恶性淋巴瘤细胞对TRAIL诱导凋亡的抵抗及其分子机制

目的：探讨在体外恶性淋巴瘤细胞对TRAIL（TNF—related apoptosis—inducing ligand）诱导凋亡的抵抗作用及其分子机制。方法：TRAIL处理恶性淋巴瘤U937细胞后，在不同的时间采用MTT法检测药物对细胞的毒性作用；流式细胞术检测细胞周期；Western—blot法检测Bax蛋白质水平变化；实时荧光定量RT—PCR法检测BaxmRNA的表达情况。结果：TRAIL的浓度在500μg／L时可抑制U937的细胞生存，但其抑制率低于正常对照细胞Hmy2．ciR；TRAIL阻滞U937细胞周期于G0／G，期；但这种阻滞效应较Hmy2．ciR细胞明显减弱。Western—blot法检测TRAIL处理的U937细胞Bax蛋白表达水平下降；实时荧光定量RT—PCR法检测BaxmRNA的表达水平却未见差异性改变。结论：TRAIL在诱导恶性淋巴瘤细胞凋亡过程中出现抵抗，这种作用可能与促凋亡蛋白Bax表达水平下降有关。Bax蛋白表达水平的下降可能是由于翻译后修饰导致Bax蛋白降解。

瘦素上调乳腺癌细胞端粒酶的活性及其分子机制研究

目的:观察瘦素(leptin)对乳腺癌细胞端粒酶的活性影响,并探讨其可能的分子机制。方法:采用ELISA检测瘦素对人乳腺癌细胞MCF-7端粒酶活性的影响。应用实时荧光定量PCR和Western blot法测定瘦素对MCF-7细胞人端粒酶逆转录酶(hTERT)及STAT3 mRNA和蛋白表达水平的影响。结果:瘦素可增加MCF-7端粒酶的活性,且呈剂量依赖性,当浓度是10 nmol/L时,活性增加2.8倍;而采用瘦素受体单克隆抗体ZMC-2时则可明显抑制端粒酶的活性;端粒酶的活性与hTERT紧密相关,瘦素不仅增强了端粒酶的活性,同时也增加了hTERTmRNA的表达水平,且呈剂量依赖性,经瘦素10 nmol/L处理后,hTERT蛋白表达水平增加2.9倍;在瘦素处理MCF-7细胞后,hTERT的表达水平与磷酸化STAT3的水平呈现相关性上升,提示STAT3途径可能参与了瘦素诱导hTERT的表达。结论:在乳腺癌MCF-7细胞中,瘦素可能通过STAT3途径促进hTERT的表达,并最终上调端粒酶的活性。

低氧诱导因子-2α在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的:分析低氧诱导因子-2α(HIF-2α)在肝细胞癌组织中的表达,探讨其与肝细胞癌临床病理特征的相关性及临床意义。方法:收集天津医科大学附属肿瘤医院104例经手术治疗并有完整随访资料的肝细胞癌和10例正常肝组织标本,用免疫组化方法观察HIF-2α和CD34在癌组织中的表达情况,分析HIF-2α表达水平与肝细胞癌微血管密度、临床病理特征及患者预后的关系。结果:正常肝组织无HlF-2α表达,104例患者中HIF-2α蛋白表达(-)32例,(+)32例,(++)40例;HIF-2α表达与肝细胞癌的分化程度、TNM分期及伴发肝硬化呈正相关关系(P<0.05);HIF-2α蛋白较高表达组MVD显著高于HIF-2α蛋白较低表达组(P<0.05);HIF-2α高表达患者组的3年生存率低于低表达患者组(12.8%vs 60.8%,P<0.001)。经Cox多因素回归分析,HIF-2α是肝细胞癌的独立预后因素(P<0.001)。结论:HIF-2α的阳性表达与肝细胞癌血管新生、病理分级、TNM分期及总生存率密切相关;提示HIF-2α可作为评估肝细胞癌进展及预后的指标之一。

