鸡湿热泄泻病证模型的建立

中兽医病证模型是评价药效及研究中兽药作用机制的有效工具。为了建立鸡湿热泄泻病证模型,本研究以SPF雏鸡为试验动物,分别选取大肠杆菌CVCC1558标准株和09-29分离株,采用胸部肌内注射、口腔灌服、泄殖腔灌注3种不同方式,选择不同感染剂量,进行大肠杆菌人工感染试验,观察各组鸡临床症状,进行体温、病理剖检、十二指肠黏膜组织病理学、血细胞计数等多项检查。结果显示,采用不同的感染方法,试验鸡表现出不同的临床表现和病理变化。与空白对照组相比,口腔灌服09-29菌株试验组无任何症状出现,其他各组鸡群均表现出不同程度的病症,其中口腔灌服或泄殖腔灌注大肠杆菌CVCC1558菌株2个组试验鸡表现为排黄绿色稀粪,体温升高,剖检表现为典型卡他性或出血性肠炎变化,无心包炎、肝周炎、气囊炎病变,白细胞数增多,十二指肠黏膜肠绒毛上皮细胞脱落,无病鸡死亡,从病因、症状、病机等方面进行辨证分析,完全符合中兽医湿热泄泻的特征。采用肌内注射感染方式的3个组试验鸡虽然也出现排黄色稀粪、肠炎等湿热泄泻的表现,但发病鸡更多表现为精神极度沉郁以及心包炎、肝周炎、气囊炎等全身败血症变化,死亡率高,全身症状明显,已表现为热入营血,并不符合单纯的湿热泄泻特征。试验表明,采用SPF雏鸡每只口腔灌服大肠杆菌CVCC1558菌株3 mL,或泄殖腔灌注大肠杆菌CVCC1558菌株3 mL,均可成功构建出鸡的湿热泄泻病证模型。该方法建立的病证模型完全符合中兽医湿热泄泻证的病因、病位、病机和证候特点,临床症状明显,剖检特征典型,病程时间长,模型稳定,重复性好,适用于鸡湿热泄泻证的中兽医防治研究。

一种替米考星高效双层包衣微丸的制备

为了克服替米考星水溶性差、味苦、生物利用度低的缺陷,将固体分散技术和包合技术相结合,采用熔融喷雾法,进行了替米考星高效双层包衣微丸的制备。主药为替米考星,辅料为共聚维酮、氢化蓖麻油、β-环糊精、聚乙二醇、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚维酮、羟丙甲纤维素、聚丙烯酸树脂等。微丸由丸芯、速释药物衣层、掩味衣层组成。丸芯采用固体分散融熔法技术制备,替米考星以分子水平均匀分散在伴侣型复合辅料中,使生物利用度更高;速释药物衣层使释放速度更快;掩味衣层掩盖药物异味。该方法所制备的替米考星高效双层包衣微丸外观呈圆形,水溶性良好,无苦味,药代动力学试验表明口服给药体内吸收速度快、起效快、血药浓度高、疗效好。

