基因重组人粒细胞集落刺激因子在急性白血病化疗后的临床应用

目的：急性白血病，大剂量化疗后，白细胞平均降至１ ．０３３ ×１０９／Ｌ 时，应用重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ ＣＳＦ） ， 使白细胞恢复。方法： 每天２５０μｇ 皮下注射， 直至连续两次复查中性粒细胞绝对计数（ＡＮＣ） 超过１ ．５ ×１０９／Ｌ 后停药，平均用药时间５ ．９ 天。结果：与未采用ｒｈＧ－ ＣＳＦ 治疗的对照组１３ ．２ 天ＡＮＣ 超过１ ．５ ×１０９／Ｌ 相比，粒细胞缺乏的恢复时间明显缩短。ｒｈＧ－ ＣＳＦ 能够明显增加白血病患者化疗后白细胞的恢复，缩短白细胞减少症的恢复时间。结论：ｒｈＧ－ ＣＳＦ 能够保证白血病患者接受并完成强烈化疗，从而提高患者生存率。

血液恶性肿瘤细胞系体外培养模型的建立(英文)

本研究旨在建立一套血液恶性肿瘤的体外细胞培养模型。构建几种带有GFP(绿色荧光蛋白)表达并能够编码不同白血病/淋巴瘤相关融合蛋白的逆转录病毒载体(如:TEL-PDGFR,Rabaptin5-PDGFR,p210BCR-ABL,AML1-ETO,NPM-ALK);将病毒载体导入小鼠的原始骨髓细胞,转导的骨髓细胞随后培养在含有10%FCS的IMDM中。将细胞分为:无生长因子组和含有不同生长因子的各种组合组:①c-kit联合flt3(KL+FL)组,②IL-3+TPO+G-CSF+Hyper-IL-6(3/T/G/H6)组,③KL+FL+3/T/G/H6组。用流式细胞术检测肿瘤融合蛋白联合各种生长因子支持骨髓转导细胞的自我更新、扩增生长的能力。结果表明,转导的细胞能够持续对数级的生长扩增。KL联合FL能够支持转导编码TEL-PDGFR、Rabaptin5-PDGFR、AML1-ETO、NPM-ALK病毒载体的骨髓细胞自我更新、生长扩增;而转导p210 BCR-ABL病毒载体的骨髓细胞除需要KL和FL外,还需要IL-3的参与。扩增培养的细胞形态与所对应的肿瘤基因相关的血液肿瘤细胞相一致。结论:本研究建立了一套体外模型培养体系,提供了一种研究血液恶性肿瘤的方法,可用于筛选血液肿瘤的治疗性药物。

转JAK2基因脐血CD34^+细胞体外扩增与生物学特性研究

目的:探讨转基因JAK2介导的脐血干祖细胞长期扩增调控的可行性和转基因细胞的生物学特征。方法:构建逆转录病毒载体MGI-F2JAK2,内含有JAK2基因的功能催化区和2个与小分子靶向基因合成药物(AP20187)结合的位点蛋白(F36v,F2)。应用MiniMACS磁珠分选系统纯化分离脐血CD34+细胞,用含JAK2的逆转录病毒上清转染脐血CD34+细胞。转染后的CD34+细胞在IMDM培养体系中,将细胞分为AP20187组;FL组;TPO组;AP20187+FL+TPO(AFT)组。对扩增后的细胞定期检测基因转移后GFP动态变化、细胞免疫标记、造血祖细胞集落培养、染色体核型分析和裸鼠致瘤实验。结果:分选的CD34+细胞纯度>91%,基因转移率为49.32%±6.21%;只有AP20187+FL+TPO组可以使转基因的脐血CD34+细胞大量增殖,扩增至第8周时细胞数达109,CD34+细胞GFP的阳性率由基线水平逐渐上升并于第8周时达到90%以上;细胞表型为CD33+、CD61+、Gly-A+部分阳性;CD38+、HLA-DR+强阳性;CD2、CD7、CD19接近阴性。扩增的CD34+细胞可分别形成BFU-E、CFU-GM、CFU-Mix并以CFU-GM集落为主。扩增后CD34+细胞检测染色体核型正常,裸鼠实验无致瘤特性。结论:转染JAK2基因的人脐血CD34+细胞协同FL和TPO细胞因子可以体外长期扩增脐血干祖细胞,对今后研究细胞信号转导、造血调控以及开展干细胞和基因治疗都有潜在的应用价值。

靶基因调控的脐血干/祖细胞体外长期扩增与调控(英文)