50例胰腺实性假乳头状瘤的临床诊治分析

目的:探讨胰腺实性假乳头状瘤的临床特点、影像学表现、病理特征、治疗方法与预后情况,为进一步提高其诊疗水平提供依据。方法:收集2011年1月至2016年10月天津医科大学肿瘤医院收治的50例胰腺实性假乳头状瘤患者的临床资料,回顾性分析其临床特征及诊治情况并行随访,对患者的病例资料、病理特征、诊疗方法和预后等进行总结。结果:50例患者年龄11~58岁,平均年龄(33±12)岁;临床表现多为查体发现腹部占位就诊。肿瘤多位于胰头部和体尾部。患者均行手术切除治疗,多为胰十二指肠切除术或脾胰体尾切除术。术后组织病理学检查已明确诊断为胰腺实性假乳头状瘤。住院时间为(13.90±5.16)d。对50例患者均进行随访,随访时间为3~70个月,49例患者未见复发或转移,所有患者均存活至今。结论:胰腺实性假乳头状瘤是一种较为罕见的低恶性胰腺肿瘤,多见于青年女性,其临床表现和实验室检查等无明显特异性,肿瘤标志物多阴性。切除肿瘤后能获得良好的预后。

低氧诱导因子1α通过CX3CR1在胰腺癌嗜神经侵袭中作用

目的:探索低氧诱导因子1α(HIF-1α)和细胞趋化因子受体CX3CR1的相互调节在胰腺癌嗜神经侵袭方面的作用。方法:通过免疫组织化学实验,探究在胰腺癌的组织样本中HIF-1α与CX3CR1的相互作用对嗜神经侵袭的作用;用siRNA双链和过表达质粒沉默/过表达HIF-1α和CX3CR1基因,然后通过Western blot免疫印迹实验检测HIF-1α、CX3CR1表达的变化。结果:在胰腺癌组织中,HIF-1α蛋白表达水平与肿瘤直径(F=7.81,P<0.05),淋巴结转移(r=0.24,P<0.01),肿瘤的病理淋巴结转移阶段(r=0.39,P<0.05)相关;在人类胰腺癌细胞系、胰腺癌患者手术标本中,HIF-1α和CX3CR1的表达均具有相关性,并且与胰腺癌的嗜神经侵袭相关联。结论:HIF-1α和CX3CR1的相互作用可以调节胰腺癌的嗜神经侵袭。

低氧诱导因子HIF-1α调控CX3CR1在胰腺癌细胞中的表达

目的:以胰腺癌细胞株Patu8988为研究对象,通过过表达和干扰低氧诱导因子(HIF-1α),观察CX3CR1表达水平的变化,并探讨CX3CR1在胰腺癌中的调控机制。方法:分别构建pcDNA3.1-HIF-1α过表达质粒和HIF-1α-siRNA,转染胰腺癌细胞株Patu8988,经Western blot、半定量PCR检测CX3CR1的表达情况。采用染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)、荧光素酶技术探查HIF-1α与CX3CR1启动子区的结合情况。结果:Patu8988转染pcDNA3.1-HIF-1α后CX3CR1的表达增加,敲除HIF-1α后CX3CR1的表达减少。HIF-1α与CX3CR1启动子区的低氧反应元件直接结合,并上调CX3CR1启动子的活性(P<0.01)。结论:HIF-1α调控CX3CR1在胰腺癌细胞中的表达。

