磷酸丝氨酸转氨酶(serC)基因的克隆与原核表达

【目的】检测磷酸丝氨酸转氨酶(serC)基因在大肠杆菌中能否高效表达。【方法】根据GenBank所公布的serC基因序列设计一对特异性引物,以E.coli JM109基因组为模板PCR扩增目的基因片段,将得到的目的基因定向克隆至大肠杆菌/黄色短杆菌穿梭表达载体pEC7中,构建重组表达载体并转化宿主菌E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE分析。【结果】通过PCR扩增得到约1100 bp的DNA片段,经测序后分析该基因与已发表的serC基因具有99.27%的同源性;对重组表达载体进行酶切和PCR方法鉴定正确的命名为pEC7-C;重组表达载体转化宿主菌,SDS-PAGE分析可见约41 kD与理论大小一致的目标蛋白条带。【结论】重组表达载体转化后E.coliBL21中蛋白表达量比原始菌株的蛋白表达量高,证明serC基因在E.coli BL21(DE3)中成功表达,为进一步构建L-丝氨酸高产基因工程菌奠定了基础。

1398中性蛋白酶的色谱柱纯化与分子鉴定

1398食品级蛋白酶是一种由枯草芽胞杆菌1398发酵产生的用于食品加工处理的中性蛋白酶。目前国内生产工艺制取的固体酶制剂存在菌体未分离、产品颜色深、酸臭味大等缺点。本文以开发无色无臭的液体蛋白酶制剂为目的,对蛋白酶的发酵后提取、纯化工艺等进行了深入研究,分别考察了离子交换树脂层析和工业级大孔树脂对发酵液中1398中性蛋白酶的分离纯化效果,对纯化后的蛋白酶进行了Maldi-Tof质谱分析,并对编码该蛋白酶的基因进行了测序和序列分析,为进一步利用基因工程重组技术生产该蛋白酶奠定了研究基础。

玉米秸秆青贮过程中优势细菌多样性分析

通过从发酵0、1、3、5、15、30和60d自然发酵的青贮玉米(CK)和采用菌剂处理的青贮玉米(处理1)上取样,分别进行pH值测定和菌群总DNA的提取。总DNA经纯化后采用引物341F-GC和518R进行细菌16S rDNA V3区PCR扩增,扩增产物进行变性梯度凝胶电泳(DGGE)分离并回收优势条带和变化明显的条带进行测序分析,了解秸秆饲料发酵过程中的优势细菌多样性及动态变化规律,从而为现有青贮接种菌的改良奠定理论基础。研究结果表明:采用菌剂处理的青贮玉米pH值下降更快,其优势细菌种类更丰富,且各优势菌的丰度比对照组中相应菌的丰度更强。

棉秸秆降解高温菌株的筛选及产酶分析

从新疆地区分离具有降解棉秸秆纤维素功能的菌株,得到4株耐高温真菌(50°C)。纤维素酶学性质分析表明,该4株菌的纤维素酶具有良好的耐酸性(最适pH为4.5)和耐高温性(最高达60°C)。以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)、微结晶纤维素、棉花、滤纸、淀粉、果胶为底物测定酶活力,滤纸酶活力(FPA)最高达2.63 U/mL、淀粉酶活力最高达6.17 U/mL、果胶酶活力最高达5.86 U/mL。4株真菌酶学特性分析表明,该系列菌株在秸秆生物质利用方面有很大的应用潜力。

基于认知行为疗法的线上教育在产后抑郁产妇负性情绪及亲子行为中的作用

目的观察基于认知行为疗法的线上教育对产后抑郁产妇负性情绪及亲子行为的影响结局,旨在明确基于认知行为疗法的线上教育介入效果,为进一步纠正产后抑郁女性负性情绪、改善亲子行为提供参考依据。方法采用随机便利法抽取2019年5月—2021年2月在天津市安定医院产后抑郁患者96例为研究对象,将纳入的研究对象按照纳入先后次序予以编号,并根据随机数字表法随机分为观察组和对照组各48例。对照组采用传统的认知行为疗法,观察组采取基于认知行为疗法的线上教育,并观察和比较两组研究对象教育前、后抑郁严重程度、负性情绪变化、亲子行为、教育满意度。结果教育后两组患者轻、中、重度构成比和负性情绪评分及亲子行为评分均比教育前下降,差异有统计学意义(P<0.05);教育后观察组轻、中、重度构成比和负性情绪评分及亲子行为评分均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组教育满意度97.92%高于对照组的87.50%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论基于认知行为疗法的线上教育相对传统教育方法在影响产后抑郁产妇负性情绪及亲子行为方面更具优势,体现了以“以患者为中心”的优质服务理念,是一种值得推广使用的教育模式。