草酸青霉16β-葡萄糖苷酶的异源表达

为探究真核菌株草酸青霉16的β-葡萄糖苷酶(16BGL)在不同宿主中的异源表达情况,该文通过基因克隆技术,将16BGL基因分别与pPIC9K、pET-28a、pGAPZαA载体进行连接,转化到毕氏酵母GS115或大肠杆菌Rosetta(DE3)上,筛选阳性克隆子,比较并分析其表达情况.结果表明:16BGL-9K未能成功电转到毕氏酵母GS115上;将16BGL-28a转化到大肠杆菌Rosetta上,使用最终物质的量浓度为50μmol·L^(-1)的IPTG和质量分数为1.7%的乳糖在22℃下诱导可实现高水平表达,但极易形成包涵体且无活性.为了消除包涵体的影响,在相同条件下将16BGL的N端加入DsbA分泌信号肽,经SDS-PAGE检验,16BGL有高水平可溶性表达,但无活性;将16BGL-ZαA电转到GS115上,筛选阳性克隆子并接种到含YPG培养基的摇瓶中,结果表明:上清液蛋白质量浓度达到23.723 mg·mL^(-1),且有活性.真核来源的16BGL基因适合于真核宿主表达.

11种杜鹃花RAPD分类学初步研究

应用改良的2×CTAB法提取到了高质量的11种杜鹃属植物总基因组DNA,可用于杜鹃属植物RAPD分析;用上海生工71个10碱基引物(从S10到S80)筛选到18个具有扩增多态性的引物;应用NEI-LI公式、Prob iosys1.0软件和UPGMA法(配对除权法)进行聚类分析,得到的相似性系数聚类图与传统形态分类一致,为基于DNA分子水平深入探讨杜鹃属植物种间的亲缘关系和系统位置奠定了良好的基础。

杜鹃花RAPD条件的优化

以井冈山杜鹃为材料建立了杜鹃花RAPD反应优化体系 ,用于杜鹃花遗传多样性分析 ,以改进的CTAB法提取杜鹃花属植物杜鹃花叶片总DNA ,分别测试了镁离子浓度、dNTP浓度、模板DNA含量、引物浓度、DNA聚合酶量对反应结果的影响。通过各因子的组合比较 ,建立了杜鹃花RAPD优化体系 :2 0 μLPCR反应体积 ,10×Taq酶配套缓冲液 (2 μL) ;1UTaq酶 ;模板DNA10ng ;13.32pmol引物 ;2 .12mmol·L- 1 MgCl2 ;dATP、dCTP、dGTP和dTTP各 0 .15mmol·L- 1 。

杜鹃属基因组DNA提取及RAPD的检定

以杜鹃花属常绿杜鹃亚属井冈山杜鹃树叶为材料,分别采用修改的CTAB法、碱裂解法、SDS法提取基因组DNA。实验表明,三种方法所提的DNA纯度及产率有差别,从综合结果看,以CTAB法最好,其所提到的DNA大小与λDNA(21kb)相似,经检验该法适合杜鹃花属植物总基因组DNA的提取,所得DNA不需纯化就可直接用于RAPD分析。

纤维素酶蛋白质工程的新进展

原始纤维素酶通常存在催化活性低下、末端产物抑制、热稳定性不高、持续催化能力弱等问题,因此,改善它的酶学性质是很有意义的工作.目前,采用体外进化技术是改进纤维素酶酶学性质的一种有效途径.从纤维酶的催化域、结合域和连接区等不同区域出发,综述了纤维素酶蛋白质工程的新进展.提出了系统组装3个已改造功能结构域的思想,这有助于提高纤维素酶催化活性、持续催化能力、耐高浓度产物、热稳定性等特性,将促进纤维素酶在能源、工业、农业、食品等领域的高效应用.

杜鹃属植物研究综述

综述了杜鹃属植物研究及分类状况。

不同因子对常绿杜鹃亚属种子萌发及成苗的影响

杜鹃属常绿杜鹃亚属多分布于中国西南高海拔地区,播种育苗为其有效的引种手段。试验表明:(1)环境温度、物种系统位置对萌发速度影响较大,平均气温20℃以下,温度越高萌发越快;材料较多的4个亚组以云锦杜鹃亚组萌发最快,银叶杜鹃亚组、露珠杜鹃亚组居中,长序杜鹃亚组最慢。(2)出苗、成苗率及幼苗生长与播种基质、物种产地、来源、系统位置等密切相关,出苗率以“腐殖土”基质为高,而成苗率及幼苗生长以“腐殖土+苔藓”基质为好;原产华东、华南、华中的种育苗效果总体优于西南种,日本、北美种好于欧洲种;经过驯化的种好于采自原产地的种,3个主要种源地育苗表现为:以本园的种子最佳、云南次之、德国最差;向东部演化的种育苗效果好于向西南演化的种。(3)庐山冷凉湿润的气候较适宜于本亚属杜鹃的播种育苗,苗期管理及猝倒病防治是其育苗成败关键。