乏氧和低糖条件下低表达ESE3促进胰腺癌细胞的侵袭

目的观察乏氧和低糖条件下胰腺癌细胞中上皮特异性ETS转录因子3(ESE3)表达的变化及其对胰腺癌细胞侵袭能力的影响。方法收集在天津医科大学肿瘤医院2005年1月—2014年10月期间行根治性手术治疗的99例胰腺癌患者的胰腺癌组织和16例邻近正常胰腺组织标本。采用免疫组化法分析癌组织和邻近正常胰腺组织中ESE3的表达水平,探究其表达水平与胰腺癌患者生存预后间的关系;进一步在TCGA数据库中分析ESE3的mRNA表达水平与147例胰腺癌患者的临床病理学特征间的关系;构建胰腺癌细胞PANC-1过表达ESE3稳定转染细胞系并验证;Transwell法探究过表达ESE3的胰腺癌细胞侵袭能力的变化;利用蛋白质免疫印迹法检测乏氧和低糖条件下胰腺癌细胞中乏氧诱导因子1α(HIF-1α)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和ESE3蛋白表达水平的变化。结果胰腺癌组织中ESE3的表达量明显低于正常胰腺组织,ESE3的低表达与患者总生存期(OS)和无复发生存期(DFS)缩短密切相关(均P<0.05)。TCGA数据库分析表明ESE3表达高低与肿瘤转移相关(P<0.05);在乏氧和低糖条件下胰腺癌细胞侵袭能力增强,ESE3的表达降低,HIF-1α与GRP78的表达增加(P<0.05)。结论在乏氧和低糖条件下,胰腺癌细胞中ESE3的表达降低,促进胰腺癌细胞的侵袭。

胰腺导管腺癌中酪氨酸蛋白激酶-7的表达及临床意义

目的:探讨酪氨酸蛋白激酶-7(protein tyrosine kinase-7,PTK7)在胰腺导管腺癌组织中的表达及其临床意义。方法:回顾性分析天津医科大学肿瘤医院2011年5月至2016年1月接受胰腺癌根治手术治疗的85例胰腺癌患者的临床与随访资料。采用免疫组织化学法检测85例胰腺癌组织和对应的癌旁组织中PTK7的表达,分析其与临床病理学特征及预后的关系。结果:PTK7的阳性表达主要在细胞质内,呈棕黄色颗粒。PTK7在胰腺癌和癌旁组织中的阳性表达率分别为70.6%(60/85)和52.9%(45/85),前者表达率显著高于后者,差异具有统计学意义(P<0.05)。PTK7的异常表达与肿瘤分期、淋巴结转移和脉管内瘤栓相关(P<0.05)。生存分析提示在胰腺导管腺癌中PTK7高表达的患者生存时间和肿瘤无进展时间明显短于低表达的患者(均P<0.05)。shRNA成功干扰PTK7建立细胞稳系后,MTT和克隆形成结果显示,shRNA实验组较对照组细胞存活数显著减少(P<0.05),克隆形成数显著减少(P<0.05),增殖相关蛋白Ki67和PCNA的表达水平显著降低(均P<0.05)。结论:胰腺导管腺癌组织中PTK7表达水平上调,且与胰腺癌肿瘤分期、淋巴结转移、脉管内瘤栓有关,其表达可能提示预后不良。在胰腺癌细胞系中,PTK7能通过调节增殖相关因子Ki-67和PCNA的水平而促进胰腺癌细胞的增殖。

瘦素诱导乳腺癌细胞的凋亡抵抗及其分子机制

目的观察瘦素对乳腺癌细胞凋亡的影响，并探讨其分子机制。方法采用TransAM酶联免疫吸附法（ELISA）检测瘦素对乳腺癌细胞T47D凋亡的影响，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞毒性，并测定T47D细胞caspase-9的活性。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot法测定瘦素对T47D细胞survivin mRNA和蛋白表达水平的影响。采用RNA干扰技术沉默信号转导和转录激活因子3（STAT3）基因，并采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot法测定瘦素对沉默STAT3基因后T47D细胞survivin mRNA和蛋白表达水平的影响。结果瘦素可以促进人乳腺癌细胞T47D的增殖，增殖抑制率为63．6％；减少多西他赛诱导的细胞凋亡，达31．9％。不同浓度瘦素均可促进T47D细胞survivin mRNA的表达，其中以10nmol／L时作用最明显。10nmol／L瘦素作用60min后，T47D细胞中survivin mRNA的表达量是瘦素作用前的4．6倍；作用2h后，T47D细胞中survivin蛋白的表达增强。将STA33小干扰RNA（siRNA）转入T47D细胞30min后，survivin mRNA表达的变化倍率为0．55±0．15。经瘦素处理后，STAT3 siRNA质粒转染组和空质粒对照组survivin mRNA表达的变化倍率分别为0．56±0．18和1．61±0．22。将STArl3siRNA转入Tg7D细胞后，survivin蛋白表达下降。经瘦素处理后，转染空质粒的细胞survivin蛋白的表达增加，而转入STAT3 siRNA的细胞survivin蛋白无明显变化。结论在乳腺癌T47D细胞中，瘦素／STAT3信号通路是上调survivin表达的有效途径。

