隆表达及生物活性测定,为vip基因储备奠定基础。利用vip3类通用引物进行基因鉴定并进行全长基因克隆表达和生物活性测定。结果表明,菌株LB73经Blast对比后发现含有vip3Aa类基因,克隆基因全长序列为2370bp,编码789个氨基酸残基,分子量为88kD,并在国际基因库GenBank中登记,其登录号为JQ228436,由Btδ-内毒素基因国际命名委员会正式命名为vip3Aa46。构建原核表达系统,并进行杀虫活性的测定。vip3Aa46甜菜夜蛾LC504.02μg/g,棉铃虫LC50387.72μg/g。生测结果表明,vip3Aa46表达的可溶性蛋白对甜菜夜蛾幼虫具有高毒力;对棉铃虫幼虫具有一定毒力。

苏云金芽胞杆菌cry2Ab、cry9Ea基因的表达及活性分析

旨在为农业害虫防治提供更多的苏云金芽胞杆菌基因资源,从中国吉林市龙潭山土壤样品中分离得到野生菌株命名为Bt LTS-7,扫描电镜显示该菌株产生晶体形状为双锥体和正方体,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示该菌株产生130 kD和71 kD的晶体蛋白,通过PCR鉴定出该菌株中含有cry2Ab和cry9Ea基因,并成功克隆到了这两个新基因,并被Bt国际命名委员会正式命名为cry2Ab28和cry9Ea9,将两个基因分别在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达,并进一步对其表达蛋白进行杀虫活性测定。结果显示,Cry2Ab28蛋白对棉铃虫(Helicoverpa armigera)初孵幼虫具有杀虫活性,LC50为32.45μg/mL。Cry9Ea9蛋白对小菜蛾初孵幼虫(Plutella xylostella)具有较高杀虫活性,LC50为0.77μg/mL。

苏云金芽胞杆菌cry7Ab9基因的克隆与杀虫活性的测定

以辽宁省千山市的22株苏云金芽胞杆菌进行PCR cry型的cry7类基因鉴定,对cry7类基因进行克隆表达及生物活性测定,为cry基因储备奠定基础.菌株QZG121经比对后发现含有cry7Ab基因.克隆该基因全长序列为3 417 bp,编码1 138个氨基酸残基,相对分子质量为130 000,并在Gene Bank中登记,基因登录号为GU936713,由苏云金芽胞杆菌国际命名委员会正式命名为cry7Ab9.通过构建原核表达系统获得cry7Ab9基因表达蛋白,并进行暗黑鳃金龟幼虫杀虫活性的测定,7天校正死亡率10 mg.L-1为11.11%、100 mg.L-1为25.93%;两周校正死亡率10 mg.L-1为33.33%、100 mg.L-1为48.15%,LC50为289.99 mg.L-1.

苏云金芽胞杆菌cry1Ib6基因的克隆、表达及活性的研究

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)能产生杀虫晶体蛋白(Insecticida Crystal Proteins,ICPs),对敏感昆虫有强烈毒性,而对高等动物和人无毒性。ICPs由cry或cyt基因编码,根据cry1I型基因设计引物,以Bt LB52菌株的质粒DNA为模板,扩增出了全长为2.1 kb的cry1I基因,其能通过表达载体pEB在大肠杆菌中高效表达为79.9 kDa的蛋白。经过AlginX软件分析该蛋白由712个氨基酸组成,分子量为79.9 kDa,等电点为6.54,为弱酸性蛋白质,NCBI Blast比对该蛋白的氨基酸序列与Cry1Ib3的相似性最高为98%,有12个氨基酸的差异。该基因已在GenBank中注册,登录号为ADK38579,并被国际基因命名委员会正式命名为cry1Ib6。它的表达产物对小菜蛾具有较高的毒力,LC50为1.196μg/mL,为抗虫转基因植物研究提供了新的基因。