内切壳聚糖酶在食品级壳寡糖酶法生产中的应用

研究1株曲霉JXSD-01发酵液中内切壳聚糖酶(eCSN)的纯化与功能,以寻求一种清洁的生产不含单糖的壳寡糖的方法。经分析,不含外切酶活性的eCSN蛋白酶比活力>50U/mg,分子质量为25kD,酶的最适温度为63℃,最适pH6.5。经N末端测序,内切壳聚糖酶的N端序列为YNLPNNLKQ。eCSN用于天然大分子壳聚糖的生物降解,可获得分子质量在1000～3500D的寡糖聚合物,其中无单糖污染,达到国际食品级壳寡糖质量标准。

螺旋埋弧焊钢管外焊缝视觉传感自动跟踪系统

针对螺旋埋弧焊钢管外焊,研制了一种基于视觉传感的焊缝自动跟踪系统。以视频摄像机为传感器,在焊接点前方100 mm处检测钢管外焊成形缝。对视频信号进行放大、整形、二值化处理,获得对应于成形缝的脉冲信号,以帧中心为基准,利用单片机进行偏离方向判断及偏差值计算,并将偏差信号以脉冲方式送入交流伺服电机驱动器,由交流伺服电机控制焊枪滑移台移动,确保焊丝实时对准焊缝。试验结果表明,焊接过程采用视频摄像机识别钢管外焊成形缝实现焊缝自动跟踪的方法是可行的。

浅谈兴安盟公路建设导致的生态环境问题及相关保护措施

随着我国经济的高速发展,道路交通成了一个地区经济发展的主要制约因素,直接关系到地方经济发展水平,在地区之间相互联通、促进经济发展和社会进步方面发挥着重要作用。为了加快发展实现经济振兴,兴安盟公路建设也步入了快车道,取得了很好的成绩。本文根据兴安盟公路发展现状及趋势,兴安盟现有生态环境现状,以及公路建设可能引发的环境问题,从公路设计、施工建设、运营管理等方面提出减轻或减少公路建设过程中产生的生态环境影响的建议。

里氏木霉表达异源中性内切纤维素酶蛋白以改善最佳酶活pH

为了提高里氏木霉中天然纤维素酶的最佳活性pH,本实验从特异腐质霉,灰腐质霉的变种,枯草芽孢杆菌LH中分别筛选并克隆了其含有的中性纤维素酶基因,将其置于里氏木霉cbh1启动子的启动下,在里氏木霉中进行异源表达。改造株在pH 6.0下酶活提升16%,pH 7.0下活性保留75%以上,而此时原始菌酶活残留20%。本实验所得的产中性纤维素酶里氏木霉基因改造株,由于其良好的中酸性活性表现,在食品,纺织,纸浆和造纸行业应也有良好的使用潜力。

淀粉酶高产菌的筛选、鉴定、诱变及生产优化

从多种土壤中筛选高产淀粉酶菌,进而进行诱变育种和产酶条件优化,以便提高淀粉酶产量和丰富产淀粉酶菌株资源.经初筛和复筛,用耦合碘比色法观察菌落直径和水解圈比值的大小,获得了淀粉酶活为140 U·mL^-1的SG3菌株.利用形态学观察、16S rDNA序列和BLAST在线软件进行分析,将SG3菌株鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis).经紫外诱变,获得酶活为234 U·mL^-1的正突变体UV-5,与SG3菌株相比,酶活提高了1.6倍.通过单因素和正交设计实验,获得40℃、pH值为6、48 h、2.5%玉米粉、0.5%酵母膏和转速160 r·min^-1的最优产酶条件,发酵上清液酶活为264 U·mL^-1,与SG3菌株相比,酶活提高了1.9倍.