背景:脐血干细胞是基因治疗最理想的靶细胞之一,但基因转移率低下是目前面临的主要障碍。酪氨酸激酶 JAK2 在造血干/祖细胞自我更新中扮演着重要的作用,为了克服脐血基因转移率低下的障碍,根据基因调控表达技术原理,是否可开发一个可以靶向扩增 JAK2基因修饰的脐血 CD34+细胞体系。目的:探讨转基因 JAK2 介导的脐血干祖细胞长期扩增调控的可行性和安全性。单位:卫生部北京医院血液科。材料:实验于 2003-06/2006-04 在卫生部北京医院血液科实验室完成。脐血取自健康、足月、自然分娩后立即断脐的脐血。脐血由北京医院妇产科提供,产妇及家属均知情同意,实验经医学伦理委员会批准。MiniMACS 磁性分离仪、免疫磁珠吸附 CD34 单抗购自德国 Miltenyi Biotec 公司, 流式细胞仪购自美国 FACScalibur,人重组干细胞因子、Flt3 配体、人白介素-6、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、粒细胞集落刺激因子、血小板生成素为 PeproTec 产品,SPF级裸鼠购自北京医科大学动物中心。方法:构建逆转录病毒载体 MGI-F2JAK2,内含有 JAK2 基因的功能催化区和两个与小分子靶向基因合成药物(AP20187)结合的位点蛋白(2xF36v,F2)组成。AP20187 可与 F36v 特异结合引起 JAK2 二聚化而激活细胞内信号传导。该载体同时含有绿色荧光蛋白报告基因,用作检测细胞增殖的标记。应用 MiniMACS 免疫磁珠分选系统纯化分离脐血 CD34+ 细胞,用含 JAK2 的逆转录病毒上清转染脐血CD34+细胞。转导后的 CD34+ 细胞在集落刺激因子、Flt3 配体、血小板生成素、白介素-6 细胞因子的联合培养条件下,以不加或加入AP20187 分别作为对照组和实验组。主要观察指标:①应用流式细胞仪测定两组 CD34+细胞中所含绿色荧光蛋白细胞的百分率,确定基因转移率。②扩增后的脐血祖细胞集落培养结果。③取培养 10 周的脐血 CD34+细胞于裸鼠的胁部皮下注射,30 d 后观察成瘤情况。结果:①实验组与对照组均可获得 CD34+ 细胞大量扩增。随着培养时间的延长,实验组扩增的 CD34+细胞 GFP 阳性率由基线水平逐渐上升于第 11 周时达到 95%以上,而对照组绿色荧光蛋白报告基因阳性率逐渐下降到基线水平以下并逐渐消失。②实验组转基因 CD34+ 细胞于 12 周后仍可产生造血祖细胞集落红系祖细胞、粒单系祖细胞、脐血多向造血祖细胞,所形成的造血祖细胞集落以粒单系祖细胞为主。③裸鼠实验无致瘤特性。结论:转染 JAK2 基因的人脐血 CD34+ 细胞协同其他细胞因子可以体外长期扩增脐血干祖细胞,对今后开展干细胞治疗某些遗传性血液病有潜在的应用价值。

榄香烯乳加联合化疗治疗难治性急性非淋巴细胞白血病

目的：评价榄香烯乳加联合化疗治疗难治性急性非淋巴细胞白血病。方法：将３０ 例白血病患者随机分为治疗组：用榄香烯乳３００ｍｇ 入５ ％ Ｇ．Ｓ５００ｍｌ 中静脉滴注，持续用药１４ 天，同时用联合化疗：Ａｒａ－ Ｃ０．５ｇ／ｍ２．ｄ ，第１～７ 天；ＶＰ－ １６ １００ｍｇ／ｍ２．ｄ ，第１ ～３ 天；对照组单用联合化疗，方案用量用法同治疗组。结果：治疗组总有效率７７．８ ％ ，对照组总有效率５０ ％ ，差异有显著性（ Ｐ＜ ０．０５）。结论：榄香烯乳对难治性急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）有肯定疗效，比单用联合化疗效果好，且不良反应少，无血象和骨髓抑制。

基因调控表达技术的建立及在多潜能造血干/祖细胞扩增调控中的应用

干细胞是一种原始多潜能的细胞,具有自我更新和定向分化的基本特征.为了克服干细胞数量少的不足,众多学者已经在积极探索干细胞的扩增方法.目前国内外采用不同细胞因子的组合方案来进行干细胞的扩增,但其扩增的结果存在很多问题,主要体现在:扩增的时间短,倍数低,扩增体系难于调控,扩增后的干细胞自我更新能力,可塑性及造血重建的功能均较扩增前下降.

