拮抗草坪蘑菇圈生防菌剂的关键发酵工艺及优化

为获得草坪蘑菇圈病原菌拮抗生防菌剂的优化参数,本研究以拮抗蘑菇圈病原-肉褐麟小伞菌(Lepiota brunneo-incarnata)的黄曲霉(Aspergillus flavus)CP01为目的菌,对其分别进行液、固态发酵条件的优化。通过单因素试验优化发酵时间、培养温度、培养基类型及初始pH等条件,对最佳液态发酵条件进行筛选;并通过单因素试验优化培养物料、外源养分、发酵时间和温度等条件,对最佳固态发酵条件进行筛选。结果表明:液体发酵条件下,马铃薯葡萄糖液体培养基(PDB)中菌丝体干重含量最高,而在青秸秆粉浸提液培养基(CSE)中有效菌数最高,且该发酵液对蘑菇圈病原的抑菌效果最佳,培养基最适初始pH为5、最佳发酵条件为30℃、5d;在固态发酵条件下,最适发酵培养物料为经浸提法去营养化的青秸秆粉,外源添加养分为料水比1∶50的青秸秆粉浸提液,最适发酵条件为33℃、9d。以上优化参数为草坪蘑菇圈生防菌剂的研发奠定了基础。

巨大芽孢杆菌L2发酵产物对魔芋软腐病菌的抑菌机制

目的:探究巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)L2发酵产物对贮藏期魔芋软腐病菌--胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora subsp. carotovora)EC-1的抑菌机制。方法:以巨大芽孢杆菌菌粉为原料提取发酵产物,用常压硅胶柱层析分离得到发酵产物流分LE4-1~LE4-7,经抑菌实验筛选得到对胡萝卜软腐欧文氏菌EC-1有良好抑菌作用的流分,再使用气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)法对其进行成分分析;并通过测定其半数抑制质量浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)、菌液电导率、核酸蛋白泄漏、可溶性总糖质量浓度、菌体总蛋白、菌体磷代谢及胞内活性氧水平对其抑菌机制进行研究。结果:巨大芽孢杆菌L2流分LE4-3对胡萝卜软腐欧文氏菌EC-1有良好抑菌作用,经GC-MS检测其主要成分为苯乙酸乙酯(32.190%(相对含量,后同))、亚油酸乙酯(15.819%)、苯乙酸甲酯(13.793%)等;LE4-3对胡萝卜软腐欧文氏菌EC-1的IC50为(1.06±0.01)mg/m L,并初步推测其作用机制是通过影响细胞膜完整性、损伤细胞结构、抑制细胞蛋白质合成及能量代谢等对胡萝卜软腐欧文氏菌EC-1发挥抑菌作用,因此巨大芽孢杆菌L2流分LE4-3在魔芋抗软腐病贮藏中具有良好的应用前景。

黑曲霉xj粗提物的拮抗机制及其抗氧化活性

为探究黑曲霉Aspergillus niger xj菌株粗提物SE对魔芋白绢病病原菌——齐整小核菌Sclerotium rolfsii R-67的拮抗机制及其抗氧化活性,采用菌丝生长速率法,研究了SE对R-67的抑制作用,进而通过测定处理后菌株的电导率、核酸蛋白泄露、三羧酸循环关键酶[琥珀酸脱氢酶(SDH)及苹果酸脱氢酶(MDH)]比活力、胞内活性氧(ROS)水平及核酸含量,对SE的拮抗机制进行了研究,并通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法及2,2-联氮基-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)法测定了其抗氧化活性。通过气相色谱-质谱联用(GC-MS)方法,从粗提物SE中共检测到12种化合物,其中主要成分为5-羟甲基糠醛(质量分数97.96%)。生物试验结果表明:SE能够抑制R-67菌丝的生长,其IC50值为0.46 mg/mL;SE处理可导致R-67菌液的电导率升高及核酸蛋白含量增加,抑制其三羧酸循环中关键酶SDH与MDH的活力,增加菌体细胞内ROS含量,使细胞核4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色的荧光强度减弱,据此初步推测其作用机制是通过影响R-67菌体细胞膜完整性、损伤细胞结构、抑制三羧酸循环及核酸合成等途径而发挥抑菌作用。研究表明,黑曲霉xj粗提物SE在魔芋白绢病的生物防治中具有良好的应用前景,此外SE对DPPH及ABTS自由基有一定的清除能力,有望应用于抗氧化功能性产品中。

