蝉拟青霉/黄芪双向发酵体系建立及成分研究

目的:建立蝉拟青霉/黄芪药材、黄芪药渣双向发酵体系,探究发酵过程中有效成分含量变化。方法:选取正交设计法对接种量、发酵温度、湿度进行优化,并采用硫酸-苯酚比色法、NaNO_2-Al(NO_3)_3比色法及香草醛-高氯酸氧化法对发酵黄芪及黄芪药渣菌质中的多糖、总黄酮、总皂苷的含量进行测定。结果:药材菌质最优发酵条件为温度26℃,湿度90%,接种比例3 mL/5g,药渣菌质最优发酵条件为温度26℃,湿度80%,接种比例3 mL/5g;经发酵后,黄芪药材菌质中多糖、总皂苷含量略减少,而黄酮含量有所增加;黄芪药渣菌质中黄酮、皂苷含量均增加。结论:蝉拟青霉可对黄芪药材和药渣基质进行发酵,且发酵后菌质中有效成分的得率显著增加,增强了黄芪药材的药用价值,并为药渣的处理提供了新的思路。

发酵乳杆菌发酵人参工艺优化及人参皂苷抗氧化活性测定

目的优化发酵乳杆菌发酵人参的工艺,分析发酵前后人参皂苷抗氧化活性。方法以人参为发酵基质,发酵乳杆菌为发酵菌株,活菌数为响应值,对发酵时间、人参添加量、发酵温度、接种量等因素进行设计及响应面分析。采用HPLC法对人参皂苷含有量进行测定,利用T-SOD试剂盒测定发酵前后SOD活性变化。结果最佳条件为发酵时间42 h,人参添加量8.03%,温度28.24℃,接种量2%,乳酸菌活菌数为4.5×10^13CFU/mL。发酵后人参皂苷含有量均有一定升高,表明发酵过程存在其转化。人参匀浆SOD活性较发酵前提高了26%。结论益生菌发酵人参具有潜在的应用价值。

银杏叶发酵研究进展

银杏叶是我国特有的中药材之一。银杏叶中的黄酮及萜内酯等成分具有多种药效作用,银杏酸则具有一定的毒性,利用微生物对银杏叶进行发酵可以达到增效减毒的目的。本综述介绍了银杏叶经发酵后新物质的生成、物质含量的变化、发酵产物的药理学研究以及发酵产品在保健品、食品、饲料方面应用的研究,为进一步开发利用银杏叶提供参考。

安徽和浙江蝉花内生细菌的分离及其多样性研究

目的:探究蝉花内生细菌的多样性,分析内生细菌的抑菌性,完善对蝉花内生细菌的认识。方法:扩增ITS序列对野生蝉花进行鉴定;利用不同培养基对蝉花内生细菌进行分离鉴定;抑菌圈法分析内生细菌的抑菌活性;高通量测序技术研究蝉花内生细菌的多样性。结果:安徽、浙江产地蝉花分别分离到47、43株细菌;其中A2-2、T4-1抑菌效果较强。通过高通量测序,共获得有效条带78 678条,依据97%相似性聚类分析,共获得OTU 633个。安徽蝉花的Cedecea sp.、浙江蝉花的Burkholderia sp.为该产地内生细菌的优势种属;Venn图和Heatmap显示两产地蝉花的内生细菌群落结构差异性不高,种群丰度存在一定的差异。结论:蝉花作为一种药用虫生真菌,其菌核内有丰富的内生细菌资源,其中某些优势菌可抑制某些病原菌的生长。

壁虎/蝉拟青霉发酵菌质粗提物抗肿瘤研究

目的:探索中药壁虎经蝉拟青霉发酵后菌质粗提物中蛋白质及体外抗肿瘤活性的变化。方法:分别用冻融、超声、Tris-HCl提取壁虎和壁虎/蝉拟青霉菌质抗肿瘤活性成分,通过蛋白质浓度检测、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析壁虎发酵前后蛋白含量与分子量的变化;MTT检测壁虎发酵前后抗HepG2肿瘤细胞活性的变化及不同提取方式抗肿瘤活性的差异。结果:壁虎发酵后菌质3种提取方式所得蛋白质含量均减少约30%,分子量>10 kDa的蛋白电泳条带均消失;体外抗HepG2肿瘤细胞增殖活性增加,且超声提取物诱导HepG2肿瘤细胞凋亡的IC 50值为10.769 mg·mL-1,比发酵前降低了约50%。结论:蝉拟青霉的生长代谢分解了壁虎中的部分蛋白,且壁虎经蝉拟青霉发酵后抗HepG2细胞增殖活性增强。

异乌药内酯对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用及其机制研究

目的研究异乌药内酯对人乳腺癌MCF-7细胞生长的抑制作用及其作用机制。方法体外培养MCF-7细胞,分为对照组及不同浓度异乌药内酯处理组。采用MTT实验检测异乌药内酯对MCF-7细胞增殖的影响;采用流式细胞术和TUNEL染色法检测异乌药内酯对MCF-7细胞周期、线粒体膜电位及细胞凋亡的影响;采用Western blotting法检测与细胞凋亡密切相关的蛋白表达情况。结果异乌药内酯以时间和剂量依赖性抑制MCF-7细胞增殖、促进细胞凋亡;能够将MCF-7细胞周期阻滞在G2/M期,诱导线粒体膜电位去极化;上调cleaved Caspase-3和促凋亡蛋白Bax表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达,诱导MCF-7细胞的凋亡。结论异乌药内酯对MCF-7细胞的增殖抑制作用呈剂量和时间依赖性,其作用机制可能是通过线粒体途径诱导细胞凋亡。