山羊痘病毒036(gtpv-036)基因的克隆及序列分析

为研究山羊痘病毒036(gtpv-036)基因的生物学特征,试验利用PCR法扩增gtpv-036基因,经NdeΙ、XhoΙ双酶切后与PET 42b同源重组构建其原核表达载体,并用菌液PCR和测序鉴定,测序结果进行生物信息学分析,预测其蛋白生物学特性。结果表明:成功构建原核表达载体PET 42b-gtpv-036,测序结果显示036基因大小为285 bp,与山羊痘gtpvIsolateIndia等参考株系同源性为97.9%~100%,遗传进化树表明其与gtpv处于同一分支,亲源关系最近,测序比对发现其基因有2个碱基发生了突变,推测氨基酸序列:从第37位和95位异亮氨酸密码子是“ATA”分别突变成异亮氨酸氨酸“ATT”和天冬氨酸氨酸“CTA”;预测山羊痘病036蛋白亚细胞定位在细胞质;蛋白信号肽的剪切位点位于第23和24号氨基酸之间;蛋白磷酸化位点有10个;蛋白二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,其次β-折叠,三级结构以α-螺旋为主,推测山羊痘病gtpv-036蛋白功能可能是巯基氧化酶。这为制备山羊痘病毒疫苗研究和为研发新型药物提供理论基础。

基于无偏LS-SVM的混沌系统的混合同步控制

为实现超混沌系统与混沌系统的混合同步控制,通过对主系统采样,获得训练样本数集,设计了从系统混合同步轨线的形式;采用无偏最小二乘支持向量机(LS-SVM)的方法,引入核函数,获得优化目标,根据优化目标,求出混合同步轨线,设计了控制器。以超混沌Lorenz-Stenflo系统为主系统,Chen混沌系统为从系统为例,基于Matlab进行数值仿真,验证了方法的有效性。

大肠杆菌ESBLs基因克隆表达载体的构建与鉴定

大肠杆菌是一种最常见的革兰氏阴性菌,是一种常见的条件性致病菌。由于在治疗大肠杆菌时抗生素的大量使用,使大肠杆菌产生了很多耐药基因,其中超广谱β-内酰胺酶对许多β-内酰胺类抗生素具有耐药性,且以其中的CTX-M型为主,为了更好地研究产超广谱β-内酰胺酶,本次实验通过设计并扩增产超广谱β-内酰胺酶的CTX-M-3基因,并通过Nde I、Xho I两种限制性内切酶酶切并连接,预计构建pET-42b-ESBLs的原核表达载体,并送往上海生工公司进行测序,并对测序结果的遗传相似性及遗传进化进行分析,由于引物的特异性或模板的特殊性,测序结果显示扩增结果为DH5α染色体基因组并构建的载体是DH5α染色体基因的原核表达载体。

山羊痘病毒晚转录因子VLTF-3基因的原核表达及结构预测

研究旨在了解羊痘病毒晚转录因子VLTF-3结构特征和生物学特征。试验采用PCR方法扩增羊痘病毒Thx毒株晚转录因子VLTF-3基因,将其插入质粒PET-42b中建立原核表达载体,经菌液PCR和测序方法鉴定。阳性质粒转入大肠杆菌BL21中,用0.1 mmoL/L的IPTG诱导其表达蛋白,并通过SDS-PAGE和Western blot技术进行蛋白的表达的检测与鉴别。基因检测结果利用DNAMAN、DNAStar和Mega等软件进行生物信息学分析和建立遗传进化树,对其编码的氨基酸序列在线进行二级结构分析和高级结构的预测,并对其信号肽、跨膜特性、亲水性、磷酸化位点和抗原性等生物学特性进行分析。结果显示:试验成功扩增了VLTF-3的基因组,并建立了原核表达载体pET-42b-VLTF-3。测序结果表明,GTPV-VLTF-3基因全长681 bp;与参照株GTPV-Pellor毒株的同源性达99%,保守性较强,编码227aa,与理论相符。遗传进化树分析结果显示,该基因与皮肤疙瘩病遗传距离最近。SDS-PAGE检测结果显示,该蛋白质大量表现在上清中;Western blot结果显示,该蛋白与His标签进行了融合表达。VLTF-3蛋白不具有信号肽,为非分泌型蛋白,共有22个磷酸化位点,α螺旋、无规则卷曲、延伸链和β转角分别占34.80%、35.68%、22.91%、6.61%,三级结构以α螺旋为主。研究表明,试验成功克隆了晚转录因子VLTF-3,并能够可溶性表达其蛋白,生物分析预测其高级结构α螺旋为主。