日本血吸虫未成熟虫卵26/28kDa抗原诱导抗雌虫生殖和抗卵胚发育免疫的研究

目的 :探讨日本血吸虫未成熟虫卵的 2 6/ 2 8k Da抗原 ( SIEA2 6/ 2 8k Da)诱导小鼠产生抗雌虫生殖免疫的效果。方法 :采用纯化的 SIEA2 6/ 2 8k Da抗原以及 SIEA- I抗原 ,分别免疫BAL B/ c小鼠 ,于攻击感染后 4 6d进行粪卵、组织内虫卵定量。结果 :证明 SIEA2 6/ 2 8k Da抗原能诱导小鼠产生抑制雌虫生殖的免疫力。与对照组比较 ,SIEA2 6/ 2 8k Da抗原免疫鼠减虫虽不明显 ,但肝组织内总卵数、成熟卵数和粪卵数 ( EPG)分别减少 4 8.1%、83.6%、87.3% ,死亡卵数明显增加 ( P<0 .0 0 1)。此外 ,未纯化的 SIEA和纯化的 SIEA2 6/ 2 8k Da抗原免疫组均见雌虫子宫内虫卵数下降 ,分别达 4 0 .9%、54.8% ,而 SEA和 SIEA- I抗原免疫未见上述效应。结论 :提示抗雌虫生殖免疫和抗卵胚发育的效应 ,主要与 SIEA2 6/ 2 8k Da蛋白组分有关。

日本血吸虫未成熟虫卵26-28kDa抗原的分离与纯化

本文采用超凝胶AcA柱层析方法和SDS-PAGE结合凝胶洗脱方法等,分离纯化了日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)26-28kDa组分.SDS-PAGE、免疫印迹分析(EITB)和银染色等证明,采用该方法分离纯化的26-28kDa抗原纯度高,有较强的免疫活性,并证明该抗原组分在SIEA中含量丰富.纯化的SIEA26-28kDa可作为抗日本血吸虫生殖产卵和抗卵胚发育侯选抗原,用于抗病保护性免疫的研究.

川、鄂两地钉螺足肌蛋白质二维电泳图谱的比较研究

本文比较分析了川、鄂两地钉螺足肌蛋白质多肽图谱。结果:(川)光壳钉螺和(鄂)肋壳钉螺分别显示多肽点92和106个,其大部份为64KD以下的酸性蛋白。除了共有多肽外,两者差异点分别为12和21个,其中主要为对方未查见的特有多肽;此外,在光亮钉螺5号和9号多肽点位置,肋壳钉螺分别出现3个和2个多肽点,以上为质的差异。光壳钉螺3号和肋壳钉螺6号多肽均较对方相应位置的多肽明显增大,存在量的差别。两地钉螺平均差异为16.7％。

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原的初步分析

采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＥＬＩＢ技术分析了日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ），并与可溶性成熟卵抗原（ＳＥＡ）进行比较，二者主要蛋白区带存在明显差异。同时，ＥＬＩＢ结果表明，ＳＩＥＡ中感染血清和免疫血清所识别的６７ｋＤａ、６２ｋＤａ、５４ｋＤａ、５０ｋＤａ、２８ｋＤａ和２６ｋＤａ等抗原组分不出现于ＳＥＡ，推测其在ＳＩＥＡ诱导宿主产生抗雌虫生殖及抗卵胚发育免疫应答方面起作用。

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原诱导抗卵免疫的初步研究

采用日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）及成熟虫卵可溶性抗原（ＳＥＡ）分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，发现ＳＩＥＡ诱导小鼠产生显著的抗生殖及抗卵胚发育的免疫力；与对照组比较，ＳＩＥＡ免疫鼠在攻击感染后４６天，肝、肠组织内总虫卵数明显下降，成熟虫卵数和粪卵数分别降低了５９．９８％，６６．８６％和６６．９７％；粪卵下降程度与肝、肠组织中成熟虫卵的减少相一致，ＳＥＡ免疫后未呈现上述效应。

日本血吸虫童虫保护性单克隆抗体的建株和鉴定

本研究获8株抗日本血吸虫(中国大陆株)童虫的单克隆抗体,从中确定一株具有体内保护性功能的单克隆抗体(编号为N15D9),其保护率范围为14-39％。经间接免疫荧光法和ELISA试验检测,N15D9能与尾蚴、3h龄机械转化童虫和5d龄肺童虫的表膜抗原反应。经3h龄机械童虫可溶性抗原的免疫印迹法分析,N15D9能识别132、96和10kDa抗原分子。

