脾切除小鼠肝脏和外周血免疫细胞的动态变化

目的探讨脾切除小鼠肝脏和外周血免疫细胞的动态变化。方法32只雄性C57BL/6小鼠分为假手术组、脾切除1周组、脾切除2周组、脾切除4周组,每组8只。于术后第1周、2周、4周检测小鼠肝脏质量和肝指数,用流式细胞术检测外周血和肝脏免疫细胞(CD3-CD19+B细胞、CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞、CD11b+Ly6C hi单核细胞、CD11b+Ly6C med单核细胞、CD11b+Ly6G+粒细胞、CD11c+MHCⅡ+DC细胞、CD11b int F4/80 hi枯否细胞、CD11b hi F4/80 int巨噬细胞、CD11b hi F4/80 int Ly6C hi巨噬细胞、CD11b hi F4/80 int Ly6C low巨噬细胞)的比例。结果与假手术组相比,脾切除1周、2周、4周组小鼠肝脏质量与肝指数均无显著差异(P>0.05);脾切除1周组肝脏CD11b+Ly6G+粒细胞显著升高(t=-2.339,P<0.01);脾切除4周组肝脏CD3+CD8+T细胞显著升高(t=-5.092,P<0.01);脾切除1周、2周、4周组肝脏CD3+CD4+/CD3+CD8+均显著降低(t=2.785,2.45,-3.549,均P<0.05);脾切除1周组外周血CD11b+Ly6C hi单核细胞(t=-3.321,P<0.05)、CD11b+Ly6G+粒细胞(t=-2.845,P<0.05)显著升高;其余细胞均无显著变化。结论脾切除术后肝脏和外周血免疫细胞比例发生变化,提示脾脏在维持肝脏区域免疫稳态中具有重要作用。

褪黑素对卵巢摘除大鼠体内炎症状态及BMSCs成骨能力影响的研究

目的探讨褪黑素(melatonin,MT)对卵巢摘除(ovariectomy,OVX)大鼠骨量、血清炎症因子水平和对脂多糖刺激下BMSCs培养液中炎症因子水平和成骨能力的影响。方法将15只12周龄SD大鼠随机分为3组,假手术组大鼠仅接受双侧侧腹部切开缝合,OVX组行双侧OVX,OVX+MT组在双侧OVX术后行100 mg/(kg·d)MT口服干预。8周后采用ELISA法检测大鼠血液样本中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平;用Micro-CT检测股骨远端,观察骨量及骨微结构变化并对骨体积分数、骨小梁厚度和骨小梁数量进行定量检测。取3只3周龄SD大鼠,采用全骨髓培养法提取股骨骨髓中的BMSCs并传代培养。经鉴定后取第3~5代细胞,用不同浓度(0、1、10、100、1000μmol/L)MT干预并行细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)法检测细胞活力,筛选最佳浓度MT用于后续实验。将细胞分为成骨诱导组(A组)及成骨诱导+1/5/10μg/mL脂多糖组(B~D组),进行相应干预后用ELISA法检测细胞培养液中IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平;根据CCK-8法和ELISA检测结果,用刺激炎症效果最显著浓度的脂多糖以及最佳药物浓度的MT加成骨诱导培养基对细胞进行干预,并设为E组,同样采用ELISA法检测各炎症因子表达水平;之后分别对A、D、E组行ALP染色和茜素红染色,并用实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)法检测成骨相关基因Ⅰ型胶原α1链(collagen typeⅠalpha 1 chain,Col1a1)、RUNX家族转录因子2(RUNX family transcription factor 2,Runx2)表达水平。结果ELISA和Micro-CT检测示,与假手术组比较,OVX组大鼠骨量减少,血清炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平升高(P<0.05);经MT治疗后,OVX+MT组上述指标均得到改善(P<0.05)。成功提取大鼠BMSCs,CCK-8法检测示100μmol/L是不影响细胞活性的最大MT浓度,将其用于后续实验。ELISA检测示,加入脂多糖刺激后,B~D组细胞培养液中的炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平明显升高,与A组比较差异均有统计学意义(P<0.05);并且呈浓度依赖性,D组各炎症因子表达水平明显高于B、C组(P<0.05);E组加入MT干预后,各炎症因子表达水平较D组显著降低(P<0.05)。ALP染色、茜素红染色及RT-qPCR检测示,与A组比较,D组ALP和茜素红阳性面积百分比以及Col1a1、Runx2 mRNA相对表达量均显著降低,经MT干预后E组上述指标均显著提升,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论MT可能通过降低大鼠体内炎症对绝经后骨质疏松症的骨量产生影响;MT能降低脂多糖刺激引起的BMSCs炎症,并减弱其对BMSCs成骨分化的抑制。

RAC2-MAPK14-HSPA8途径参与肺结核性肉芽肿形成的机制

目的借助蛋白质组学对肺结核患者的病灶区(肉芽肿区)和非病灶区组织进行差异分析,挑选出关键基因,阐明肺结核性肉芽肿形成的作用机制。方法选取2020年10月至2021年2月在新疆医科大学第八附属医院行手术切除病灶的肺结核患者15例,均取肉芽肿病灶区(病例组)和非病灶区(对照组)的组织标本,其中3例进行蛋白提取检测、蛋白酶解除盐、同位素标记、质谱检测、数据搜索等最终形成蛋白质组学库。对筛选出来的差异蛋白进行基因本体注释(GO)、京都基因和基因组百科全书(KEGG)和互作网络分析等,蛋白印迹法对筛选出核心蛋白进行验证。结果差异蛋白火山图筛选出上调表达蛋白有65个,下调表达蛋白有151个;蛋白互作网络筛选出排名前10种蛋白,显著上调的为CTSD、HSPA8、ARHG、RAC2蛋白,显著下调的为MYH14、TJP1、CTNNB1、PXN、HSD17B6、RHOF蛋白。蛋白印迹法结果显示,HSPA8、MAPK14、RAC2在肺组织病灶区均明显增高,差异均有统计学意义(t值分别为3.20、3.23、6.30,均P<0.05),并参与抗原加工和呈递。结论本研究筛选出与肺结核性肉芽肿关系密切的排名前10种蛋白CTSD、HSPA8、ARHG、RAC2、MYH14、TJP1、CTNNB1、PXN、HSD17B6、RHOF,其中RAC2-MAPK14-HSPA8途径参与抗原加工和呈递,这在肉芽肿形成过程中扮演重要角色,也为研发抗结核药物提供了潜在治疗靶点。

数字智能化在关节外科的应用

在人口老龄化趋势加剧带来的以运动系统退行性疾病为代表的医疗需求增长下,提高医疗资源的分配效率,减少医疗成本,改善医疗服务的质量变得愈发重要。随着“健康中国”战略指导以及“互联网+医疗健康”计划的推进,我国医疗健康事业正经历从医疗信息化经由医疗数字化,逐步向医疗数字智能化转型的过程[1]。在关节外科领域,数字智能化(简称“数智化”)是骨关节疾病精准医疗理念的重要实践途径之一。其应用主要包括关节疾病的图像诊断、关节手术规划、计算机术中导航、机器人辅助关节置换手术、关节数据分析和康复监测等。