一个耐热碱性磷酸酯酶突变型的研究

为了进一步揭示蛋白质的耐热机制，对含有耐热碱性磷酸酯酶（ＦＤ－ＴＡＰ）的表达质粒ｐＴＡＰ５０３Ｆ进行了随机诱变，用菌落原位显色法从约５０００个转化子中筛选到４个耐热性下降的突变型克隆，并对其中１个克隆（ＴＡＰＭ３）进行了部分酶学性质、ＤＮＡ和氨基酸序列的研究。酶学性质研究表明，与野生型相比，该突变型酶的耐热性有较大幅度的下降，而热激活性无明显改变。 ＤＮＡ序列分析表明在１２３９位ＴＡＰＭ３发生Ｇ→Ａ转换，导致４２７位的甘氨酸变为丝氨酸（Ｇ４２７５），这种突变对酶的耐热性、米氏常数、活化能影响较为明显。这说明只须１个氨基酸置换就会对蛋白质耐热性变化起巨大作用，并且氨基酸残基侧链的大小、电荷等能使蛋白质结构松散的性质，会导致蛋白质耐热性下降。

一个新的人类精子发生相关蛋白激酶cDNA的克隆

蛋白磷酸化被认为在精子发生过程中起重要作用 .从人类胎脑cDNA文库中得到 2个克隆 ,分别长1840bp和 15 71bp ,后者仅比前者在 3′非翻译区少了约 30 0个核苷酸 ,二者拟编码 32 2个氨基酸残基 ,基序分析发现其中含有 1段明显的蛋白激酶基序 .Northern杂交显示其在睾丸中有显著表达 ,暂命名为精子发生相关蛋白激酶 .原位杂交表明精子发生相关蛋白激酶基因在性成熟小鼠睾丸中主要表达在生精小管的外层细胞中 ,而这一层细胞主要包含分裂活跃的精原细胞和初级精母细胞 .提示精子发生相关蛋白激酶可能在精子发生过程中起着比较重要的作用 .