基于系统生物学分析探究热应激诱导鸡肠道损伤的作用机制

【目的】利用系统生物学分析和鸡胚十二指肠上皮细胞模型探究热应激诱导肠道损伤的作用机制,筛选出家禽热应激诱导肠道损伤的作用靶标,为缓解热应激诱导的肠细胞氧化应激提供理论支撑。【方法】基于NCBI数据库筛选热应激诱导肠道损伤的作用靶标,通过GO功能注释和KEGG信号通路富集分析获得相关代谢通路;分离鸡胚十二指肠上皮细胞构建42℃热应激模型,通过检测细胞损伤病理、细胞活性、乳酸脱氢酶(LDH)活性、抗氧化酶活性、丙二醛(MDA)含量及关键基因(Nrf2和HSP70)表达情况等,进一步确认热应激对肠细胞的损伤作用。【结果】将热应激作用靶标与肠道损伤作用靶标取交集,共获得23个热应激诱导肠道损伤的作用靶标,分别是BCL2、CD4、CFTR、ERN1、FOXM1、FOXP3、HMOX1、HSF1、HSP90AA1、HSP70、HSPA4、HSPA8、JUN、MAPK1、MTOR、NFKB1、NLRP3、PLK1、RHOB、SIRT1、SUMO_(2)、TP53和YAP1。KEGG信号通路富集分析发现热应激诱导肠道损伤与NOD-样受体信号通路、沙门氏菌感染、凋亡、细胞衰老及内质网内蛋白加工等有关;GO功能注释分析发现热应激诱导肠损伤与细胞缺氧反应、细胞对镉离子反应、细胞对热反应及热休克蛋白结合等有关。鸡胚十二指肠上皮细胞体外热应激模型验证发现,热应激能导致鸡胚十二指肠上皮细胞空泡变性,严重时则导致细胞核浓缩深染的变性坏死;热应激还会引起鸡胚十二指肠上皮细胞的活性降低,而细胞上清液中的LDH含量升高;此外,随着热应激时间的延长,鸡胚十二指肠上皮细胞内的MDA含量不断上升,而超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的活性均呈下降趋势;热应激导致鸡胚十二指肠上皮细胞内Nrf2基因表达下调、HSP70基因表达上调。【结论】细胞内氧化—抗氧化失衡是热应激诱导肠道损伤的重要因素,而热休克蛋白是机体激活细胞抵御热应激损伤的重要保护机制。

清营颗粒对大鼠的急性毒性研究

为探究清营颗粒的急性毒性效应,选用SD大鼠为研究对象,采用限量法进行试验,经口单次给予雌雄各10只SD大鼠受试品清营颗粒,给药剂量为30 g/kg体重,然后分别于染毒前0 d、染毒后1、2、7、14 d测定大鼠体重,并连续14 d进行详细临床观察。观察期结束后,对大鼠进行大体剖检。雌雄大鼠在给予30 g/kg体重剂量的清营颗粒后,精神状态良好,采食、大小便及体重增长正常,直至试验结束时无异常临床症状出现。雄性大鼠在给药1、2、7、14d后,体重持续增长;仅有4只雌性大鼠在给药1 d或2 d后体重降低,其他雌性大鼠体重持续增长。剖检结果显示,无肉眼可见病变。综上所述,清营颗粒对雌性和雄性SD大鼠的经口急性毒性耐受剂量大于30 g/kg体重。根据化学物急性毒性(LD_(50))剂量分级标准依据,表明清营颗粒无毒。

清营颗粒对大鼠的亚慢性毒性评价

本试验旨在研究较长期摄入清营颗粒对大鼠的亚慢性毒性作用。选用80只SPF级SD大鼠,随机分为4组,每组20只(雌雄各半)。4组染毒剂量分别为0、5、10、20 g/kg体重的清营颗粒,连续给药30d。结果显示,10、20g/kg体重的清营颗粒对大鼠采食量、个别血液学指标及脏体比有一定影响,但未引起组织病理学变化。此外,5g/kg体重的清营颗粒对大鼠未表现明显的毒性作用。综上所述,清营颗粒对大鼠的无毒作用剂量(NOEL)为5 g/kg体重。

清营口服液质量检测方法的研究

为了建立清营口服液的质量检测方法,对制剂处方药味金银花、连翘、黄连、丹参、玄参、麦冬进行了薄层色谱（TLC）鉴别研究,并利用高效液相色谱（HPLC）法对制剂中绿原酸的含量进行了测定确定了HPLC的测定条件。结果表明,TLC鉴别方法专属性强、斑点清晰、阴性对照无干扰;在8～160μg/mL范围内绿原酸浓度与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为97.86%,RSD为1.2%。以上结果表明,本研究所建立的检测方法简便、准确、专属性强、重复性好,可对清营口服液的质量进行有效检测。

应用鸡胚接种试验研究中草药的抗新城疫病毒作用

为了筛选出高效的抗新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)中草药,采用鸡胚接种试验测定了常用清热解毒中草药的体外抗NDV作用。结果表明矮地茶、侧柏叶、贯众、诃子、虎杖、白蔹、夏枯草、黄连对新城疫病毒具有较好的杀灭作用。