黑曲霉孢子粉粗提物对青枯雷尔式菌的抑菌机制初探

以黑曲霉(Aspergillus niger)孢子粉作为原料,对其粗提物进行分离,以青枯雷尔式菌(Rastonia solanacearum)为指示菌,对抑菌活性进行监测,并利用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术分析其活性成分。通过测定电导率、核酸蛋白泄露、总蛋白以及活性氧(ROS)等指标的变化分析黑曲霉抑菌机制。结果显示,黑曲霉粗提物洗脱液S5对青枯雷尔式菌具有良好的抑菌效果,抑菌率可达90.87%;GC-MS检测结果显示,其主要成分为油酸(26.52%)、亚油酸甲酯(14.46%)、油酸甲酯(11.10%)、棕榈酸(10.50%)、油酸乙酯(7.36%)、亚油酸乙酯(6.88%)等;粗提物主要通过影响细胞膜完整性、损伤细胞结构、抑制细胞蛋白质合成及能量代谢等方面达到抑制菌株Q11-2的效果。

拮抗菌巨大芽孢杆菌L2发酵条件的响应面优化

为探明拮抗菌巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)L2的发酵条件,提高其抑菌活性,以链格孢菌(Alternaria alternaria)为指示菌,以抑菌圈直径为响应值,优化其发酵条件。在单因素试验的基础上,采用响应面法对发酵条件中各因素进行优化。结果表明:最优发酵条件为牛肉膏4.6 g/L,氯化钠3.0 g/L,初始p H值为7.0,葡萄糖15 g/L,接种量6%,装液量50 m L/250 m L。在此优化条件下,抗菌物质的抑菌圈直径大小从未优化前的(14.55±0.43)mm提高至(34.99±0.14)mm,抑菌圈直径增加了140.48%。

巨大芽孢杆菌L2粗提物的抑菌效果及其抑菌成分分析

对巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)L2粗提物进行初步分离,以青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)为指示菌进行活性追踪,并利用气质联用(GC-MS)法分析其活性成分。结果表明:粗提物洗脱组分LE4-5在质量浓度为1.4mg/mL时对青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)RS-2、根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)T-37及胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora)EC-1的抑制率分别为91.04%、59.58%及23.83%;对菌株RS-2和T-37的IC_(50)值分别为(0.512±0.056)mg/mL和(1.215±0.078)mg/mL。GC-MS分析结果发现,粗提物洗脱组分LE4-5的主要成分为亚油酸(23.607%)、亚油酸甲酯(14.444%)、油酸(4.337%)等不饱和脂肪酸。

常压室温等离子体诱变选育高产微生物絮凝剂黑曲霉菌株

该研究采用常压室温等离子体(ARTP)诱变技术对黑曲霉(Aspergillus niger)xj进行诱变,通过考察致死率与正突变率确定最佳诱变时间,通过发酵培养选育高产微生物絮凝剂菌株。结果表明,黑曲霉xj的最佳诱变照射时间为90 s;经初筛共得到416株诱变菌株;经复筛得到10株絮凝活性较高的诱变菌;再经同步发酵培养,比较突变菌的生长状态、絮凝活性及遗传稳定性,获得2株絮凝活性较高、稳定遗传的突变菌株A90-34与A90-37,其对高岭土悬液的絮凝率分别为94.12%和94.96%,与原始菌株相比,分别提高26.19%、27.03%,连续传代7次仍具有良好的遗传稳定性,絮凝率维持在92%~95%。

黑曲霉泡腾片对烟草青枯病防效及烟株生长的影响

以云烟87为试材,研究黑曲霉(Aspergillus niger)泡腾片生防菌剂对烟草农艺性状的影响和对烟草青枯病的防治效果。盆栽试验表明,黑曲霉泡腾片稀释800倍时,对烟草青枯病的防治效果可达92.9%,显著高于稀释1 200倍的多粘类芽孢杆菌(Peanibacillus ploymyxa)(42.9%)的防效(P<0.05)。大田试验表明,黑曲霉泡腾片在提高烟草叶片数、叶长、叶宽、直径、株高等农艺性状方面优于清水对照,表现出良好的促生效果;对采收的烤烟进行送检,结果表明,施用泡腾片的烟叶呈现出良好的评吸效果。