急性前壁心肌梗死介入治疗时心肌无复流与QT间期离散度的关系

目的探讨急性前壁ST段抬高型心肌梗死(STEMI)急诊行经皮冠状动脉介入治疗(PCI)前后QT间期离散度的变化及与无复流的关系。方法采用回顾性病例对照研究方法,分析2014年1月至2016年10月在潍坊医学院附属益都中心医院心脏病治疗中心连续收治的259例前壁STEMI患者,其中61例无复流患者为研究组,同期随机选取70例有复流患者为对照组,观察两组患者PCI术前后QT间期离散度的变化。结果两组患者PCI术前校正的QT间期的最大值(QTcmax)、最小值(QTcmin)及QT离散度(QTcd)比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05);两组PCI术后24 h QTcmin比较,差异无统计学意义(P=0.5),但QTcmax和QTcd比较差异有统计学意义(均为P<0.05)。此外,QTcd与无复流呈正相关(r=0.64,P=0.01),经受试者工作特征曲线分析发现QTcd≥74.5 ms推测无复流的敏感度为87%,特异度为60%,曲线下面积为0.76(P=0.001)。结论急性前壁STEMI患者PCI术后的无复流与QTcd增大呈正相关,QTcd增大提示心肌水平存在无复流的可能性大。

字理识字教学点滴谈

小学语文具有很强的工具性,识字又是阅读和写作的基础,因此,识字教学是小学语文教学的关键。小学阶段要求学生掌握的汉字有3千左右,其中80％必须在一至三年级学完。又因组成字的基本笔形只有五种。

甲泼尼龙琥珀酸钠注射剂治疗呼吸窘迫综合征的临床研究

目的观察甲泼尼龙琥珀酸钠注射剂对呼吸窘迫综合征患者氧合指数(PaO_2/FiO_2)及血清生化指标的影响。方法将72例呼吸窘迫综合征患者随机分为试验组和对照组,每组36例。对照组患者给予常规治疗,试验组患者在对照组治疗的基础上,给予甲泼尼龙琥珀酸钠120 mg·d^(-1),静脉滴注,2组均连续治疗2周。观察并记录2组患者治疗前后的PaO_2/FiO_2、急性生理与慢性健康状况Ⅱ(APACHEⅡ)评分,检测2组患者的一氧化氮(NO)、C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,并观察2组药物不良反应发生情况。结果治疗后,试验组和对照组的PaO_2/FiO_2分别为(287.62±24.57)和(213.21±25.67)mmHg,APACHEⅡ评分分别为(11.23±1.66)和(15.59±2.21)分,差异均有统计学意义(均P<0.05)。试验组和对照组的NO分别为(58.88±32.76)和(74.28±32.94)μmol·L^(-1),IL-6分别为(167.94±25.29)和(213.11±21.50)pg·mL^(-1),TNF-α分别为(22.35±8.93)和(36.30±9.88)pg·mL^(-1),CRP分别为(6.43±3.02)和(9.25±2.94)mg·L^(-1),差异均有统计学意义(均P<0.05)。试验组出现短期血压升高2例,对照组无药物不良反应,差异无统计学意义(P>0.05)。结论对呼吸窘迫综合征患者给予甲泼尼龙琥珀酸钠治疗,可以显著地提高患者的PaO_2/FiO_2、降低APACHEⅡ评分及相关血清生化指标,提高患者的治疗效果,是安全有效的。

急性心肌梗死介入治疗无复流现象的研究进展

急诊经皮冠状动脉介入治疗是治疗急性心肌梗死的主要措施。虽然冠脉介入治疗开通梗死相关动脉后绝大多数患者冠脉血流恢复,但仍有部分患者会发生无复流现象,且严重影响患者预后。冠脉介入治疗术中无复流的发生与多种因素有关,导致该现象的病因机制比较复杂且各影响因素之间又密切相关。因此,对各影响因素致病机理的进一步认识有助于及早地判断及评估发生无复流的概率,对制定个体化的预防和治疗策略,防止无复流的发生,具有重要的临床意义。