Dnajb13在隐睾小鼠睾丸中的表达及其与生精细胞凋亡的关系

目的:通过分析热休克蛋白40家族成员Dnajb13在成年小鼠生精细胞中的定位,研究其mRNA和蛋白在隐睾小鼠睾丸中表达量和定位的变化情况,初步探讨其在生精细胞凋亡中的作用。方法:手术建立单侧隐睾小鼠模型,采用免疫组化方法研究Dnajb13在小鼠生精细胞中的定位;采用TUNEL、流式细胞检测结合形态学观察确认小鼠隐睾模型是否建立成功,并分析生精细胞凋亡情况;采用qPCR、Western印迹以及免疫组化分析隐睾手术后第1、2、3、4、6、9和15天与正常侧相比隐睾侧Dnajb13 mRNA和蛋白的表达及定位变化情况。结果:免疫组化结果显示在成熟小鼠正常睾丸组织中,Dnajb13表达于生精上皮周期Ⅸ~ⅩⅥ期长形精子中;成功构建隐睾小鼠模型。TUNEL结合流式细胞检测表明I期圆形精子以及分裂期初级精母细胞对温度升高最敏感,隐睾模型手术后最早发生凋亡的生精细胞是圆形精子细胞(Ⅰ~Ⅷ期),从17.09%降为6.52%(P<0.05),随后是变形期精子细胞(Ⅸ~ⅩⅥ期),最后为初级精母细胞;qPCR结果显示术后第3天Dnajb13 mRNA表达量轻微上升,约为正常侧的1.6倍(P<0.05),第4天开始下降,约为正常侧的1.2倍;Western印迹结果显示术后第1~3天Dnajb13蛋白表达量无显著变化,第4天开始下降为正常侧的0.68倍(P<0.05),至第9天均急剧降下降为正常侧的0.4倍,Dnajb13在术后第6天已经凋亡的多核巨细胞中开始表达。结论:Dnajb13定位于成熟小鼠变形期精子细胞以及成熟精子尾部,参与了精子变形过程以及精子鞭毛的形成。隐睾状态下Dnajb13在凋亡的多核巨细胞中表达,可能参与了Ⅵ~Ⅷ阶段的圆形精子细胞的凋亡。