白虎定喘口服液的质量检测

为了建立白虎定喘口服液的质量检测标准,采用薄层色谱法(TLC)对处方中金银花、黄芩、知母、板蓝根进行鉴别;采用高效液相色谱法(HPLC)对黄芩中有效成分黄芩苷进行含量测定。结果表明,薄层色谱斑点清晰,分离度好,特异性强;在0.103mg/mL^0.824mg/mL范围内黄芩苷浓度与峰面积呈良好的线性关系,阴性对照无干扰,加样回收率平均为97.98%,精密度试验RSD为0.61%。说明建立的检测方法简便、准确、专属性强、重复性好,可对白虎定喘口服液的质量进行有效检测。

复方中药体外抗新城疫病毒活性研究

为了筛选出高效的抗新城疫病毒中药,采用鸡胚接种试验,对8种经典清热解毒复方中药的抗新城疫病毒效果进行了测定。结果表明,荆防败毒散、银翘散、白头翁汤、双黄连口服液在体外对新城疫病毒具有较好的抑制作用。

银翘散抗禽流感病毒体外抑制试验

为测定银翘散对禽流感病毒(AIV)的抑制作用,将不同浓度的银翘散煎煮液分别与H9、H5亚型AIV在体外混合作用30 min后,接种SPF鸡胚,测定鸡胚的死亡率及尿囊液中AIV的血凝价,并采用RTPCR法对1 g/mL试验组鸡胚进行H9N2病毒检测。结果表明,药物浓度在0.2500 g/mL及以上时,H9N2试验组鸡胚存活率为100%,病毒血凝价为零,药物浓度为1 g/mL时,RT-PCR检测无目的条带出现;药物浓度在0.5000 g/mL及以上时,H5N1试验组鸡胚存活率为100%,病毒血凝价为零。因此,银翘散煎煮液在体外对禽流感病毒具有明显的抑制作用。

白虎定喘口服液药效研究

为验证新兽药白虎定喘口服液的药效作用,进行了鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)鸡胚增殖抑制试验、气管纤毛运动试验及SPF雏鸡人工感染IBV疗效试验。将试验药液与等量IBV液混合作用后,接种11日龄SPF鸡胚,37℃孵育168h,取存活鸡胚肾脏进行IBV的RT-PCR检测,结果表明,药物组168h鸡胚存活率为80%,阳性对照组为20%,两组间差异显著(P<0.05);试验药物组RT-PCR检测无目的条带出现,而阳性对照组有目的条带出现。40日龄SPF鸡连续用药3d后,气管内注入0.02mL墨汁,测量1min内墨汁移动的距离,结果表明药物组墨汁移动距离极显著大于生理盐水对照组(P<0.01)。17日龄SPF鸡用IBV-M41滴鼻,0.3mL/只,24h后开始灌服药液,1mL/kg,连用5d,结果表明,试验药物组与攻毒对照组在临床症状计分、痊愈率上均存在显著差异(P<0.05);试验组气管黏膜组织切片未见明显病变,而阳性对照组有明显病理变化。以上试验结果表明,白虎定喘口服液对IBV具有较好的体外抑制作用,可显著促进气管纤毛的运动,对鸡传染性支气管炎(IB)具有较好的临床防制效果。

银翘口服液质量标准研究

为了建立银翘口服液的质量标准,采用薄层色谱法（TLC）对处方中的金银花、连翘、牛蒡子、薄荷、荆芥进行了定性鉴别,并采用高效液相色谱法（HPLC）对牛蒡苷含量进行测定。结果显示,TLC色谱斑点清晰、专属性强、阴性对照无干扰;在0.0622~0.6220 mg/m L范围内,牛蒡苷浓度与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率为102.4%,RSD为2.2%,样品中牛蒡苷的平均含量为6.7246 mg/m L。本研究所建立的检测方法简便、准确、专属性强、重复性好,可对银翘口服液的质量进行有效控制。

中草药抗禽流感病毒鸡胚试验研究

为了筛选出高效的抗禽流感病毒(AIV)中草药,采用鸡胚试验,对常用清热解毒中草药的体外抗AIV效果进行了测定。结果表明,矮地茶、半边莲、白花败酱草、侧柏叶、大黄、虎杖、菊花、商陆、夏枯草、地锦草、贯众、诃子、仙鹤草对禽流感病毒在体外具有较好的灭活作用。

