真鲷虹彩病毒(Red Sea Bream Iridovirus, RSIV)一直被世界动物卫生组织(Office International Des Epizooties, OIE)列为必报疫病病原,为了精准快速检测该病原,本文选取真鲷虹彩病毒保守基因片段为靶序列,设计并合成SYBR Green I实时荧...真鲷虹彩病毒(Red Sea Bream Iridovirus, RSIV)一直被世界动物卫生组织(Office International Des Epizooties, OIE)列为必报疫病病原,为了精准快速检测该病原,本文选取真鲷虹彩病毒保守基因片段为靶序列,设计并合成SYBR Green I实时荧光PCR引物,将另行扩增获得的特异PCR目的基因片段克隆到pMD18-T载体,得到重组质粒标准品。通过优化反应条件,建立了RSIV SYBR Green I实时荧光PCR检测法,并对该方法进行了灵敏度、特异性和重复性分析。试验结果证明,该反应体系的最佳引物浓度为200 nmol/L;检测限最低可达到0.04 pg/反应,其灵敏度比普通PCR要高出10倍。特异性试验表明,该方法与IHNV、IPNV、SVCV和VHSV这4种水生动物病毒无交叉反应,只与目标病原有特异性扩增。重复性试验显示,该方法具备良好的重复性及稳定性。以上结果显示,研究建立的RSIV的SYBR Green I实时荧光PCR方法具有较高的敏感性、良好的特异性及重复性。适用于水生动物及产品中真鲷虹彩病毒的检测与监测,对加强进出口水产品中RSIV的检验检疫具有十分重要的意义。展开更多
文摘真鲷虹彩病毒(Red Sea Bream Iridovirus, RSIV)一直被世界动物卫生组织(Office International Des Epizooties, OIE)列为必报疫病病原,为了精准快速检测该病原,本文选取真鲷虹彩病毒保守基因片段为靶序列,设计并合成SYBR Green I实时荧光PCR引物,将另行扩增获得的特异PCR目的基因片段克隆到pMD18-T载体,得到重组质粒标准品。通过优化反应条件,建立了RSIV SYBR Green I实时荧光PCR检测法,并对该方法进行了灵敏度、特异性和重复性分析。试验结果证明,该反应体系的最佳引物浓度为200 nmol/L;检测限最低可达到0.04 pg/反应,其灵敏度比普通PCR要高出10倍。特异性试验表明,该方法与IHNV、IPNV、SVCV和VHSV这4种水生动物病毒无交叉反应,只与目标病原有特异性扩增。重复性试验显示,该方法具备良好的重复性及稳定性。以上结果显示,研究建立的RSIV的SYBR Green I实时荧光PCR方法具有较高的敏感性、良好的特异性及重复性。适用于水生动物及产品中真鲷虹彩病毒的检测与监测,对加强进出口水产品中RSIV的检验检疫具有十分重要的意义。