拟南芥AtPUB18的亚细胞定位和酶活性及AtPUB18的表达

通过RT-PCR技术从拟南芥中克隆到AtPUB18全长ORF。利用VectorNTI和MEGA 5.0对蛋白序列进行生物信息学分析结果显示,AtPUB18和AtPUB19蛋白序列相似性为74.9%,一致性为63.5%;构建AtPUB18启动子(1 974bp)融合GUS报告基因载体并转化拟南芥,组织化学染色分析显示,低温和干旱诱导后转基因植株中AtPUB18表达水平显著提高;构建AtPUB18与绿色荧光蛋白基因(GFP)融合的瞬时表达载体并转化原生质体,激光共聚焦显微镜观察发现,AtPUB18-GFP融合蛋白分布在细胞核和细胞质中;构建AtPUB18与麦芽糖结合蛋白基因(MBP)融合表达载体并转化大肠杆菌表达融合蛋白,纯化后的蛋白进行泛素连接酶活性检测结果显示,在小麦泛素激活酶E1和人泛素结合酶E2存在时,AtPUB18具有泛素连接酶活性。研究表明,AtPUB18是一个有功能的泛素连接酶,定位在细胞膜和细胞质中,可能参与拟南芥对非生物胁迫的响应。

高职思政教育与全程化职业生涯指导的有机结合

加强和改进高职大学生的思想政治教育工作,在思想政治教育工作中,转变思路,革新观念,努力在高职的思想政治教育中实施全程化的就业指导与职业生涯发展与规划教育。是目前高职院校面临严峻的就业形势,积极帮助和引导大学生分析形势、交流经验、理清思路、明确大学学习和未来职业发展路径,不断提升就业竞争力,进而开创高职大学毕业生就业工作新局面的迫切要求。

高职院校“职业生涯与择业就业指导”课程与思想政治教育的有机整合

教育部和各省教育厅多年来始终十分重视各高校"职业生涯与择业就业指导"课程的开设和发展,但各高校尤其是高等职业院校由于诸多原因,全面提高高职大学生综合素质尤其是职业素质和就业竞争力方面的课程目标却难以实现。文章针对这一实际问题,探讨了通过"职业生涯与择业就业指导"课程与高职院校思想政治教育工作的有机整合,不仅可以确保对高职大学生开设"职业生涯与择业就业指导"课程教育目标的全面实现,而且可以提高高职院校政治思想教育工作的层次性、前瞻性和实效性。

基于EPD理念建构高职特色职业发展与就业创业教育体系

随着高等职业教育的持续快速发展,高职大学生就业问题引起政府和全社会的高度重视,成为关系人才资源合理配置、经济社会可持续发展和社会稳定的大事。目前,单一的就业指导课已无法满足高职大学生成功求职就业的需要,亟须构建全新的高职大学生职业发展与就业创业教育体系。文章旨在探讨通过基于EPD理念的具有高职特色的职业发展与就业创业教育体系的构建,培养高职大学生面向就业市场和未来职场的可持续发展的职业素养,进而全面提升大学生的就业竞争力。

高职院校“双创型”人才培养策略

文章就当前高职院校＂双创型＂人才的培养工作提出：一是时代呼唤培养＂双创型＂人才;二是＂双创型＂人才培养现状;三是＂双创型＂人才培养策略。

陆地棉Ghkinesin13亚家族基因的克隆及表达特征分析

Kinesin家族是一类马达蛋白,它们能利用ATP水解所释放的能量驱动自身携带物质分子沿着微管运动,在细胞形成、细胞伸长等方面起着关键作用。本研究以拟南芥Atkinesin-13A蛋白序列作为探针序列,利用Blast比对从二倍体雷蒙德氏棉的基因组数据库中发现7个具有较高同源关系的基因。根据基因序列设计引物,利用RT-PCR技术从陆地棉纤维中分离出7个基因。依据7个基因与Atkinesin-13A和Atkinesin-13B的同源性高低,依次将其命名为Gh KIS13A1、Gh KIS13A2、Gh KIS13A3、Gh KIS13B1、Gh KIS13B2、Gh KIS13B3和Gh KIS13B4。生物信息学分析表明,7个Ghkinesin13均含有典型的KISC马达区域、ATP结合位点和微管结合位点,其马达区域属于中央马达。多重序列比对和进化树分析发现,这7个蛋白可被分为2个(Kinesin13A和Kinesin13B)亚类。实时荧光定量PCR结果表明,7个Ghkinesin13亚家族基因在棉花各组织中均有表达,但表达模式各不相同,其中Gh KIS13B4在纤维中优势表达,表明其在纤维发育过程中可能发挥着重要作用。