胃间质瘤的临床病理特征和预后相关因素分析

目的探讨胃间质瘤的临床病理特征及预后相关因素。方法回顾性分析1996年3月至2008年3月间天津医科大学附属肿瘤医院121例行手术切除治疗的胃间质瘤患者的临床资料，分别对性别、年龄、肿瘤大小及组织学类型等因素进行预后分析。结果本组121例患者中位生仔期为73．2个月，术后1年、3年及5年总生存率分别为82％、59％和50％，术后1年、3年、5年无瘤生存率分别为65％、46％干u33％。单因素分析显示，性别（P=0．000）、肿瘤大小（P=0．000）及累及脏器（P=0．000）是影响预后的因素；多因素分析则显示，性别（P=0．000）、肿瘤大小（P=0．000）及累及脏器足影响预后的独讧因素。结论胃间质瘤中的男性、肿瘤直径〉10cm及累及周围脏器的患者颅后较盖。

蛋白酶体抑制剂在肿瘤坏死因子相对凋亡诱导配体诱导恶性淋巴瘤细胞凋亡抵抗中的作用及其分子机制

目的探讨体外蛋白酶体抑制剂在肿瘤坏死因子相对凋亡诱导配体（TRAIL）诱导恶性淋巴瘤细胞凋亡抵抗中的作用及其分子机制。方法TRAIL与蛋白酶体抑制剂硼替唑咪（PS-341）处理恶性淋巴瘤Raji细胞后，采用MTF法检测药物不同作用时问对细胞的增生影响；流式细胞术检测细胞周期；Western blotting法检测Bax蛋白质水平变化；实时荧光定量RT—PCR法检测BaxmRNA的表达情况。结果TRAIL在质量浓度500μg／L时可减少Raji细胞的增生，但低于正常淋巴细胞Hmy2．ciR；TRAIL阻滞细胞周期于G0／G1期，Western blotting法检测Raji细胞Bax蛋白表达水平下降，实时荧光定量RT—PCR法检测BaxmRNA的表达水平却未见差异性改变，联合使用浓度为10nmol／LPS-341后可明显提高TRAIL的诱导凋亡作用，阻滞于G0／G1期的细胞数增加，Bax蛋白表达水平也逐渐增加。结论TRAIL在诱导恶性淋巴瘤细胞凋亡过程中出现抵抗，可能与促凋亡蛋白Bax表达水平下降有关，而Bax蛋白表达水平的下降与mRNA表达水平无关，可能与泛素-蛋白酶体途径的降解有关。

瘦素诱导乳腺癌细胞中端粒酶反转录酶表达的机制

目的探讨在乳腺癌细胞（MCF7）中瘦素诱导端粒酶反转录酶（hTERT）表达的分子机制。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT．PCR）法测定瘦素对沉默信号转导和转录激活因子3（STAq3）基因后MCF7细胞hTERTmRNA表达水平的影响。采用Western印迹方法测定MCF7细胞经不同处理后hTERT蛋白的表达变化。采用染色质免疫共沉淀（ChIP）技术观察STA33与hTERT启动子的结合情况。应用双荧光素酶分析，探讨瘦素及P-STAT3抑制剂（AG490）对hTERT启动子转录活性的影响。结果STAT3小干扰片段RNA（siRNA）转染细胞后，瘦素诱导的hTERTmRNA的表达减少。Western印迹结果示hTERT蛋白在瘦素处理组及AG490联合瘦素处理组的蛋白表达分别为3．1094-0．051、1．025±0．031，加入P—STAT3抑制剂AG490后，瘦素诱导hTERT蛋白表达明显减少（P〈0．01）。ChIP结果显示对照组与瘦素处理组mRNA分别为1、3．311±0．017，瘦素（160ng／m1）作用MCF7细胞后，增加了STA33与hTERT启动子之间的结合（P〈0．01）。双荧光素酶分析结果示，经瘦素（160ng／m1）作用后，hTERT启动子活性的变化倍率为80．98±0．18，对照组为20．76±0．31，加入AG490后，hTERT启动子活性的变化倍率为18．65±0．32，瘦素诱导的hTERT启动子的活性明显下降。结论在乳腺癌MCF7细胞中，瘦素／STA33信号通路是上调hTERT表达的可能机制。

