某鸡场大肠杆菌噬菌体的分离鉴定及其生物学特性研究

为了探究大肠杆菌噬菌体的形态特征和生物学特性,本研究以实验室保存的55株禽致病性大肠杆菌为宿主菌,通过双层琼脂平板法从某鸡场污水和淤泥中分离纯化得到1株宽裂解谱的大肠杆菌噬菌体,命名为Bp16,用2%磷钨酸负染后于透射电镜观察其形态结构,采用双层琼脂平板法测定其温度和pH稳定性、最佳感染复数(MOI)及一步生长曲线等生物学特性。透射电镜观察结果显示,分离得到的宽裂解谱噬菌体Bp16的头部为正二十面体结构,有尾且有尾丝,体长约为220 nm,根据《病毒分类——国际病毒分类委员会第9次报告》的分类特征,该噬菌体为有尾噬菌体目、肌尾噬菌体科的成员;以实验室保存的55株禽致病性大肠杆菌为指示菌,其裂解效率仅为12.73%;温度稳定性结果显示,在37~60℃作用30 min或1 h噬菌体效价基本保持不变,且在80℃作用1 h后效价仍能达到1×10^(4) PFU/mL以上,说明该噬菌体对温度的变化不敏感,具有耐热的特性;pH稳定性结果显示,在pH 5.0~10.0之间效价基本保持不变,对酸碱较耐受;最佳感染复数为1;根据最佳感染复数来绘制一步生长曲线,测得其潜伏期为20 min,暴发期为50 min,裂解量为73 PFU/cell。综上所述,噬菌体Bp16具有热稳定性、酸碱稳定性及裂解能力强等优点,为后续试验研制大肠杆菌噬菌体制剂奠定了基础。

四川地区山羊源沙门菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解四川地区山羊携带沙门菌的情况,本试验采集了226份山羊粪便样本(健康样本68份,腹泻样本158份)进行沙门菌的分离培养和PCR鉴定,并分析了该菌对18种常用药物的耐药性。结果显示:158份腹泻样本中沙门菌的分离率为15.2%(24/158),68份健康样本中沙门菌的分离率为11.8%(8/68);所分离出的32株沙门菌对头孢拉定、头孢噻吩、头孢噻肟、庆大霉素、大观霉素和丁胺卡那霉素高度敏感,对四环素、链霉素、罗红霉素、氟苯尼考、万古霉素、氨苄西林和阿莫西林具有耐药性。

大肠杆菌噬菌体BP16对鸡大肠杆菌病的防治效果

【目的】探究大肠杆菌噬菌体BP16对O2血清型禽致病性大肠杆菌感染引起的鸡大肠杆菌病的防治效果,以及噬菌体BP16的最佳治疗剂量。【方法】将O2血清型禽致病性大肠杆菌新鲜培养物稀释成5×10^(10)、5×10^(9)、5×10^(8)、5×10^(7)和5×10^(6) CFU/mL 5个浓度梯度,以测定禽致病性大肠杆菌的半数致死量(LD_(50)),确定其感染剂量;选取常用的对革兰阴性菌有抑菌或杀菌作用的药敏纸片进行药敏试验,筛选出阳性对照药物;经无菌试验和安全性试验确定噬菌体裂解液的无菌性及安全性,用于后续试验。将80只雏鸡随机分为5个试验组与3个对照组,试验组在雏鸡攻毒前后不同时间腹腔注射大肠杆菌噬菌体BP16,3个对照组分别腹腔注射氟苯尼考、大肠杆菌菌液、生理盐水,其余条件一致,连续饲养7 d,记录雏鸡的死亡率,评价大肠杆菌噬菌体BP16对大肠杆菌人工感染试验鸡的防治效果。【结果】O2血清型大肠杆菌的LD_(50)为1.5×10^(8) CFU/mL,筛选出氟苯尼考作为阳性对照药物,噬菌体裂解液中无菌,噬菌体悬液对雏鸡安全,可用于后续防治试验。雏鸡感染大肠杆菌前6 h使用噬菌体能有效预防大肠杆菌病,在感染同时至感染后6 h内使用噬菌体,能有效治疗大肠杆菌病,且噬菌体治疗效果优于氟苯尼考;当大肠杆菌攻毒剂量为1.5×10^(8) CFU时,噬菌体剂量为1.5×10^(9) PFU时治疗效果为最佳。【结论】大肠杆菌噬菌体BP16对大肠杆菌病具有防治作用,本研究为进一步应用噬菌体防治大肠杆菌病及开发大肠杆菌噬菌体制剂提供了科学依据。