在就业指导中深化思想政治教育

就业是民生之本，也是大学教育的终极目标。大学生就业指导工作是加强和改进大学生思想政治教育的重要逢径和载体，思想政治教育是大学生就业指导工作的核心，帮助大学生树立正确的世界观、人生观、价值观、择业观，为祖国、为人民、为社会做贡献的同时找到自己的人生坐标．实现自己的理想和价值。

新课标思想政治教学中荣辱观的落实

现代教学论认为,思想政治课,不仅是知识传授的过程,更重要的是道德、情感、人生观、世界观的培养过程,它是知识传授和情感培养的和谐统一,从这门课的性质上来说,它很大程度上担负着对学生进行公民道德教育的重任。胡锦涛总书记3月4日在全国政协民盟民进联组会上提出“:在我们社会主义社会里,要引导青少年树立社会主义荣辱观,坚持以热爱祖国为荣、以危害祖国为耻。

棉花WOX转录因子家族基因的全基因组鉴定与分析

为了挖掘可用于棉花花器官或纤维发育研究的候选基因,基于已发布的陆地棉全基因组数据,利用生物信息学的分析方法鉴定了陆地棉WOX(WUSCHEL-related homeobox,WOX)转录因子基因家族,并从染色体分布、基因及蛋白理化性质、蛋白结构、多重序列比对、系统进化树和基因表达模式等方面对该基因家族的特征进行了比较分析。结果表明,鉴定到37个陆地棉WOX转录因子家族基因,命名为GhWOX1~GhWOX37。亚基因组定位结果显示,37个陆地棉WOX转录因子家族基因分布在除了A04、A06、A09、D04、D06和D09号亚基因组以外的20个亚基因组,A亚组比D亚组多1个GhWOX转录因子家族基因。多重序列比对分析棉花WOX转录因子家族成员均具有高度保守的同源异型结构域;系统进化树分析发现棉花WOX转录因子家族可以分为3个亚家族(Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类),各亚类分别含有23,7,7个GhWOX转录因子家族基因成员。对NCBI中陆地棉的EST数据库比对分析,有11个GhWOX转录因子家族成员没有可匹配的EST序列,其他26个GhWOX转录因子家族成员在棉花的根、茎、叶、花、胚珠、纤维和种子等组织和器官中广泛表达。为深入研究棉花和其他植物中WOX家族的鉴定和功能研究奠定了基础。

盐胁迫对拟南芥AtPUB18基因的诱导表达及其启动子分析

用300mmol/L NaCl处理拟南芥幼苗,分别于处理后0、1、2、4、8、16、24、48h通过Northern Blot检测其AtPUB18基因的表达量。结果显示:拟南芥AtPUB18基因的表达量受高盐胁迫的诱导而升高,于处理后4h表达量达到最高,处理后16h表达量最低。采用PCR技术克隆AtPUB18的启动子,序列为1 974bp;序列分析发现启动子内含有大量与非生物胁迫相关的顺式作用元件,如HSE、LTR、MBS及ABRE;将启动子克隆到表达载体pCambia1300-221-GUS中,驱动报告基因GUS表达。组织化学染色结果表明,未经过高盐处理的幼苗中GUS基因表达水平很低;300mmol/L NaCl处理后GUS基因表达量显著升高。研究表明,AtPUB18的表达受高盐胁迫诱导,且AtPUB18基因的启动子是一个盐胁迫诱导型启动子。

棉花多胺HPLC的测定方法优化及其在体细胞胚胎发生过程中的变化规律

利用HPLC法测定棉花组织培养物中的多胺含量,以棉花品种新陆早33号愈伤组织为材料进行多胺含量的测定,结果表明：冰浴浸提时间及衍生反应时间优化后,可将内源腐胺（Putrescine,Put）、亚精胺（Spermidine,Spd）、精胺（Spermine,Spm）在15min完全分离并定量测定,线性关系良好（r＞0.99）,回收率高（96.8％～103.1％）;建立了棉花多胺HPLC测定方法.利用该方法对棉花体细胞胚胎发生各时期培养物进行多胺含量测定,结果显示胚性愈伤组织形成后多胺含量显著上升,且腐胺与亚精胺和精胺的比例随着体细胞胚胎发生持续下降,表明非胚性细胞向胚性细胞转化过程中,二胺（腐胺）不断向三胺（亚精胺）和四胺（精胺）转化,特别是在胚状体形成期,亚精胺和精胺的积累显著增加,初步揭示了棉花体细胞胚胎发生过程中多胺的变化规律.

