基于网络药理学从铁死亡途径研究补阳还五汤调控缺血性脑卒中的作用机制

目的利用网络药理学方法探究补阳还五汤经由铁死亡途径调控缺血性脑卒中的作用机制。方法通过TCMSP、PharmMapper数据库完成补阳还五汤处方中各药物的化学成分、靶点基因及其相应对接得分的收集,采用KEGG、GeneCards数据库获取疾病相关靶点;采用Cytoscape 3.6.1获取补阳还五汤调控缺血性脑卒中铁死亡途径的作用候选靶点网络图,并对该图进行模块分析和二次筛选;KOBAS 3.0对候选靶点与模块基因进行KEGG通路富集;采用Western blot技术检测PC12细胞氧化应激模型p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达。结果共得到补阳还五汤主要活性成分10个,综合文献分析得缺血性脑卒中铁死亡途径关键靶点3个,主要KEGG通路7条。验证实验结果提示补阳还五汤通过PI3K-Akt-mTOR信号通路对氧化应激损伤的PC12细胞发挥保护作用。结论补阳还五汤调控缺血性脑卒中铁死亡途径可能与HSP90AA1、EGFR、GRB2等靶点及MAPK、PI3K-Akt等信号通路有关,其中HSP90AA1靶点和PI3K-Akt信号通路可能是关键机制之一。

内质网应激对缺血性脑卒中神经元凋亡与自噬的调控及中医药的干预

内质网作为细胞内的一种膜质细胞器,通过参与分泌蛋白和跨膜蛋白的合成、折叠、成熟和翻译后修饰以维持细胞内稳态,与疾病的发生发展密切相关。当内质网环境受到干扰后蛋白质将发生折叠或错误折叠,此时内质网应激被激活,可对神经元的凋亡与自噬进行调控,在缺血性脑卒中中扮演着重要角色。本文从内质网应激的信号通路入手,探讨内质网应激与神经元凋亡和自噬的关系,介绍中医药通过内质网应激途径调控缺血性脑卒中神经元凋亡与自噬的研究概况,为研究中医药在缺血性脑卒中的作用机制提供新的现代医学的理论支持和作用靶点。

补阳还五汤类方提取物对PC12细胞氧化应激损伤模型凋亡与自噬的调控

目的从凋亡与自噬的调控探讨补阳还五汤类方提取物对PC12细胞氧化应激模型的保护机制。方法以不同浓度H2O2刺激PC12细胞制备不同损伤程度的氧化应激模型,采用MTT法确定补阳还五汤类方提取物对氧化应激损伤初期和加剧期发挥保护作用的有效浓度,流式细胞术和TUNNEL法检测细胞凋亡情况,透射电镜和mRFP-GFP-LC3腺病毒双标法检测细胞自噬情况,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白(Bcl-2和Bax)与自噬相关蛋白(Beclin1、LC3A和LC3B)的表达。结果分别以0.5、2.0 mmol/L H2O2处理PC12细胞制备氧化应激损伤的初期模型和加剧期模型;与对照组比较,模型组细胞凋亡率增加,自噬程度加剧,Bax/Bcl-2比例增加,Beclin1和LC3B表达上调,LC3A表达下调(P<0.05);与氧化应激损伤初期的模型1组比较,补阳还五汤类方提取物均能下调Bax/Bcl-2,抑制凋亡率,并一定程度上调Beclin1和LC3B/LC3A的表达,激活自噬(P<0.05);当氧化应激损伤程度加剧时,模型细胞中出现较高水平的凋亡与自噬,此时,两方则通过抑制凋亡和降低自噬,共同发挥保护作用。结论补阳还五汤类方提取物可通过对凋亡与自噬的交互动态调控对不同程度损伤的氧化应激模型细胞挥发保护作用。