应用抗PwMJ-SAg单克隆抗体诊断早期和肺外型卫氏并殖吸虫病人循环抗原的研究

在8个抗PwMJ-SAg单克隆抗体,IB_1和IB_4可检测出35例早期卫氏并殖吸虫病、15例肺外型卫氏并殖吸虫病等患者血清循环抗原,阳性率达100％;与25份正常人血清无交叉反应;与15例华枝睾吸虫病、16例姜片虫病、15例日本血吸虫病、16倒马来丝虫病和10例肺结核病等患者血清均无交叉反应,但与15例斯氏狸殖吸虫病中8例患者血清有交叉反应,交叉反应率为53.3％。因此,单克隆抗体IP_1和IB_4可作为诊断早期和肺外型卫氏并殖吸虫病的适宜试剂,并对斯氏狸殖吸虫病亦有一定的诊断参考价值。

非放射性马来丝虫DNA探针pBm15-F-Dig的制备及其用于微丝蚴检测的研究

本文报道以异羟基洋地黄毒苷配基(Dig)标记种特异的马来丝虫重组DNA片段,制备非放射性DNA探针,并用于微丝蚴检测的初步结果。含有马来丝虫特异DNA片段的重组质粒pBm15转化入感受态大肠杆菌JM101,筛选扩增后提取质粒DNA,经限制性内切酶EcoRI/SalI消化,低融点琼脂糖凝胶电泳分离特异片段,随机引物法以Dig标记。检测结果表明,该探针可检出lpg同源DNA,240pg的微丝蚴DNA,100μl病人血样中的3.5～7条微丝蚴,与10ng的人白细胞DNA和正常人血样不发生杂交反应。

血吸虫保护性抗原研究现状

业已证实,人类和啮齿动物感染血吸虫后均能建立部份抗感染的抵抗力。这说明血吸虫能在宿主体内诱发保护性免疫反应,据此,人们设想建立血吸虫的疫苗。用照射减毒的尾蚴免疫易感动物,证实能诱导抗感染的保护力。于是,寻找血吸虫保护性抗原就成为研究的一个热点。迄今,利用多克隆抗血清和单克隆抗体(McAb)

评估粪检Kato法血吸虫卵阳性漏检人数的数学模型

Ｋａｔｏ法是用于社区血吸虫病普查的诊断方法。然而，对同一病人的重复检查显示不同Ｋａｔｏ片的虫卵计数存在较大的差异，因此，仅检查一片Ｋａｔｏ片将导致大量的漏检，从而低估疾病流行率。提出了一个基于Ｐｏｉｓｓｏｎ分布的数学模型，用于估计Ｋａｔｏ法的漏检率。

单克隆抗独特型抗体NP30用于日本血吸虫病血清学诊断的研究

本研究用单克隆抗独特型抗体NP30与日本血吸虫肠相关抗原(GAA)和可溶性虫卵抗原(SEA)检测了702份不同病期及正常人群中的血清抗体,结果显示,在急性感染时,NP30抗体的检出率为98％,与GAA(94％)和SEA(98％)的无差别。在慢性感染时NP30抗体的检出率为87％,与GAA(86％)的无差别,但低于SEA(98％)的。在正常人群中,上述3种的抗体假阳性率均为3％左右,无差别。NP30的抗体滴度几何均数在急性血吸虫感染时高于GAA的,低于SEA的,在慢性感染时低于后两者,提示NP30的抗体在血吸虫感染期间出现比较早,消退较快。上述结果提示,NP30可以替代虫源性抗原,用于日本血吸虫病诊断。

日本血吸虫虫卵核糖核酸的提取及鉴定

本文采用异硫氰酸胍－酚－氯仿一步法成功地提取了日本血吸虫虫卵总RNA，琼脂糖电泳结果呈现18S一条主带，与日本血吸虫成虫RNA的电泳结果一致。日本血吸虫虫卵RNA的抽提成功为虫卵cDNA库的构建以及虫卵有效抗原的筛选奠定了基础。

卫氏并殖吸虫囊蚴-童虫特异性血清学抗原及其单克隆抗体的研究——应用Dot-ELISA检测不同病期卫氏肺吸虫病患者血清抗体和循环抗原

本文报道应用Dot-ELISA检测68例卫氏肺吸虫病患者血清抗体和循环抗原的结果。其中,早期患者为35例,循环抗原的显色反应强于血清抗体的显色反应;非早期患者为15例,血清抗体的显色反应强于循环抗原的显色反应;治疗后10年的有18例,其循环抗原均为阴性,但多数患者血清抗体尚未阴转,尽管抗体显色反应较弱。