^125I粒子术中植入联合化疗治疗局部进展期胰腺癌的安全性及有效性

^125I粒子治疗实体瘤效果显著，且副作用较小。本研究回顾性分析^125I粒子植入术联合全身化疗治疗局部进展期胰腺癌患者的临床资料，观察患者整体中位生存期、1年生存率、疼痛缓解率、术后并发症等。研究表明术中^125I粒子植入联合术后化疗治疗局部进展期胰腺癌，可有效延长患者生存，缓解患者疼痛。

大豆异黄酮genistein的长期暴露通过下调MCM复合物抑制胆囊癌增殖的研究

大豆异黄酮是天然的酪氨酸激酶抑制剂,与多种肿瘤发病率和死亡率的降低密切相关.同时,酪氨酸激酶如ERBB2的激活是胆囊炎转化为胆囊癌的重要机制,因此,研究长期接触大豆异黄酮与胆囊癌的发生和发展之间的关系十分重要.这项85对的病例对照研究发现,高血浆大豆异黄酮genistein水平与较低的胆囊癌风险相关(≥326.0与≤19.3 ng/mL对比,OR=0.15,95%可信区间0.04~0.59;趋势检验P=0.016),并且genistein暴露水平与胆囊癌组织中Ki67表达负相关(85例).与这些结果一致,体外和体内的长期genistein暴露模型中,胆囊癌细胞的增殖受到抑制.长期暴露于genistein降低了ERBB2的酪氨酸激酶活性,并影响了PTK6-AKT-GSK3β轴的功能,导致胆囊癌细胞中MCM复合物的表达下调.总之,长期接触与大豆制品摄入相关的genistein可能在预防甚至抑制胆囊癌的增殖方面起到一定的作用.

改良FOLFIRINOX新辅助化疗治疗可能切除胰腺癌的临床疗效

目的探讨改良FOLFIRINOX新辅助化疗治疗可能切除胰腺癌的临床疗效。方法采用回顾性横断面研究方法。收集2013年4月至2015年10月天津医科大学肿瘤医院收治的28例可能切除胰腺癌患者的临床病理资料。改良FOLFIRINOX方案（伊立替康135mg／m2，奥沙利铂64mg／m2，亚叶酸钙400mg／m2，5-氟尿嘧啶2400mg／m2，每2周重复）作为新辅助化疗方案。新辅助化疗结束3周后评估手术可行性并制订手术方案。观察指标：（1）新辅助化疗效果。（2）新辅助化疗不良事件。（3）手术及术后情况。（4）随访情况。采用门诊、电话及微信群方式进行随访，了解患者生存情况，随访日期截至2017年1月。偏态分布的计量资料以肘（范围）表示。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线。采用Log-rank检验进行生存分析。结果（1）新辅助化疗效果：28例患者新辅助化疗中位周期为6个周期（3～12个周期）。28例患者治疗反应：部分缓解14例，疾病稳定10例，疾病进展4例。（2）新辅助化疗不良事件：28例患者中．22例发生不良事件，其中1～2级15例，3—4级7例。新辅助化疗期间无因不良反应死亡患者，相关不良反应经对症处理后均能维持原剂量化疗。（3）手术及术后情况：28例患者中，18例施行胰腺癌根治术，其中胰十二指肠切除术11例、胰体尾部切除联合脾脏切除术7例；手术包括切除并重建门静脉及肠系膜上静脉6例，腹腔干切除1例；R0切除10例，R1切除8例。18例患者中，8例发生术后并发症，其中胰瘘2例、胆瘘1例、胃排空功能障碍3例，吻合口出血1例、淋巴漏1例。所有并发症经保守治疗后好转，无行二次手术或术后30d内死亡患者。术后病理学TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期2例，Ⅲ期14例，Ⅳ期2例；术后全部患者接受化疗。10例未施行手术患者继续原方案化疗。（4）随访情况：28例患者均获得随访，中位随访时间为13个月（5～21个月）。随访期间15例患者死亡，其中5例为手术患者，10例为未施行手术患者。18例施行手术患者的中位无进展生存时间和中位总体生存时间分别为14个月和19个月，10例未施行手术患者分别为7个月和11个月，两者生存情况比较，差异均有统计学意义（χ2=7．335，9．950，P〈0．05）。结论改良FOLFIRINOX新辅助化疗治疗可能切除胰腺癌安全可行，患者能耐受较轻的不良反应；新辅助化疗后评估可行手术患者预后相对较好。