黑曲霉泡腾片制备工艺优化

该研究采用粉末直接压片法制备黑曲霉(Aspergillus niger)泡腾片,以崩解时限、pH值、发泡量为评价指标,通过单因素试验和正交试验对黑曲霉泡腾片的工艺参数进行优化。结果表明,黑曲霉泡腾片的最佳制备工艺为酒石酸和碳酸氢钠比例1.00∶1.25、崩解剂添加量70%、黑曲霉孢子粉添加量15%、质量分数为10%的聚乙二醇6000乙醇溶液为润滑剂,添加量为3.15 g/m L,质量分数为2.5%为聚乙烯吡咯烷酮乙醇溶液为粘合剂,添加量为7 g/m L。在此优化条件下所得的黑曲霉泡腾片表面光滑,黏冲不明显,pH值为5.7,且崩解时限(23 s)、发泡量(40.79 m L/g)、硬度(4.3 kg)均符合2015版《中国药典》的规定,在水中可迅速崩解。

高中生物教学中思维导图教学策略的构建与应用

思维导图有逻辑性强、层次分明、直观明了等特点,应用在教学中能够帮助学生梳理思维,提高课堂教学效率。高中生物知识具有很强的抽象性,教师在教学中既要向学生传授知识内容,又要培养学生的独立性和主动性。对此,教师在教学中需要采取多样化的教学手段,提高学生的学习效率。

响应面法制备黑曲霉浸膏水分散片剂及抗病促生作用

以黑曲霉浸膏为试验材料,采用单因素试验筛选和响应面分析法优化制备黑曲霉浸膏水分散片剂,通过田间应用研究黑曲霉浸膏水分散片剂对烟草农艺性状和生理生化指标的影响。结果表明:黑曲霉浸膏水分散片剂最佳配方为10%黑曲霉浸膏,崩解剂比例(酸碱)0.45,36%崩解剂,6%聚乙二醇6000,2%聚乙烯吡咯烷酮K30,填料补足;在此条件下制备得到的黑曲霉浸膏水分散片剂表面光滑,颗粒强度适中,黏冲不明显,悬浮率80.56%,pH 5.71,崩解时间130.2 s,符合农药剂型质量技术指标。通过田间试验结果表明:与对照相比,两地区施用黑曲霉浸膏水分散片剂烟草叶片数增加68.35%~89.83%、叶长增长9.54%~30.18%、叶宽增宽23.37%~29.38%、茎粗增粗66.40%~97.36%、株高增高5.80%~16.30%;在黑曲霉浸膏水分散片剂的作用下,对烟草青枯病的大田防治效果达50%以上,提高烟草对外界不利环境的适应能力,促进植株生长及环境抗逆性,为微生物菌剂的开发与应用奠定基础。

青枯雷尔氏菌拮抗菌黑曲霉xj的ARTP诱变选育

[目的]为了提高黑曲霉(Aspergillus niger xj)对青枯雷尔氏菌的拮抗活性。[方法]首先采用常压室温等离子体诱变技术对黑曲霉xj菌株进行诱变处理,然后以青枯雷尔氏菌作为指示菌,通过琼脂柱法和滤纸片法筛选正突变株,并对正突变株遗传稳定性进行研究,最后通过二倍稀释法测定其最小抑菌浓度。[结果]ARTP诱变黑曲霉xj 120 s时,筛选得到一株遗传稳定且具有高效拮抗能力的菌株120S-8,菌株120S-8连续传代14代变异系数比出发菌小且抑菌活性无明显下降,菌株120S-8抑菌圈直径(36.43 mm±1.41 mm)相比出发菌抑菌圈直径(27.85 mm±2.22 mm)增加30.8%,生长稳定期(3 d)较出发菌株(4 d)提前1 d到达,最小抑菌浓度(7.50 g/L)较出发菌株(15 g/L)低50%,且抑菌谱更广。[结论]常压室温等离子体诱变技术处理黑曲霉xj后,菌株抑菌活性在现有基础上提高了50%,同时遗传性稳定性增强了13.5%。为研发黑曲霉应用于青枯病的生物防治提供菌株资源。