淡色库蚊越冬过程中蛋白质/多肽二维电泳分析

用二维电泳对淡色库蚊越冬过程中蛋白质/多肽的变化进行了研究。分别查出未越冬蚊、越冬蚊及越冬复苏蚊分子量及等电点不同的蛋白质/多肽点153个、118个和169个。分子量在43kDa以下的斑点占79.08-89.83％,等电点在5.65-7.34的斑点占66.01-83.90％。越冬蚊与越冬复苏蚊的蛋白质/多肽点总差异率(31.01％),显著高于未越冬蚊与越冬复苏蚊的总差异率(21.12％)(P<0.01)。未越冬蚊、越冬蚊与越冬复苏蚊三者共有的蛋白质/多肽点为71个,特有的斑点分别为13个、7个和27个。越冬复苏蚊的蛋白质/多肽点的变异率(15.98％)显著高于未越冬蚊(8.50％)(P<0.05)及越冬蚊(5.93％)(P<0.01)。整个越冬过程中蛋白质/多肽点的总变异率为10.68％。因用于制备匀浆的蚊虫胃血均为Sellal期,卵巢发育不超过体止期,故可排除胃血及卵巢后期发育对结果的影响。

用Dot-ELISA直接法筛选诊断日本血吸虫病的单克隆抗体

报道用14株酶标记单克隆抗体(MAB)与不同病期的血吸虫病人和正常人血清进行Dot-ELISA直接法检测循环抗原,分别计算各株MAb的正确诊断指数r,以初步筛选其中具有诊断价值的MAb。结果显示,r≥0.88者,在急性感染时有三株抗可溶性虫卵抗原(SEA)的和四株抗肠相关抗原(GAA)的,在慢性感染时有一株抗SEA的和二株抗GAA的,这三株在急性感染时也有效。作者将扩大检测样本,期望从上述三株MAb中进一步筛选出具有诊断价值和疗效考核价值的MAb,应用于血吸虫病诊断。

抗日本血吸虫抗独特型抗体的制备及初步鉴定和应用

本研究用1株针对日本血吸虫尾蚴和童虫表膜抗原的单克隆抗体(N15D9)免疫新西兰兔制备多克隆抗N15D9独特型抗体。结果表明,多克隆抗N15D9独特型抗体具有较高的抗体滴度,经用间接免疫荧光法和ELISA分析,该抗体显示较高的结合特异性,与具有相同靶抗原结合特异性的单克隆抗体有中度的交叉反应。当用抗N15D9独特型抗体作为诊断抗原检测日本血吸虫感染的病人血清时,其阳性检出率为39％。本研究结果初步揭示,抗N15D9独特型抗体具有一定的分子模拟作帮和诊断应用的潜能。

免疫印染分析慢性血吸虫病人血清识别日本血吸虫的抗原谱

业已证明,感染血吸虫的人或动物均能建立部分抗感染的抵抗力。分析和确定与建立这种抵抗力有关的血吸虫抗原成分,对筛选血吸虫候选疫苗分子和了解血吸虫抗原与宿主免疫系统的相互作用都是非常重要的。有关这方面的研究以曼氏血吸虫居多。在曼氏血吸虫保护性抗原的研究中,已从童虫、成虫和虫卵的抗原成分中确定了数个具有保护性功能的抗原分子。

寄生虫感染免疫调节的若干分子机理

寄生虫感染宿主后,其抗原性物质可刺激宿主产生免疫应答。这种免疫应答针对入侵寄生虫、起抗虫作用,但亦可引起宿主免疫损伤。另一方面,寄生虫在种系进化中已演化出一套免疫逃避的本领。因此,在宿主体内,免疫抗虫和免疫逃避。

淡色库蚊越冬过程中糖、脂、蛋白质变化的研究

本文运用聚丙烯酰胺凝胶等电点聚焦（ＩＥＦ）电泳，以过磺酸雪夫氏试剂（ＰＡＳ）、Ｎｉｌｅ＇ｓ蓝和考马斯亮蓝染色，对淡色库蚊越冬过程中全虫匀浆及血淋巴内糖、脂、蛋白质的变化进行了研究。各带染色结果显示：越冬期蚊虫全虫匀浆及血淋巴的带数为最少，越冬后期为最多，尤以血淋巴为突出；各带定性结果表明：糖脂蛋白、脂蛋白、糖蛋白、糖、脂、蛋白质的总带数仍以越冬期为最少，越冬后期为最多，尤以匀浆的蛋白质及血淋巴中的糖脂蛋白为甚，各种成分均以酸性成分（ＰＩ＜６．５）占优势；越冬前期、越冬期及越冬后期的比较结果表明：各期的匀浆及血淋巴中都有其特有的某个（些）成分，越冬后期匀浆中出现了较多的特有蛋白质，血淋巴中则出现了较多的特有糖脂蛋白。根据蚊虫越冬的生态生理学及同期所进行的其它生化研究对本文结果进行了分析讨论。