酶放大镧系元素发光法测定碱性磷酸酶

报告了应用酶放大镧系元素发光法测定碱性磷酸酶的方法．应用５氟水杨酸磷酸酯作为酶底物，并对方法学中的多种因素进行了最佳比．用甲基硅油（Ｉ）改进了信／噪比的稳定性．方法的灵敏度为４Ｕ／Ｌ．精密度为１０％．精密度为１０％的浓度范围是２００～３００×１０２Ｕ／Ｌ．测量值的相对误差＜１０％．测定了血清中的碱性磷酸酶浓度，回收率为９３％～９５％．

核酸杂交的酶放大时间分辨荧光分析

目的为了建立一种新的非同位素的核酸杂交的测定方法－酶放大时间分辨荧光分析法（ＥＡＴＲＦＡ）或酶放大镧系元素发光分析法（ＥＡＬＬ），使核酸杂交分析能更广泛地应用于临床诊断。方法将生物素－链霉亲和素的高亲和力和放大作用、酶放大作用、镧系元素螯合物的固有优点和时间分辨测量技术结合起来。通过碱性磷酸酶把５－氟水杨酸磷酸酯转变为５－氟水杨酸（５－ＦＳＡ），５－ＦＳＡ与Ｔｂ３＋和ＥＤＴＡ形成发荧光的三元复合物。结果对靶ＰＢＲ３２２ＤＮＡ测定的标准曲线范围宽，可达三个数量级；灵敏度为１０ｐｇ；准确度为９０％～１１５％。研究和优化了紫外灯照射时间，生物素化探针、ＡＰ－ＳＡ、５－ＦＳＡＰ和Ｔｂ－ＥＤＴＡ等的浓度以及洗涤方法等主要影响因素。发现了新的荧光稳定技术。结论核酸杂交的ＥＡＴＲＦＡ或ＥＡＬＬ是一种灵敏的无需转移的简单的全新分析方法，有很好的应用前景。

碱性磷酸酶标记链霉亲和素

碱性磷酸酶标记链霉亲和素 （ Ａ Ｐ Ｓ Ａ） 是酶放大时间分辨荧光免疫分析 （ Ｅ Ａ Ｔ Ｒ Ｆ Ｉ Ａ） 通用的、最关键的试剂． 报告了 Ａ Ｐ Ｓ Ａ 的戊二醛二步标记方法． 用自行研制的荧光发展溶液和 Ａ Ｐ 的底物５氟水杨酸磷酸酯测定了标记物 Ａ Ｐ Ｓ Ａ 的特性， Ａ Ｐ 的标记回收率为３８７ ％ ； Ａ Ｐ Ｓ Ａ 稀释２００ ～１２ ８００ 倍时， 稀释倍数和 Ｔｂ 的信／ 噪比呈线性关系； 至少在两个月内， Ａ Ｐ Ｓ Ａ

铕标记抗癌胚抗原单克隆抗体C_（17）的研究和应用

用合成的Ｎ′－（对－异硫氰基苄基）－二乙三胺－Ｎ￣１，Ｎ￣２，Ｎ￣３，Ｎ￣３－四乙酸铕钠为螫合剂。用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０凝胶柱层析分离标记Ｃ＿１７和过量试剂．分部收集的层析物的光密度图和荧光强度图完全一致。蛋白峰处两管标记Ｃ＿１７的比活性分别为５．２和８．９Ｅｕ￣（３＋）离子每Ｃ＿１７分子，而且Ｃ＿１７的标记回收率为６４％。标国家自然科学基金资助记Ｃ＿１７至少在６个月内是稳定的。用铕标记物得到的时间分辨免疫荧光分析的标准曲线具有良好线性和斜率，表明标记物免疫活性良好，而且已用于血清ＣＥＡ分析。

微量尿白蛋白的时间分辨荧光免疫分析

Time-resolved fluoroimmunoassay (TrFIA) has been recognized as the most promisingone among the so-called nonisotopic immunoassays. It is well known for its inherentadvantages, high sensitivity, specifity and stability, rapid determination and widemeasurement range. We have developed a new TrFIA for determining microalbumin in urineby using monoclonal anti-HSA (human serum albumin) antibody and europium label. Thequality of the assay and its preliminary clinical application have been evaluated.