银连解毒口服液提取工艺研究

为了确定银连解毒口服液的最佳提取工艺,采用共水蒸馏法对处方中薄荷、荆芥挥发油的提取工艺进行了考察;以吸水率为指标,对药材浸泡时间进行了筛选;采用正交试验法,以干膏量、绿原酸含量、牛蒡苷含量为指标,对煎煮过程中加水量、煎煮时间、煎煮次数三个重要参数进行了筛选。结果:薄荷、荆芥加8倍量水,浸泡0. 5 h,共水蒸馏1 h,挥发油提取效率最佳;加水浸泡2 h后药材完全浸透,吸水率为220%;最佳煎煮工艺为加10倍量水,煎煮3次,每次煎煮1. 5 h。本研究为制定银连解毒口服液的生产工艺规程提供了依据。

山东地区鸡源性大肠杆菌的耐药性与质粒图谱的监测分析

对来源于山东各地自然发病鸡群的19株鸡源致病性大肠杆菌进行了耐药性和质粒图谱检测,并对菌株耐药性与质粒图谱间关系进行了分析研究。结果表明:19株鸡源致病性大肠杆菌均具有多重耐药性,耐药图谱复杂;除3株菌没有提取到质粒外,其余菌株均提取到质粒条带1～5条;对比分析发现,菌株耐药性与所携带质粒的数量和大小并无直接的相关性。

舒巴坦体外对阿莫西林和头孢噻肟抗大肠杆菌作用的影响

比较研究了阿莫西林、阿莫西林+舒巴坦钠、头孢噻肟钠、头孢噻肟钠+舒巴坦钠对24株鸡源大肠杆菌的体外抑菌效果,结果表明β-内酰胺酶抑制剂舒巴坦钠对β-内酰胺类抗生素具有显著的增效作用,两者联用对临床耐药菌具有良好的杀灭效果。

山东省家禽致病性大肠杆菌的分离鉴定及耐药性监测

对山东省各地大肠杆菌自然发病鸡群进行了细菌分离鉴定，对所分离的39株菌株采用纸片扩散法用26种抗菌药物进行了药敏试验测定。结果表明，分离菌存在广泛的耐药性，以多重耐药性为主，最少的耐药5种，最多的耐药24种，大部分对10～20种药物具有耐药性。26种药物中安普霉素、复达欣、氧氟沙星、阿米卡星、先锋必、环丙沙星敏感率最高，敏感菌株超过67％；痢菌净、庆大霉素、妥布霉素、利福平、氯霉素、氟哌酸、氟苯尼考、头孢噻肟敏感率次之，敏感菌株在40％～60％之间；对青霉素、氨苄西林、四环素、复方新诺明高度耐药，耐药率达95％以上。

中药虎杖体外抗新城疫病毒活性试验

为了筛选出有效的防治新城疫的中草药,采用鸡胚接种试验,对虎杖煎煮液的体外抗新城疫病毒活性进行了测定,结果表明:中药虎杖在体外对新城疫病毒具有较好的抑制作用。

9种中药方剂对鸡大肠杆菌病的防治效果

为了筛选出有效的防治大肠杆菌病的中草药,采用体外抑菌试验和雏鸡大肠杆菌人工感染试验,对黄连解毒汤、白虎汤、清瘟败毒饮、银翘散、清营汤、五味消毒饮、桑菊饮、白头翁汤、双黄连口服液9种经典清热解毒方剂的体外、体内抗大肠杆菌效果进行了测定。结果,以上9种方剂煎煮液(浓度为1g/m L)抑菌圈直径分别为17.85、0、18.44、17.30、18.64、0、17.74、0、18.12mm;9种药物试验组雏鸡平均存活率分别为29.6%、22.7%、17.8%、38.8%、36.0%、32.5%、34.2%、25.9%、31.1%,而攻毒对照组雏鸡平均存活率为14.6%。试验表明,黄连解毒汤、银翘散、清营汤、桑菊饮、双黄连口服液在体外、体内对大肠杆菌均具有一定的防治效果。