肾透明细胞癌胰腺转移患者的临床特征和预后分析

目的:探讨肾透明细胞癌胰腺转移患者的临床特征和预后。方法:回顾性分析2000年1月至2020年5月间天津医科大学肿瘤医院收治的20例经病理确诊的肾透明细胞癌胰腺转移患者的临床资料,记录患者的性别、年龄、转移时间、复发时间、转移部位、胰腺转移灶数目及对于胰腺转移灶是否进行手术等,分析其预后影响因素。结果:20例患者中男性12例,女性8例;确诊肾透明细胞癌的中位年龄为50岁。其中肾癌位于左肾12例(60%),右肾8例(40%);胰腺转移癌单发病灶12例(60%),多发病灶8例(40%);仅转移至胰腺13例(65%),合并其他部位转移7例(35%);肾癌和胰腺转移癌同时发现(同时性转移)2例(10%),肾癌确诊后发生胰腺转移18例(90%)。确诊肾透明细胞癌至发生胰腺转移的中位时间为102个月。10年内胰腺复发13例(65%),10年后复发7例(35%)。胰腺转移癌手术切除9例,靶向治疗13例。随访时间为1~256个月,平均随访时间122.9个月。死亡3例(15%),生存17例(85%),中位生存时间为75.9个月,5年生存率为66.7%。是否为同时性转移、是否合并胰腺外转移是影响肾透明细胞癌胰腺转移患者的预后因素。结论:肾透明细胞癌胰腺转移较为罕见,但预后较好,尤其是确诊肾癌数年后仅发生胰腺转移的患者。

B7-H3在肿瘤免疫中的研究进展

免疫治疗在肿瘤生物学研究中至关重要,并在肿瘤靶向治疗中取得了重大进展。B7-H3(CD276)是B7家族的一个免疫关卡抑制剂,与CTLA4、PD-1和CD28等许多免疫相关因子相互作用。尽管B7-H3的受体是什么尚不明确,但确定其在多种肿瘤中过度表达。起初,有研究结果认为B7-H3可协同刺激免疫反应,但最新的研究结果表明,其在T细胞上有协同抑制作用,从而导致肿瘤细胞的免疫逃避。因此,B7-H3的过度表达与肿瘤患者的预后不良有关,且在体外实验中已证实与肿瘤的侵袭和转移有关。此外,有结果表明,除了免疫调节作用外,B7-H3还能直接影响上皮恶性肿瘤进展。旨在描述不同恶性肿瘤中B7-H3的作用、与其他免疫因子的关系以及在恶性肿瘤进展中的非免疫学功能。在肿瘤治疗中靶向B7-H3可减少肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤进展和转移,因此这可能会改善治疗方案和取得更好的临床治疗效果。