再生障碍性贫血患者细胞免疫功能的研究

为了探讨细胞免疫功能在再障发病中的作用，对165例再障患者淋巴细胞与全血细胞比值、138例再障患者的T细胞亚群、89例患者的HLA－DR抗原的表达及16例患者PBMNC培养上清的TNFα水平进行了测定。结果表明，再障患者骨髓及外周血中淋巴细胞与全血细胞比值明显高于对照组，T细胞亚群比例失衡，外周血HLA－DR抗原表达明显高于对照组；PBMNC可自发分泌TNFα，PHA刺激后TNFα诱生水平显著增高，免疫抑制治疗可纠正细胞免疫功能紊乱。

无机纳米晶体发光颗粒—量子点对小鼠骨髓造血细胞的标记成像

目的:观察新型发光纳米材料—无机纳米晶体颗粒量子点对小鼠骨髓造血细胞的标记和成像,探讨它在血液细胞分化发育研究中的作用。方法:采用最大发射波长为550nm的绿色量子点转铁蛋白复合物分别在体外和体内对小鼠骨髓造血细胞进行标记研究,并观察量子点转铁蛋白复合物对骨髓造血干细胞CFU-GM的影响。结果:量子点转铁蛋白复合物可标记骨髓中大部分造血细胞,而且荧光强度强,光学和化学稳定性好,对骨髓造血干细胞的增殖分化功能无影响。结论:量子点在血液细胞成像方面表现了优良的特性,在细胞生物学研究中具有重要作用。

急性白血病患者血清中VEGF水平与临床关系的研究

目的:探讨急性白血病患者血清中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的水平与临床的关系及血管新生在急性白血病发病中的作用。方法:采用双抗体夹心ELISA方法测定急性白血病患者血清中的VEGF。结果:急性非淋巴细胞性白血病(ANLL)患者血清中VEGF的水平与正常对照相比,明显增高(P=0.0003)。处于完全缓解期的ANLL患者仍有较高的VEGF分泌。急性淋巴细胞白血病(ALL)患者血清VEGF水平虽比正常对照增高,但无统计学意义(P=0.067),其分泌量与ANLL患者相比,明显减低(P=0.001)。结论:ANLL患者存在着血管新生,VEGF在其发病机制中可能起着重要的作用。

大蒜油诱导HL-60细胞分化的实验研究

目的:观察大蒜油对HL-60细胞的诱导分化作用。方法:MTT法检测大蒜油对HL-60细胞的增殖抑制,Giemsa染色观察细胞形态改变,流式细胞术分析细胞周期改变,并检测CD11b、CD15的表达。RT-PCR检测bcl-2、c-myc/mad、mpo基因mRNA的表达。同时设ATRA、As2O3为阳性对照,与大蒜油的作用进行比较分析。结果:大蒜油明显抑制了HL-60细胞增殖,使大部分细胞阻滞于G0/G1期,作用强于ATRA和As2O3;诱导细胞成熟分化的能力与ATRA接近,优于As2O3;通过抑制bcl-2、c-myc和mpo基因的表达,促进mad基因的表达来发挥作用。

表没食子儿茶素没食子酸酯逆转人白血病细胞多药耐药性及机制研究

目的 :探讨表没食子儿茶素没食子酸酯〔(- )epigallocatechin - 3- gallate (EGCG)〕对人白血病细胞K5 6 2 /A0 2多药耐药性的逆转作用及相关机制。方法 :采用MTT法确定EGCG的非细胞毒性剂量 ,以及对K5 6 2 /A0 2细胞药物敏感性的影响。以流式细胞仪测定细胞内化疗药物浓度的改变 ,同时于逆转前后采用免疫细胞化学方法检测凋亡相关蛋白bcl 2和bax表达水平的变化。结果 :EGCG在低于 10 3.2 μmol/L时对K5 6 2 /A0 2细胞的生长抑制率小于 10 %。 4 0 μmol/L、6 0 μmol/L及 80 μmol/LEGCG均可增加K5 6 2 /A0 2细胞对阿霉素的敏感性 ,使阿霉素对K5 6 2 /A0 2细胞的IC50 由原来的 113.34mg/L降低至9.6 6mg/L、7.6 7mg/L和4 .6 8mg/L ,其逆转倍数分别为 11.73、14 .77和 2 4 .2 3倍。同时 ,不同浓度EGCG均可增加细胞内阿霉素浓度 ,并呈剂量依赖性。在 4 0 μmol/L、6 0 μmol/L及 80 μmol/LEGCG作用后 ,细胞bcl 2和bax的表达水平均增加 ,并且bax/bcl 2比值升高。结论 :EGCG可部分逆转人白血病细胞K5 6 2 /A0 2对阿霉素的耐药性 ,其逆转机制与增加细胞内化疗药物浓度 ,升高细胞bax/bcl