解离增强镧系元素荧光免疫分析灵敏度的改进

为提高解离增强镧系荧光免疫分析（ＤＥＬＦＩＡ）的灵敏度或信／噪比，进行了一些重要的方法学研究．观察到了对于不同的铕量，荧光响应和信／噪比都随着增强液体积而明显地变化．对于确定的铕量，存在一个最佳体积，且铕量越小，其最佳体积也越小．实验中选择最佳体积是重要的．研究了增强液制备技术，发展了微滴定板条有效的清洗和干燥方法，使本底荧光明显降低．

时间分辨免疫荧光法分析CEA的条件研究

报道了应用时间分辨免疫荧光氏分析血清中ＣＥＡ的条件研究。用我们研制的Ｎ￣１－（对－异硫氰基苄基）－二乙三胺－Ｎ￣１，Ｎ￣２，Ｎ￣３，Ｎ￣３－四乙酸铕为螯合剂，用Ｅｕ标记了抗ＣＥＡ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）Ｃ＿（１７）。在免疫分析程序中，对包被的ＭｃＡｂ的种类、浓度和封闭时间、第一和第二次反应的温育时间、标记Ｃ＿（１７）的浓度、分析缓冲液等主要实验条件，进行了实验最佳化选择。分析方法的灵敏度为１ｎｇ／ｍｌ。

时间分辨荧光免疫分析及其应用前景

介绍了时间分辨荧光免疫分析的基本原理、国内外研究现状和应用前景.着重叙述了本法的固有特点及有关理论,以加深对它的理解.

时间分辨荧光免疫分析技术研究

时间分辨荧光免疫分析(Time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)是一种全新的国际上公认的最有发展前途的非同位素免疫分析技术.镧系元素(Eu、Tb、Sm、Dy等)螯合物有突出的固有特点:激发最大波长到发射最大波长之间的Stokes位移很大,前者对后者无干扰.激发光谱段较宽,可增加激发能;发射光谱带窄,50%发射谱带宽度不足10nm,本底荧光很小;荧光衰变时间很长,有的达1ms.

铕标记人血清白蛋白的研究

铕标记人血清白蛋白的研究赵启仁，林汉，张福华，刘洁在时间分辨荧光免疫分析（ＴｒＦＩＡ）技术中，制备比活性高、免疫活性强的Ｅｕ标记物是关键之一．这需要用具有双功能基团的螯合剂将Ｅｕ３＋和抗原连接起来．已有的螯合剂有：１-（对-重氮苯基）-ＥＤＴＡ、氨基苯?..

影响效率示踪技术分析准确度因素的研究

本文提示效率示踪技术的测量误差随被测样品的化学或颜色淬灭程度的增加而增大,而且在强颜色淬灭情况下,呈现负误差。不同的闪烁液和体积对测量误差影响不大。效率示踪曲线的正确拟合很重要。

放射免疫分析和放射免疫显像在癌症诊断中的研究和应用

综述了放射免疫分析和放射免疫显像在癌症诊断中研究和应用的新进展.着重介绍了肿瘤标志物体外检测的意义及其特异性受到的主要局限;讨论了人抗鼠抗体的产生、靶/非靶放射性活度比值的提高、放射性核素的选择等方面需要解决的问题和研究发展.

甲状腺功能低下对大鼠小脑细胞凋亡的影响

目的 观察发育期大鼠小脑细胞程序化死亡（ Ｐ Ｃ Ｄ）的发生及甲状腺素（ Ｔ４）对大鼠小脑 Ｐ Ｃ Ｄ 的影响。方法 用丙基硫氧嘧啶（ Ｐ Ｔ Ｕ）复制甲状腺功能低下的大鼠动物模型，然后用原位末端标记方法检测 Ｐ Ｃ Ｄ 阳性细胞。结果 （１） Ｐ Ｔ Ｕ 组母鼠和各日龄仔鼠血清 Ｔ４ 水平明显低于对照组（ Ｐ＜ ０．０１ 或 Ｐ ＜ ０．０５）； Ｐ Ｔ Ｕ＋ Ｔ４ 组仔鼠用 Ｔ４ 替代后血清 Ｔ４ 水平恢复正常； Ｐ Ｔ Ｕ 组 Ｔ３ 代偿性升高；（２）正常小脑各层内均有散在的凋亡细胞，以内颗粒层最多；正常小脑生后 １０ 天和 ２０ 天有两个 Ｐ Ｃ Ｄ高峰；甲低使小脑各层结构内 Ｐ Ｃ Ｄ 数量均增加，而且 Ｐ Ｃ Ｄ 峰分别延迟到生后 １５ 天和 ３０ 天；补充 Ｔ４后 Ｐ Ｃ Ｄ 数量及峰值基本恢复正常。结论 Ｔ４ 不但促进发育期脑细胞的增殖、迁移和分化，对脑细胞的 Ｐ Ｃ Ｄ 也有明显影响。