不同食品在不同放置时间周期后亚硝酸盐含量的变化

本实验依据《食品安全国家标准食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》(GB 5009.33—2016)运用分光光度法研究不同类别的食品在相同条件下放置不同周期后亚硝酸盐含量的变化。通过实验数据分析发现,食品在初始放置的3 h内,亚硝酸盐含量较低变化较小;炒小白菜(素菜)和炒青笋肉丝(荤菜)随放置时间延长,食品中亚硝酸盐含量呈上升趋势;炒小白菜(素菜)在放置20 h后亚硝酸盐的含量已超出国家标准限值(20 mg·kg^(-1)),在放置120 h(5 d)时出现了峰值,为94 mg·kg^(-1)。炒青笋肉丝(荤菜)在放置48 h后亚硝酸盐的含量已超出国家标准限值(30 mg·kg^(-1))。凉拌黄瓜(素菜)中亚硝酸盐的含量变化趋势不明显,呈现略微下降趋势。

把作文的主动权还给学生

目前，作文教学存在的问题就是对作文的要求定得过死，学生很少有自由。一部分教师在教学时不是从方法上进行指导，而是交给学生固定的格式套内容，以一篇应万篇来应付考试，甚至有的单从字数上要求学生必须写够几百字。结果就出现学生在写作时不是从整体思路考虑如何把表达的内容表达清楚，而是东拼西凑，说一些空话、套话甚至编一些假话，缺乏真情实感，

会计职业道德教育问题浅析

随着市场经济的发展,社会对会计职业道德的要求就越来越高,会计职业道德教育的地位也就更加突出,现阶段,我国会计职业道德教育不甚完善,因此,如何改善会计职业教育成为当务之急。

从环境角度分析上市公司风险审计

现代社会经济高速发展和企业社会化生产规模的扩展，要求改变传统的对自然资源的过度依赖和消耗。这就要求公司在尽可能利用自然资源获取最大财富的同时，考虑经济效益和环境效益并举。而环境审计是由有关审计组织依据环境法规政策和标准，遵循审计准则，系统地、定期地对被审单位的环境活动、环境财务信息和环境管理系统的真实性、合规性和有效性进行监督、评价和鉴证，并将审计结果报告委托方。

小学作文教学四重奏

从事小学语文教学二十多年,教过的学生一批又一批,总觉得习作是小学语文教学的一大难点。大部分学生习作时,常常感到“无从下笔”、“无话可说”。特别是中年级,刚接触习作,语言表达能力和语言组织能力较弱,一提到习作,就总是抓耳挠腮,一筹莫展,觉得无话可说,无事可写。

同位素内标法快速筛查分析动物源性食品中地西泮残留

目的:建立同位素内标法-超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)快速筛查动物源性食品中地西泮残留量的方法。方法:在样品中加入地西泮-D5内标样品,先经0.1 mol·L^(-1)乙二胺四乙酸二钠溶液(EDTA)螯合后,再加5 mL乙腈涡旋离心,取乙腈层3 mL经Cleanert LipoNo净化混匀1 min后静置分层,取上清液乙腈层过滤上机,采用UPLC-MS/MS进行测定,内标法定量。结果:本方法在10 min内完成分离分析。地西泮在0.1~20.0μg·L^(-1)范围内均呈良好的线性关系。方法检出限0.1μg·kg^(-1),定量限0.3μg·kg^(-1),在5.0μg·kg^(-1)、10.0μg·kg^(-1)、50.0μg·kg^(-1)3个添加水平的平均回收率(n=6)为93.1%~98.6%,相对偏差(n=6)为1.9%~6.7%。结论:该方法前处理快速、简单、提取彻底、检测灵敏度高且选择性好,适用于大批量动物源性食品中地西泮残留量的准确快速测定。

QuEChERS净化法测定芝麻酱中黄曲霉毒素B_(1)的含量

目的:建立一种高效液相色谱法-碘柱后衍生-荧光检测器检测芝麻酱中黄曲霉毒素B_(1)含量的方法。方法:样品以甲醇∶水(7∶3)溶液提取,经QuEChERS净化后,利用高效液相色谱法-碘柱后衍生-荧光检测器检测。结果:在优化条件下,黄曲霉毒素B_(1)在0.1~50.0μg·mL^(-1),线性关系良好,r>0.999,回收率为83.2%~101.0%,RSD<8.7%。黄曲霉毒素B_(1)的检出限(LOD)为0.1μg·kg^(-1)。结论:该方法快速高效、灵敏、准确度好,且检测成本低,为芝麻酱中黄曲霉毒素B_(1)的测定提供了准确可靠的技术支撑。

教师管理应追求人本化

在现代学校管理中,最重要的管理理念就是"以人为本"。在学校管理的所有要素中,教师管理是第一要素。因此,学校管理应该"教师第一",在"以人为本"中树立"以教师为本"的管理思想。