EGCG降低P糖蛋白表达逆转白血病多药耐药的研究

[目的]探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)epigallocatechin鄄3鄄gallate,EGCG]对人白血病细胞K562/A02多药耐药性的逆转作用及相关机制。[方法]采用MTT法确定EGCG的非细胞毒性剂量,以及对K562/A02细胞药物敏感性的影响。以流式细胞术测定EGCG作用前后细胞内阿霉素浓度的变化;同时采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT鄄PCR)及Westernblot方法分别检测经典多药耐药基因(MDR1)mRNA及其产物P糖蛋白的表达。[结果]EGCG在低于103.2μmol/L时对K562/A02细胞的生长抑制率小于10%。40μmol/L、60μmol/L及80μmol/LEGCG均可增加K562/A02细胞对阿霉素的敏感性,使阿霉素对K562/A02细胞的IC50由原来的113.34μg/ml降低至9.66μg/ml、7.67μg/ml和4.68μg/ml,其逆转倍数分别为11.73、14.77和24.23倍。流式细胞术结果表明EGCG可增加细胞内阿霉素浓度,并呈剂量依赖性。RT鄄PCR及Westernblot结果显示不同浓度的EGCG均可抑制K562/A02细胞MDR1mRNA及P糖蛋白的表达。[结论]EGCG可部分逆转人白血病细胞K562/A02对阿霉素的耐药性,其逆转机制与增加细胞内化疗药物浓度、抑制经典多药耐药基因MDR1mRNA及其产物P糖蛋白的表达有关。

鼠抗人CD_3T淋巴细胞单克隆抗体治疗再生障碍性贫血免疫调节作用的临床观察

目的:探讨特异性细胞免疫抑制剂鼠抗人CD3T淋巴细胞单克隆抗体(CD3单抗)治疗再生障碍性贫血(再障,AA)的机制及疗效。方法:22例AA患者中位年龄26岁,其中重型再障(SAA)15例,慢性再障(CAA)7例。既往未经特殊治疗12例,既往治疗无效的10例中,已加用环孢素(CsA)≥3个月7例。CD3单抗给药方法:5mg静脉滴注,每天1次,连用10d为1疗程。采用APAAP法测定T细胞表面抗原的表达;应用ELISA法测定外周血单个核细胞培养上清中细胞因子的含量。结果:随访3～22个月,有17例骨髓象明显好转,外周血白细胞平均升高1.61×109/L,中性粒细胞升高0.77×109/L,血红蛋白升高42g/L,血小板升高45×109/L(!均<0.01)。其中,6例基本治愈,7例缓解,4例明显进步,总有效率为77.27%,5例无效;T淋巴细胞亚群的变化:CD4/CD8比值由1.20±0.41上升至1.44±0.39、HLA-DR的表达率由(32.1±14.7)%下降至(14.6±5.3)%(!均<0.01);体外培养患者外周血单个核细胞分泌下列淋巴因子含量的中位数值(U/ml):肿瘤坏死因子α(TNFα)、干扰素γ(IFNγ)与白细胞介素-2(IL-2)分别由252、796和94降至146、524和48(!均<0.01)。不良反应:单抗治疗期间,全部病例均发热,6例出现胸闷、呼吸困难,但治疗期间无1例死亡。结论:与其他常用的免疫抑制剂相比,CD3单抗治疗AA疗效快、有效率高且安全性较好,其免疫调节作用特异性强。

bcr-abl融合基因在骨髓增殖性疾病中的表达及其临床意义

目的:探讨bcr-abl融合基因在骨髓增殖性疾病(MPD)中的表达及临床意义。方法:采用筑巢式RT-PCR方法检测52例MPD患者bcr-abl融合基因的总RNA表达,其中慢性粒细胞白血病(CML)25例、原发性血小板增多症(ET)17例、真性红细胞增多症(PV)10例。结果:在CML、ET和PV中的bcr-abl融合基因阳性率分别为100%、17.6%和10%。半定量法分析显示bcr-abl融合基因在CML的表达水平明显高于ET和PV约6倍和5倍。结论:bcr-abl融合基因在部分ET患者及PV患者存在表达,但表达水平明显低于CML,对于该类患者的转归,需进一步研究及临床观察。