在就业指导中深化思想政治教育

高职教育是高等教育体系中一个特殊层次的教育，在整个国民教育中有着不可或缺的地位和作用。它所培养的人才不仅是社会所需要的，而且是其他层次的人才所无法取代的。然而，随着我国高校“不包分配，择优录用，竞争上岗”的新就业机制的确立，随着高等院校的不断扩招，毕业生人数急剧增加，大学生的就业问题尤其是高职毕业生的就业问题成了社会关注的热点，就业指导已成为时代赋予高校的重要任务，

陆地棉SRO基因家族的鉴定及表达分析

SRO是植物特有的类RCD-ONE蛋白家族,在植物抵御各种生物和非生物胁迫过程中具有重要的作用。本研究利用生物信息学方法从陆地棉遗传标准系TM-1(Gossypium hirsutum L.acc.TM-1)基因组中鉴定到12个SRO基因家族成员。多重序列比对及进化树分析表明,12个陆地棉SRO均含有PARP和RST结构域,聚为3类,即A、B和C亚家族。转录组数据分析表明,TM-1全基因组中的Gh_D12G1442在茎中优势表达,Gh_D05G2064在萼片和雄蕊中优势表达;Gh_A05G3788在雄蕊中优势表达,Gh_A12G1318在雄蕊和纤维中优势表达;Gh_A12G2480、Gh_D12G2608、Gh_A05G2257和Gh_D05G2516在纤维中优势表达;Gh_A08G1390、Gh_D08G1685、Gh_A12G2663和Gh_D12G2054具有较为广泛的组织表达。逆境胁迫处理试验表明,Gh_A08G1390明显受冷处理和盐处理的诱导,Gh_D12G2054、Gh_D08G1685、Gh_A12G2663基因在不同的胁迫处理下受到不同程度的诱导。

加强思想政治教育,开创高职就业工作新局面

高职院校毕业生就业工作关系到社会的稳定,同时也关系到高职院校的自身发展。在就业指导工作中,转变思路,革新观念,努力实践,把全程化就业指导与思想政治教育有机结合,逐步开创就业工作新局面。

陆地棉遗传标准系TM-1的特性及其耐冷性

【目的】通过系统调查TM-1农艺性状及纤维品质,研究芽期和苗期的耐冷性,以及对其在低温胁迫条件下的耐冷相关基因进行实时荧光定量分析,深入挖掘其耐冷机理,为该种质利用提供理论依据。【方法】在田间,以中棉所35为对照,以人工调查方式对TM-1进行表型鉴定,依据国际校准棉花标准(HVICC)测定纤维品质,同时采用卡那霉素筛选和分子鉴定进行Bt检测。以抗冷品种豫2067和冷敏感品种衡棉3号为对照,对TM-1芽期和子叶期进行耐冷性鉴定,4℃低温处理,然后正常条件下恢复生长7 d,调查芽期相对子叶平展率及子叶期植株受胁迫后的冷害级别,计算冷害指数和耐冷指数;使用便携式叶绿素仪进行叶片活体测定,以SPAD值代表相对叶绿素含量;在三叶期进行4℃低温处理24 h,利用实时荧光定量方法进行耐冷相关基因在叶片中的表达测定。【结果】表型鉴定结果显示,TM-1叶片较大,颜色深绿,生育期较长,约135 d,霜前籽棉产量为2791.50 kg·hm^(-2),株高94.60 cm,霜前籽棉产量、株高、单株果枝数和单株结铃数均高于中棉所35,其他农艺性状与中棉所35接近,纤维品质中等水平。卡那霉素和试纸检测结果表明TM-1与中棉所35均不含Bt。芽期耐冷性鉴定结果表明,与对照处理相比,TM-1叶片的相对叶绿素含量极显著下降,株高极显著降低,低温胁迫极显著抑制了棉花下胚轴的伸长,并且抑制了叶片叶绿素的合成;低温处理后,TM-1的主根受到了伤害,恢复生长后侧根却比较发达,侧根生长优于对照。TM-1芽期耐冷级别达到高抗冷。苗期抗冷性鉴定结果表明,与对照相比,TM-1的相对叶绿素含量显著下降,株高极显著降低。TM-1子叶期耐冷指数为85.32%,显著高于抗冷材料豫2067,耐冷级别达到抗冷。TM-1三叶期受低温胁迫24 h后,在叶片中,有9个耐冷相关基因上调表达,上调表达倍数显著或极显著高于衡棉3号;其中,脱水素基因在叶片中上调表达,表达倍数与其在豫2067叶片中的表达倍数相近,是衡棉3号叶片中表达倍数的4.69倍,LEA3在TM-1叶片中的上调表达倍数显著高于豫2067和衡棉3号。总之,TM-1属于中晚熟品系,纤维品质中等,不含Bt;芽期和子叶期均比较抗冷,属于比较抗冷的类型;与耐冷相关的基因在TM-1的叶片中受低温诱导表达,拥有特别的表达模式。【结论】TM-1具有稳定的农艺性状,纤维品质达中等水平,不含Bt,可用作转外源基因的良好受体;因为其良好的耐冷特性,TM-1可以作为棉花耐冷性育种改良的重要亲本来源和基因克隆的基因源。