沙门菌烈性噬菌体的分离鉴定、生物学特性及基因组分析

旨在为研制沙门菌特异性抗菌制剂提供试验数据和参考,以禽源沙门菌为宿主菌,从鸡场污水中分离纯化沙门菌噬菌体,并对其生物学特性和基因组学进行研究。结果显示:分离到1株沙门菌烈性噬菌体S5,透射电镜下该噬菌体头部直径约50nm,尾部长约200nm,头部呈正二十面体对称,属有尾噬菌体目、长尾噬菌体科;该噬菌体对20株沙门菌的裂解率为75%,效价为8×10^(9)PFU·mL^(-1);在30~60℃作用30min和1h的效价基本不变;pH 4.0~11.0对噬菌体活性影响不明显;最佳感染复数为0.0001,一步生长曲线显示其感染宿主菌后5min内(潜伏期)效价基本保持不变,暴发期约为95min,平均裂解量为50PFU·cell^(1)。噬菌体S5是双股DNA病毒,基因组全长为72519bp,GC含量39.45%,含有9种tRNA,预测到109个ORF,未发现任何编码细菌毒力因子等有害产物的基因。沙门菌烈性噬菌体S5,裂解效果较好、对环境适应性强、遗传背景清楚,以期成为防控沙门菌的抗生素替代产品。

大肠埃希氏菌噬菌体Bp38全基因组测序及生物信息学分析

为了解命名为Bp38的裂解性大肠埃希氏菌噬菌体的遗传背景及基因功能,对其进行全基因组测序和拼接,并采用EditSeq、tRNAscan-SE、tRNAdb、ORF finder、SnapGene、MEGA和Datamonkey等软件对其基因组的基本特性、功能基因预测及注释、遗传进化关系及溶菌酶基因的选择压力进行生物信息学分析。结果表明,噬菌体Bp38基因组全长170004 bp,核酸类型为dsDNA,平均G+C含量为37.60%,有140个功能基因,根据预测的功能可将其分为裂解模块、DNA包装模块、结构组成模块、假性蛋白模块和核酸复制与调控模块,有2个tRNA,分别转运精氨酸(Arg)和蛋氨酸(Met);以末端酶大亚基核酸序列构建系统进化树,分析出Bp38为有尾噬菌体目、肌尾噬菌体科、Tevenvirinae亚科、Mosigvirus属;Bp38溶菌酶基因的选择压力分析结果显示,其共有173个氨基酸位点,其中有2个正向选择位点、10个负向选择位点,分析后可知其溶菌酶基因既受外界环境选择压力的影响,又受自身进化压力的影响,且自身进化压力强于外界环境选择压力。研究结果阐明了大肠埃希氏菌噬菌体Bp38的分子特征,为进一步利用该噬菌体提供了理论依据。

复方戊二醛消毒液杀菌效果影响因素试验

为了了解复方戊二醛消毒液在不同pH值(5.0,6.0,7.0,8.0)、温度(20,25,30,35,40℃)、作用时间(5,10,15,20,25,30 min)、浓度(0.05,0.07,0.10 mg/mL)因素下的杀菌效果,试验采用活菌计数方法,以石膏样毛癣菌为病原,研究对该菌的杀菌效果。结果表明:pH值为8.0时,杀灭效果显著高于其他组(P<0.05);25,30℃组杀菌效果显著高于20℃组(P<0.05),35,40℃组的杀菌效果显著高于其他组(P<0.05);20 min组杀菌效果显著高于5,10,15min组(P<0.05),但显著低于25,30 min组(P<0.05);复方戊二醛消毒液不同浓度组之间杀菌效果差异不显著(P>0.05),但0.10 mg/mL浓度时杀菌效果最佳。说明复方戊二醛消毒液在浓度为0.10 mg/mL、水温40℃、pH值为8.0,作用时间≥25 min时杀菌效果好。