二阶导数差示脉冲极谱法用于血浆中氯氮及其主要代谢物的定量研究

目的:测定血浆中氯氮艹卓及其主要代谢物的含量。方法:血浆用乙醚提取,经薄层层析分离,分别洗脱,残渣溶于50mmol·L-1H2SO4水溶液中,用二阶导数差示脉冲极谱法测定。结果:氯氮艹卓及其代谢物(Ⅰ、Ⅱ)的二阶导数差示脉冲极谱峰电位分别为:-0.600V、-0.590V、-0.645V,检测限分别为:0.27,0.11,0.22ng·ml-1。结论:该法简便、快速、灵敏,结果准确。

成人急性髓细胞白血病免疫分型特点及临床预后分析

目的探讨成人急性白血病病人免疫分型特点及临床预后。方法采用CD45/SSC双参数散点图设门方法进行多色流式细胞术免疫表型分析。并观察了给予标准化疗后的治疗效果。结果146例急性髓细胞白血病(AML)主要表达CD33(82.9%)、CD13(81.5%)和CD117(78.0%)。30.8%的AML患者伴有淋系抗体表达,最常见为CD7(19.2%),其次是CD19(6.8%),共发现急性混合细胞白血病4例。伴有淋系抗原表达的AML(Ly+AML)化疗后CR率显著低于未伴有淋系抗原表达的AML(Ly-AML)患者(P<0.05)。CD7+患者CR率低于CD7-患者,有统计学差异。结论流式细胞术对白血病的诊断及治疗预后分析有重要意义,伴淋系抗原表达的AML、CD7+的AML化疗后CR率低。

老年急性髓细胞白血病62例临床特征分析

目的:分析老年急性髓细胞白血病(AML)的临床及生物学特点,寻求有效治疗方法。方法:回顾性分析62例60岁以上AML患者的临床资料,包括临床特征、染色体、免疫分型及化疗效果。结果:完全缓解(CR)率27.7%,总有效率44.7%。诱导期死亡率32.7%。伴MDS病史者占27.4%,其CR率低于无MDS病史者(6.7%vs37.5%,P<0.05)。伴淋系抗原表达者占28.2%,其CR率低于仅有髓系抗原表达者(0vs37.5%,P<0.05)。CD34+者占71.8%,其CR率低于CD34-者(16.0%vs62.5%,P<0.05)。结论:老年AML总体缓解率低,死亡率高,在临床上有其特殊性,治疗上更强调个体化。

基因重组人红细胞生成素治疗29例非肾性贫血

目的：探讨基因重组人红细胞生成素（ｒｈＥｐｏ）对非肾性贫血的治疗作用。方法：用ｒｈＥｐｏ对２９例非肾性贫血进行治疗，其中包括再生障碍性贫血（ＡＡ）６例，骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）１２例，多发性骨髓瘤（ＭＭ）５例，非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）６例，疗程３个月，观察其疗效及毒副作用。结果：１８例治疗后Ｈｂ有不同程度上升，总有效率为６２．０％。各组有效率分别为：ＡＡ组６６．６％（４／６）；ＭＤＳ组５８．３％（７／１２），其中难治性贫血（ＲＡ）为８５．７％（６／７），转变中的原始细胞增多型（ＲＡＥＢｔ）２例均无效；ＭＭ组８０．０％（４／５）；ＮＨＬ组５０．０％（３／６）。结论：ｒｈＥｐｏ可使非肾性贫血获得不同程度改善，ＭＤＳ组中ＲＡ及ＭＭ患者疗效较显著。ｒｈＥｐｏ不良反应小，使用安全。

体外液体培养联合低分子天然抑瘤物净化自体骨髓移植治疗晚期恶性淋巴瘤3例

用体外液体培养联合低分子天然抑瘤物净化骨髓移植物做自体骨髓移植治疗３例晚期恶性淋巴瘤伴骨髓侵犯，移植后均造血重建，白细胞恢复至〉１．０×１０＾９／Ｌ，１５，２１，１６天和血小板恢复至〉２０×１０＾９／Ｌ，时间为１８，３３，２９天。２例持续缓解，分别为４８及２９个月。１例ＡＢＭＴ后达到部分缓解并于１７个月后死于复发。

二阶导数高速脉冲极谱法用于氯霉素的定量研究

本文运用二阶导数高速脉冲极谱法(SHPP)对氯霉素及其制剂进行了定量研究。氯霉素化学结构中含有电负性较大的氯,在乙醇—水(1:1)的溶液中,于-0.06V(Vs Ag/AgCl)处出现一良好的SHPP峰,在1.0～6.0×10^(-4)mol/L范围内,浓度与其SHPP峰幅值呈线性关系。检测限为6.0×10^(-9)mol/L。本法操作简便、快速、灵敏,结果准确。

昭通市兽药经营与监管存在问题浅析

位于云南省东北端,地处乌蒙山区腹心地带、云贵川三省结合部的昭通市,是云南省辖的16个州(市)之一,国土面积2.3万平方千米,全市辖1个区、1个市和9个县,居住着汉、回、苗、彝等24个民族,2021年总人口509.3万人。昭通市是全省畜禽养殖重点地区之一,2021年家畜存栏404.64万头(只)、出栏362.01万头(只).