肿瘤抑素T_7肽及其衍生物T_7-NGR载体构建及表达

目的为了提高作用靶向性,将导向肽NGR与肿瘤抑素T_7肽的C端连接,获得T_7肽及其衍生物T_7-NGR的载体。方法通过PCR和合成基因序列方法分别构建了肿瘤抑素T_7肽及T_7-NGR的克隆载体pMD-T_7和pMD-T_7N,经酶切和测序鉴定后,将2种载体分别双酶切,经低熔点琼脂糖凝胶电泳分离后,切下目的片段与酶切回收的质粒载体pET28a在低熔点琼脂糖中直接进行连接反应。阳性克隆经酶切和测序鉴定,转化感受态E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达。结果酶切和测序鉴定结果正确,分别成功构建表达载体pET-T_7和pET-T_7N,经IPTG诱导,完成了表达条件的优化。Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳结果显示,当IPTG浓度为1mmol/L时,25℃诱导8h,分别获得了T_7肽和T_7-NGR的表达产物。结论已经成功构建T_7肽和T_7-NGR的表达载体,获得了表达产物,为下一步的小肽活性实验奠定了基础。

肿瘤抑素活性肽段及其衍生物研究新进展

肿瘤抑素(tumstatin)是继内皮抑素(endostatin)和血管生成抑素(angiostatin)发现以来,来源于人血管基膜Ⅳ型胶原蛋白的极具潜力的肿瘤抑制因子。它强大的抗肿瘤新生血管生成、诱导肿瘤细胞和内皮细胞凋亡等生物活性,使其成为近年来的研究热点。本文详细介绍了肿瘤抑素活性肽段及其衍生物的研究进展。对Tum-5、T7肽和19肽以及这些活性肽段连接NGR导向肽或人源性IgG3铰链区等肽段后形成的衍生物作了较详细的介绍。肿瘤抑素的活性肽段及其衍生物,以高选择性、高活性、低毒性等优点正成为抗肿瘤药物研究的新希望。

肿瘤放射性受体显像剂奥曲肽的固相合成

采用苏氨酸转变为苏氨酸乙酯,再用LiAlH4还原该乙酯合成了苏氨醇,用自动多肽合成仪和Fmoc(9-芴甲基羰基)保护的氨基酸合成了7肽—树脂;再用三氟醋酸铊(Tl(Tfa)3)在7肽—树脂上形成7肽的二硫键;用苏氨醇氨解法裂解肽—树脂并在7肽链上接上苏氨醇形成八肽;然后用三氟乙酸脱去氨基酸侧链保护基团,用高效液相色谱法纯化八肽,得到了奥曲肽(OCT)。

心肌肌球蛋白及其重链的研制、特性鉴定和应用

目的分离、提纯人心肌肌球蛋白(HCM)及其重链(HCMHC),为心肌显像及其显像剂抗HCMHC抗体的研究打基础。方法参考猪心肌肌球蛋白制备方法,做了较大改进后,提取了HCM,用盐酸胍裂解HCM制备了HCMHC。用SDS-PAGE(梯度)电泳测定分子质量,用检测无机磷的方法测定HCM的ATP酶活力,用Ellman氏试剂测定游离巯基。将HCMHC免疫动物,用ELISA法测定了血清抗体效价。结果HCMHC的相对分子量为200×103,纯度大于80%;被免疫的BALB/C小鼠血清的抗体滴度最高达107,细胞融合率达80%。结论研制的HCMHC具有良好的免疫学活性,为下一步抗HCMHC单链可变区抗体(ScFv)及其放射性核素受体显像的研究打下了基础。

新型肿瘤血管生成抑制剂hexastatin的研究进展

肿瘤的生长和转移离不开新生血管的形成。Hexastatin是一种新型的肿瘤血管生成抑制剂,它来源于细胞外基质,是Ⅳ型胶原蛋白α6链的非胶原区NC1,相对分子质量为25000。Hexastatin的分布具有明显的组织特异性。Hexastatin可以通过一种RGD非依赖方式与整合素分子αvβ3结合,调节内皮细胞的黏附和迁移,并且剂量依赖性地抑制内皮细胞的增殖,对抑制血管生成起到显著的作用。Hexastatin能抑制80%～90%的经bFGF刺激的鸡胚绒毛膜血管的生成,抑制90%的人脐静脉内皮细胞的迁移,Hexastatin还能有力地(大约60%)抑制CS1黑素瘤细胞的生长。在已建立的肿瘤小鼠模型中,Hexasta-tin能抑制小鼠肺癌移植瘤生长。在癌细胞浸润过程中,α6(Ⅳ)链经常会在癌细胞巢穴周围的基底膜区域中缺失,使得Hex-astatin在癌组织中含量下调,从而成为诊断肿瘤浸润的重要指标。Hexastatin作为新型的肿瘤血管生成抑制剂在肿瘤的防治中具有重要的研究和应用前景。