骨髓异常增生综合征酪氨酸激酶受体FLT3和c-KIT基因表达异常的研究

目的:本研究旨在检测骨髓异常增生综合征(MDS)患者骨髓中酪氨酸激酶受体FLT3、c-KIT基因表达水平及FLT3-LM,以讨论FLT3、c-KIT受体对于MDS患者的临床意义。方法:收集38例诊断明确的MDS患者及10例非恶性血液病患者的骨髓并提取单个核细胞,应用PCR检测FLT3基因表达水平及FLT3基因长度突变(FLT3-LM);应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测c-KIT基因表达水平。结果:38例MDS患者骨髓单个核细胞有11例检测到FLT3基因表达,而对照组均未有FLT3基因表达,2者差异有统计学意义(P<0.05)。11例FLT3受体表达阳性患者中有2例存在FLT3-LM,阳性率为18.2%,10例对照均未发现FLT3-LM。38例MDS患者中有7例检测到c-KIT基因表达,而10例对照组均未有c-KIT基因表达,阳性率为18.4%,2者差异有统计学意义(P<0.05),且FLT3-LM、c-KIT基因表达多为高危患者。结论:以上研究显示MDS患者存在FLT3、c-KIT基因表达异常,且FLT3-LM、c-KIT(+)多发生在高危患者。提示酪氨酸激酶受体FLT3、c-KIT基因表达异常对于MDS患者病情及预后判断中有重要作用。

老年急性髓系白血病患者周围血清血管内皮生长因子水平的检测及意义

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)与老年急性髓系白血病(AML)发病及预后的关系。方法利用ELISA方法测定37例老年急性髓系白血病(AML)和12例健康对照者血清中VEGF水平。结果AML患者血清VEGF的含量(925.71±363.63)ng/L明显高于正常对照组(105.62±34.63)ng/L(P<0.001),VEGF水平高的AML患者与VEGF水平低的AML患者比较其CR率低、CR平均持续时间短(P<0.01)。结论VEGF与老年AML发病关系密切,血清VEGF水平的高低可预测老年AML治疗效果和预后。

表没食子儿茶素没食子酸酯增强阿霉素抗白血病作用的体外研究

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对阿霉素抗白血病的增效作用。方法:用MTT法测定单用阿霉素及与EGCG联合应用时对人白血病K562细胞的增殖抑制作用;以流式细胞术分析联合用药前后细胞内阿霉素浓度的变化;以免疫细胞化学方法检测联合用药前后细胞bax/bcl鄄2比值的变化。结果:联合应用EGCG能够降低阿霉素对K562细胞的IC50、增加细胞内阿霉素浓度及细胞bax/bcl鄄2的比值,并具有剂量依赖性。结论:EGCG能够增强阿霉素对K562细胞的抗肿瘤活性,其作用机制可能是通过增加细胞内阿霉素浓度及增加细胞bax/bcl鄄2比值。

Waldenstrm巨球蛋白血症病理细胞的特殊形态学改变二例报告

Waldenstr m巨球蛋白血症 (WM)是由B淋巴细胞克隆异常增殖所致的血液系统恶性肿瘤 ,其病理细胞具有分泌单克隆免疫球蛋白M的功能。本研究对 2例WM患者的诊断经过及形态学特点进行了分析。结果表明 ,2例患者的细胞学检查均发现特殊的“泡沫状细胞” ,其细胞化学染色具有淋巴细胞的特征 ,而不具有单核巨噬细胞或脂肪细胞的特点。结论 :本文所描述的细胞为印戒样淋巴细胞的特殊亚型 ,可以将其描述为“宝石镶戒样淋巴细胞”。

克隆性基因重排分析在淋巴结增殖性疾病鉴别诊断中的应用研究

采用体外基因扩增多聚酶链反应（ＰＣＲ），研究了３６例非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）及１９例淋巴结反应性增生（ＲＨ）患者的免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）和Ｔ细胞受体γ（ＴＣＲγ）基因重排。结果３６例ＮＨＬ中，３４例出现克隆性ＩｇＨ和ＴＣＲγ基因重排（９４．４％），其中９１％的Ｂ－ＮＨＬ出现ＩｇＨ基因重排，９５％的Ｔ－ＮＨＬ出现ＴＣＲγ基因重排。１９例ＲＨ患者，１４例上述基因保持胚系状态，５例检测到克隆性ＩｇＨ或ＴＣＲγ基因重排。此５例随后的临床表现及治疗反应，均支持恶性淋巴瘤的诊断。表明抗原受体基因重排是淋巴瘤分子水平可靠的克隆性标记，有助于在基因水平确定肿瘤细胞的来源及其分化阶段，尤其在良、恶性淋巴结增殖性疾病的鉴别诊断方面，具有重要的临床应用价值。