昭通市畜产品安全生产存在的问题及对策

目前,畜产品安全已成为制约畜牧业发展和畜产品贸易的重要因素,备受广大消费者的关注。畜产品质量安全问题不仅仅影响居民的消费需求,还影响农业产业结构的调整、农民增收以及农村经济的发展。十九大报告提出:实施食品安全战略,让人民吃得放心。为从根本上保证畜产品质量安全,适应经济社会发展的需要,云南省昭通市严格落实畜产品安全生产的各项技术要求和生产规范.

JAK2转基因骨髓造血干/祖细胞体外长期扩增调控及定向分化的研究

目的 探讨酪氨酸激酶JAK2转基因骨髓造血干 祖细胞体外长期扩增调控和定向分化潜能的可行性。方法 克隆了一个MSCV based逆转录病毒载体称作MGI F2Jak2 ,它编码一个绿色荧光蛋白 (GFP)和两个改进的FK5 0 6结合蛋白 (F36v)与JAK2组成的融合蛋白 ,F36v是二聚化化学诱导物AP2 0 187的结合位点。应用该载体转染GpE +86包装细胞株 ,将C5 7BL 6小鼠的骨髓细胞与照射过15 0 0cGy的GpE +86产毒细胞株共同培养实现基因转导。转导后的细胞在X VIVO 15培养体系中扩增 ,分为①空白对照组 ;②AP2 0 187组 ;③干细胞因子 (SCF)组 ;④AP2 0 187+SCF组。扩增的细胞用直接法标记藻红蛋白荧光素 (PE)结合的抗Sca1、c kit、CD34 、Gr1、CD1 1b、TER 119、CD4 1 、B2 2 0和CD3单克隆抗体以流式细胞仪检测 ,并进行定向分化、祖细胞集落培养和脾细胞集落形成单位 (CFU S)的研究。结果 只有AP2 0 187+SCF组可以持续地使转基因的骨髓造血干 祖细胞大量增殖 ,扩增 80d后细胞可达10 1 4倍 ,细胞倍增时间约 30h ,扩增细胞的表型为CD34 、c kit和Sca1等干细胞表面标志强阳性 ,其它细胞表面标志如Gr1、CD1 1b、TER119、CD4 1 、B2 2 0、CD3接近阴性。所扩增的细胞在不同的细胞因子组合下 ,可定向分化为粒细胞、巨噬细胞、红细胞、

转导JAK2基因可促进原始多能造血细胞在体外的长期扩增

目的 探讨激活JAK2信号通路是否能够长期扩增调控造血干祖细胞并评价扩增细胞的定向分化潜能。方法 构建克隆 1个含有JAK2基因和二聚化化学诱导物 (AP2 0 187)结合位点所组成的逆转录病毒载体。AP2 0 187可以使JAK2二聚化激活细胞内信号传导。将该载体转入小鼠原始骨髓造血细胞 ,在无血清培养基中 ,将JAK2转基因的细胞分为 :①空白对照组 ,②AP2 0 187组 ,③细胞因子联合组 [干细胞因子 (SCF) +Flt3 配体 (Flt3 L) ],④AP2 0 187+SCF +Flt3 L组。对扩增的细胞进行免疫表型、定向分化、造血祖细胞集落分析及脾集落形成单位的研究。结果 只有AP2 0 187+SCF+Flt3 L组能够使JAK2转基因的骨髓细胞持续大量对数级增殖。约 8d时 ,细胞数量可以达到扩增前的 10 19倍。扩增的细胞经流式细胞仪检测为 :Sca1阳性细胞为 5 2 %～ 98% ,C kit阳性率为 5 6 %～6 9 % ,CD34阳性率 4 0 %～ 85 % ;而其他表型TER119阳性 0～ 2 0 % ,CD4 1阳性 5 %～ 36 % ,B2 2 0阳性12 %～ 4 6 % ,Gr1阳性 6 %～ 17% ,CD11b阳性 35 %～ 4 6 % ,CD3为阴性。扩增细胞在SCF/粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF) /白介素 (IL) 3条件下 ,可分化形成明显的粒细胞和巨噬细胞 ;在SCF/红细胞生成素 (EPO)条件下 ,可分化为红细胞 ;