猪血凝性脑脊髓病毒刺激小鼠树突状细胞成熟及炎性因子分泌

为了了解猪血凝性脑脊髓炎病毒(Procine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)感染机体后对树突状细胞(Dendritic cell,DC)的激活状况,以及DC在PHEV感染过程中参与免疫应答的能力,本试验分离了BALB\c小鼠骨髓细胞,并通过条件培养基诱导培养8d,获得纯度约77.69%的DC。将PHEV接种DC后,分别对其表面成熟标志分子CD40、CD80、MHCⅡ类分子以及分泌炎症因子的能力进行检测分析。结果显示,PHEV感染DC后T细胞共刺激分子CD40、CD80及MHCⅡ均有一定程度的上调,同时DC分泌细胞因子和趋化因子的能力显著增强,尤其IL-1β的mRNA表达量增高近10倍。经荧光定量PCR方法检测病毒刺激后DC模式识别受体的表达情况结果显示,TLR4和TLR9表达量变化不明显,TLR7的表达受到抑制;但Rig-I的表达量显著增加。结果表明,PHEV在体外能有效的活化DC并促使其成熟为有效的抗原提呈细胞,具有潜在的激活T、B淋巴细胞的能力。

猪血凝性脑脊髓炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及山东省猪血清抗体检测分析

首先应用血凝抑制试验(HI)对从山东省部分地区采集的178份猪血清样品进行了猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)抗体检测。结果显示,这些猪群中HEV的HI抗体总体阳性率高达61.24%(109/178),说明HEV的感染较为普遍。同时,以纯化的病毒作为包被抗原,通过优化反应条件,成功建立了HEV抗体间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法。应用该ELISA方法对从山东地区猪血清中随机抽取的44份样品进行检测,结果显示,HEV抗体阳性率为72.73%(32/44);而HI抗体阳性率为56.82%(25/44)。两种检测方法的阳性符合率为92.00%。结果表明,建立的ELISA方法较HI方法敏感性高。

猪血凝性脑脊髓炎病毒感染可激活脑内的小胶质细胞

以猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)易感的BALB/c小鼠为实验动物模型,以小胶质细胞表面特异性标记物Iba1蛋白为检测对象,利用荧光定量PCR、Western-blot、免疫组化等方法,分别从基因转录水平、蛋白水平和组织学水平对PHEV感染后不同时间点小鼠脑内小胶质细胞的增殖、活化情况进行了检测分析。结果表明,与对照组相比,试验组小鼠脑组织内的Iba1基因转录水平、蛋白表达量均有升高,且都随着感染时间延长而增大。将采集的小鼠脑组织制作石蜡切片,免疫组化结果证实PHEV的感染激活了小胶质细胞,表现为细胞数量增多,呈聚集样分布;同时细胞形态变化也很明显,胞体变大并呈阿米巴状。上述试验证实PHEV感染小鼠后小胶质细胞发生了明显增殖、活化现象,为后期深入开展PHEV所致神经系统炎性损伤的机制研究奠定了基础。

肉鸽NDV吉林分离株的分离鉴定及其F基因的遗传进化分析

利用SPF鸡胚从吉林省某肉鸽养殖场送检的疑似新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)感染肉鸽体内分离获得1株病毒,通过电镜负染观察、血清学检查、RT-PCR检测以及病理组织学观察等方法对该株病毒进行系统的鉴定,电镜负染观察可见呈圆形、有囊膜的病毒粒子,且在囊膜表面有呈放射状排列的纤突;血清学检查结果显示,该病毒株可凝集鸡的红细胞,具有血凝性;RT-PCR扩增获得与预期目的基因片段大小一致的条带;病理组织学观察可见脑血管及神经胶质细胞周围间隙增大,呈典型的脑水肿变化。综合分析以上结果,证实该分离株为NDV,命名为NDV-cc-12。参照GenBank中NDV F基因的核苷酸序列,设计合成1对特异性引物,利用RT-PCR成功扩增获得NDV-cc-12分离株F基因并对其进行序列测定。序列分析结果显示,获得的NDV-cc-12分离株F基因片段长为374bp,其裂解位点的氨基酸序列为112RRQKRF 117,符合NDV强毒株裂解位点序列特征。F基因的系统发育进化树结果表明,NDV-cc-12分离株与HLJ4-95毒株的亲缘关系较近,处于同一基因亚型上,属于基因Ⅵ型。