陆地棉GhWOX4转录因子的克隆与生物信息学分析

采用反转录PCR(简称RT-PCR)技术从陆地棉(Gossypium hirsutum L.)中克隆获得1个WOX基因,命名为Gh WOX4(NCBI登录号:KX900572)。序列分析显示,Gh WOX4的开放阅读框为657 bp,编码含218个氨基酸残基的蛋白,具有典型高度保守的同源异型HD结构域,属于WOX转录因子家族。生物信息学分析表明,该基因蛋白相对分子量为25.19 ku,等电点为10.04,为不稳定蛋白。二级结构以无规则卷曲为蛋白最大量的结构元件。与其他植物同源基因序列比对显示,其同源区域主要集中在同源异型HD结构域。系统进化树分析表明,Gh WOX4属于Ⅰ类家族成员,与陆地棉Gh_D01G1055、拟南芥At WOX4和可可树Tc WOX4等亲缘关系最近,处于同一个进化分支,推测其可能与之前报道的拟南芥WOX基因类似,参与植物维管束及花器官发育。

探索高职教育创业创新教育新模式 培养创新型复合人才——河北外国语职业学院《创业创新》教学实践

我国经济体制的转轨、产业结构的调整和知识经济的发展迫切需要大批具有创业创新精神和实践能力的人才,高职院校如何培养具有创业创新精神的实用性、复合型人才,是21世纪高职教育的一个重要课题。本文对实施高职学生创业与创新教育的教学实践模式进行了探讨。

中棉所100免整枝高产栽培技术探讨

中棉所100是2016年通过国家审定的转基因抗虫棉新品种。2016―2017年对中棉所100进行了不同的栽培密度和整枝方式探讨。结果表明,中棉所100是一个易于管理的棉花品种,在4.50万株·hm^-2、6.75万株·hm^-2、9.00万株·hm^-2、11.25万株·hm^-2的种植密度下,均可以获得较高的产量;在9.00万株·hm^-2的种植密度下,减少整枝或者不整枝,均可以获得较高的产量,并且产量和纤维品质相关性状变化均不显著。

外语职业学院“两课”教学改革探索

近几年来职业教育得到大力发展,2005年10月国务院再次发布《关于大力发展职业教育的决定》,发展职业教育已成为全社会的共识。面对职业教育发展的大好形势,如何将“两课”教学和外语学院职业教育特色相结合,成为外语职业学院“两课”教学的新课题。

棉花微管结合蛋白基因GhCLASP1的克隆与表达分析

CLASP蛋白(CLASPs)是一种能够特异地与微管结合,参与调节微管结构与功能的微管结合蛋白(MAPs),在植物细胞形成、细胞伸长等方面起着关键作用。该研究利用电子克隆结合RT-PCR技术从陆地棉(Gossypium hirsutum L.)中克隆获得1个CLASP基因,命名为GhCLASP1(NCBI登录号为KP742966)。序列分析显示,GhCLASP1属于CLASP基因家族,开放阅读框长度为4 188bp,编码含1 395个氨基酸残基的蛋白;GhCLASP1蛋白含有1个HEAT重复结构域和2个CLASP-N端结构域。进化分析表明,GhCLASP1与可可树(Theobroma cacao)CLASP蛋白的亲缘关系最近。qRT-PCR分析表明,GhCLASP1在棉花的根、茎、叶、花及纤维发育的不同时期均有表达,且GhCLASP1基因表达量最大值出现在纤维发育次生壁加厚期(开花后27d),推测GhCLASP1基因可能对棉花纤维次生壁的形成起着重要的作用。利用本氏烟草(Nicotiana benthamiana)叶片瞬时表达系统对GhCLASP1基因编码的蛋白进行亚细胞定位结果显示,GhCLASP1蛋白定位在细胞膜上。上述结果为进一步研究CLASP基因在棉花中的功能奠定了基础。