云南大理地区戊型肝炎分子流行病学特性分析

通过酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和反转录-套式聚合酶链式反应(reverse transcription nested polymerase chain reaction,RT-nPCR)对喜食生食的云南省大理地区普通人群进行以抗体和核酸检测为主的戊型肝炎流行病学调查。结果发现,HEV IgG抗体阳性率为62.50%(65/104),IgM抗体阳性率为3.84%(4/104);HEV RNA阳性率为12.50%(13/104)。对HEV RNA阳性样本经克隆测序后进行同源性比对和进化分析,结果表明在云南大理地区流行的HEV毒株属于HEV 4型,4h亚型,且与大理羊HEV存在较高的同源性。上述发现为进一步探究我国西南地区戊型肝炎病毒的感染情况及HEV跨种间传播提供了依据。

稳定表达eGFP-戊型肝炎病毒复制子的建立及体内外特征

戊型肝炎病毒(HEV)是急性病毒性肝炎的主要病原体.为了寻找有效的HEV研究工具,利用反向遗传学构建了携带绿色荧光蛋白(eGFP)的重组HEV感染性克隆——eGFP-HEV.eGFP-HEV转染Huh7.5.1细胞后,在荧光显微镜下能够直接观察到荧光信号,可以实时追踪HEV的复制情况,将eGFP-HEV的子代病毒粒子接种细胞,利用免疫荧光和qRT-PCR验证了其传染性.eGFP-HEV细胞培养系统可以通过直接观察绿色荧光信号来评价药物的抗病毒效果,为HEV药物筛选提供了重要工具.此外,在接种eGFP-HEV的BALB/c裸鼠的胆汁和粪便中也可追踪到eGFP-HEV的绿色荧光信号.值得注意的是,感染小鼠肝脏中表达的HEV抗原量与eGFP的荧光强度高度匹配,可以利用eGFP的荧光信号代表HEV的病毒滴度.携带绿色荧光蛋白的eGFP-HEV感染性克隆在体内、外的成功表达将加快HEV的研究,有利于抗HEV药物或疫苗的研发.

天然免疫抗病毒因子RIG-I过表达对HEV复制的抑制作用

视黄酸诱导基因I(retinoic acid inducible gene-I, RIG-I)在宿主天然免疫过程中具有抑制多种RNA病毒复制的作用.为了探究HEV感染过程中宿主天然免疫抗病毒因子RIG-I是否能够抑制HEV的复制,本文采用A549细胞及Huh7.5.1细胞接种HEV;瞬时转染RIG-I真核表达质粒;通过荧光显微镜、Real-time qPCR及Western-blot方法,分析细胞中RIG-I、IRF3和I型干扰素等细胞因子及HEV表达水平变化.结果显示细胞感染HEV后,RIG-I的表达水平显著上升;当细胞中RIG-I过表达时,可显著抑制HEV的复制;RIG-I可上调IRF3的表达,进而刺激I型干扰素的产生进行抗HEV作用.本研究明确了RIG-I过表达具有抑制HEV复制的作用,为今后进一步探究宿主天然免疫防御HEV感染提供了依据.

戊型肝炎病毒感染调控TLR3信号通路的研究

戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是导致急性戊肝的主要原因.通过建立基因IV型HEV感染A549细胞模型,研究病毒感染后TLR3信号通路相关因子表达的变化.病毒感染A549细胞后通过实时荧光定量PCR检测IFN-β的mRNA表达量,Western blot分析磷酸化IRF3(pIRF3)和IKKε蛋白表达水平的变化.结果表明:HEV感染A549细胞后细胞内IFN-β的相对表达水平显著下降,TLR3信号通路介导的pIRF3及IKKε蛋白在病毒感染后表达量显著下降.基因Ⅳ型HEV能够抑制TLR3信号通路介导的IRF3的磷酸化及IKKε蛋白的表达,从而抑制了IFN-β的表达,为进一步研究HEV复制机制和致病机理奠定基础.