河南地区青年鹅源细小病毒分离鉴定和全基因组序列分析

小鹅瘟(goose plague,GP)是由鹅细小病毒(goose parvovirus,GPV)感染引起的一种急性、致死性、高度接触性水禽传染病,主要感染3周龄以内的雏鹅和雏番鸭,发病率和死亡率可达100%,给多个国家的水禽养殖业带来了巨大的经济损失。青年鹅对GPV具有一定抵抗力,多表现为隐性感染,临床上常常忽视该群体GP的防控。2020年6月,河南开封某地养鹅场雏鹅群和青年鹅群相继发病。为了确定其病因和致病原分子流行学情况,本研究无菌采集濒死青年鹅肝脏、脾脏和小肠等组织样品,通过PCR/RT-PCR检测样品中鹅细小病毒(GPV)、鹅星状病毒(GAstV)、禽流感病毒(AIV)、禽副黏病毒1型(APMV-1)和禽呼肠孤病毒(GRV)等病原,并针对致病原进行分离鉴定、全基因组测序和遗传演化分析。结果表明,通过PCR/RT-PCR方法对其常见鹅致病病原核酸进行检验,发现病死鹅组织检测到GPV(3/3)和GAstV(1/3),AIV、APMV-1和GRV等病原的核酸检测阴性。挑选单独感染的病鹅病料组织,研磨处理后接种健康鹅胚,成功分离到1株青年鹅源GPV命名为GPV/HNKF-2020株。随后通过重叠PCR方法对GPV/HNKF-2020株进行全基因组测序,序列分析发现,与经典GPV毒株Virulent B株和疫苗株SYG61v株相比,GPV/HNKF-2020株ITRs区域70~83bp和280~293bp间存在两段14bp基因缺失。GPV/HNKF-2020株与2016年以来国内GPV分离株序列相似性高,尤其是与DY16株、RC16株和鸵鸟源HB-2019株相似性高达99.5%。基于全基因组序列和VP3结构蛋白序列的遗传演化分析结果均显示GPV/HNKF-2020株与2016年以来国内GPV分离株亲缘关系最近,属于DY-16like分支的毒株。与经典GPV毒株、疫苗株和NGPV毒株属于同一个大的分支,遗传关系较近。此外,GPV/HNKF-2020株含有7个特有的碱基突变位点,其中G942A突变导致NS1发生R145K氨基酸突变。综上所述,本研究确定了该鹅场青年鹅发病致死系感染GPV所致,并进一步分离鉴定了流行毒株和分析了国内GPV的流行情况,为该病的生物学特性研究和科学防控奠定了一定的理论基础。