一种巨噬细胞迁移体分离方法的建立

目的 建立一种巨噬细胞(RAW264.7)迁移体(migrasomes)的分离方法,并进行迁移体的鉴定。方法 采用扫描电镜观察RAW264.7细胞产生迁移体的形态特征,利用0.45μm滤器反向过滤洗脱的方式分离迁移体,通过透射电镜观察迁移体的形态特征;Western blot法检测迁移体的特征性标志物的表达情况;LabChip生物分析仪分析迁移体携带的RNA情况。结果 扫描电镜观察RAW264.7细胞尾部形成的收缩丝的尖端或分叉处附着具有膜性结构的迁移体;透射电镜观察分离的迁移体呈典型的椭圆形囊泡样结构且膜表面有褶皱;迁移体表达其特征性标志物糖基磷脂酰肌醇锚定生物合成K类(PIGK)、表皮生长因子结构域特异性O-连接的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(EOGT)、四跨膜蛋白家族4(TSPAN4),但不表达细胞外囊泡(EV)的标志物肿瘤易感基因101(TSG101)和凋亡关联基因2相互作用蛋白X拟南芥同源物(ALIX);此外,分离的迁移体携带有丰富的小RNA,长度约为25~200个核苷酸。结论 成功建立了一种从巨噬细胞中提取结构完整且质量较高的迁移体的方法。

迁移体的生物学功能研究进展

迁移体是一种最新发现的由迁移细胞所产生的一类细胞器,是指在细胞迁移过程中尾部形成的收缩丝的尖端或分叉处产生的具有膜性结构囊泡,该产生过程称为“迁移性胞吐”。这些囊泡最终会释放到细胞外空间或被周围细胞所摄取,介导细胞质内容物的释放和细胞间通讯,且已证实其对胚胎发育过程中的器官形成至关重要。本文综述了迁移体的发现、形成机制、生物学功能、潜在临床应用及其与外泌体的异同等方面的研究进展,为迁移体的生理和病理功能研究提供理论基础。