阿克拉霉素与阿糖胞苷联合方案治疗难治及复发性急性白血病

观察阿克拉霉素 (Acla)与阿糖胞苷 (Ara- c)联合方案 (AA方案 )治疗难治及复发性急性白血病的疗效 ,对 2 2例难治及复发性急性白血病患者进行了 AA方案化疗。Acla的剂量为 2 5 mg/ (m2 .d) ,静脉推注 ;Ara- c10 0 mg/ (m2 .d) ,静脉滴注 ,第 1～ 7天。结果 2 2例患者中 ,CR13例 ,PR4例 ,有效率为 77% ,主要不良反应为消化道反应 ,骨髓抑制毒性较轻。提示 Acla是治疗难治及复发性急性白血病的有效药物 ,AA方案具有高效。

再生障碍性贫血患者细胞因子水平观察

为进一步探讨细胞免疫对ＡＡ发病的影响，阐明细胞因子在ＡＡ患者中变化的基础与临床意义，采用酶联免疫试剂盒ＥＬＩＳＡ法对３８例ＡＡ患者及２０例正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＮＣ）培养上清诱生Ｇ－ＣＳＦ、ＩＬ－６、ＴＮＦα、ＩＦＮα及ＩＬ－８水平进行测定，同时采用改良ＡＰＡＡＰ法观察外周血Ｔ细胞亚群及ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达。结果ＡＡ患者ＰＢＭＮＣ培养上清中Ｇ－ＣＳＦ阳性率减低，ＩＬ－６、ＴＮＦα、ＩＦＮα及ＩＬ－８水平增高，而且ＣＤ４细胞减低、ＣＤ８增高、ＣＤ４／ＣＤ８降低或倒置，ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达率增高。相关分析发现Ｇ－ＣＳＦ与ＣＤ４及ＣＤ４／ＣＤ８呈正相关而与ＩＮＦα呈负相关，ＩＬ－６与ＷＢＣ及ＣＤ４呈负相关，ＴＮＦα与ＣＤ８呈正相关而与ＣＤ４／ＣＤ８呈负相关，ＩＬ－８与ＣＤ８及ＨＬＡ－ＤＲ呈负相关。证明了细胞免疫功能异常及细胞因子网络失调在ＡＡ发病中起重要作用，激活的ＣＤ８细胞可以抑制造血，且多种因素引起的细胞因子紊乱，最终引发ＡＡ。

丙戊酸钠对多发性骨髓瘤细胞株KM3细胞增殖及其VEGF受体表达的影响

目的:研究丙戊酸钠(VPA)对多发性骨髓瘤细胞株KM3细胞增殖和凋亡的影响,探讨其抗多发性骨髓瘤细胞的分子生物学机制。方法:采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测凋亡率,RT-PCR检测KM3细胞VEGFR mRNA的表达;采用免疫细胞化学法观察KM3细胞VEGFR、ac-H4蛋白的表达。结果:VPA可明显抑制KM3细胞增殖,且具有时间剂量依赖性(P<0.05);不同浓度VPA处理48 h可以明显诱导细胞凋亡,具有剂量依赖性(P<0.05),VPA(0.5、1.0、2.0、4.0 mmol/L)诱导总凋亡率分别为(11.77±4.64)%、(22.13±1.20)%、(23.95±2.57)%和(42.72±4.61)%;RT-PCR结果显示,KM3细胞仅表达VEGFR-1(flt-1),且VPA能在mRNA水平抑制VEGFR-1的表达;免疫细胞化学结果显示,VPA(4 mmol/L)作用48 h后,KM3细胞中ac-H4吸光度值明显增加而VEGFR-1的吸光度明显降低(P<0.05)。结论:VPA通过增加组蛋白乙酰化程度,下调骨髓瘤细胞表面VEGFR的表达,对KM3细胞的增殖起抑制作用。

抗人胸腺细胞单克隆抗体2G_2B_2和2G_2C_2的制备及特性鉴定

用杂交瘤技术制备２株单克隆抗体（单抗）２Ｇ２Ｂ２、２Ｇ２Ｃ２。经研究发现，它们主要与胸腺细胞、脐血及ＰＨＡ激活的外周血单个核细胞等反应；免疫组化显示其主要作用于皮质胸腺细胞；与造血系统中分化早期的瘤细胞、骨髓瘤细胞等反应阳性率较高。生物学特性鉴定结果提示，单抗均属免疫球蛋白ＩｇＧ１亚类，腹水效价达１：１２８０００，所识别抗原分子量为４５／４６ＫＤａ，无抗原调变作用。故２Ｇ２Ｂ２、２Ｇ２Ｃ２是类似ＯＫＴ１０的抗ＣＤ３８单抗，但竞争抑制结果表明三者分别作用于不同的抗原决定簇，即２Ｇ２Ｂ２、２Ｇ２Ｃ２是两个抗ＣＤ３８新单抗。