lincRNA-p21在酒精性肠道损伤中的作用

目的探讨基因间长链非编码RNA-p21(lincRNA-p21)在酒精性肠道损伤中的作用。方法将15只C57BL/6Cnc小鼠适应性喂养一周,随机取10只,随机分为lincRNA-p21过表达组和对照组各5只,分别于尾静脉注射lincRNAp21-over-AAV8-U6-GFP病毒、control-AAV8-U6-GFP病毒;以5只Trp53cor1基因敲除C57BL/6小鼠(lincRNA-p21-/-)为突变组,以5只C57BL/6Cnc小鼠作为野生组。各组分别予含5%酒精的液体饲料连续喂养4周,最后3天同时予40%酒精5 g/kg灌胃,建立酒精性损伤模型。模型构建成功后,处死小鼠,留取小肠组织,采用RT-qPCR法检测小肠组织lincRNA-p21表达;HE染色,观察小肠组织病理形态变化;免疫组化法检测小肠组织紧密连接蛋白claudin-1、ZO-1表达;取盲肠内容物,提取其微生物DNA,并进行16S扩增子测序,分析菌群多态性和组成等。结果lincRNA-p21过表达组小肠组织lincRNA-p21相对表达量高于对照组(t=5.31,P<0.05);突变组lincRNA-p21相对表达量低于野生组(t=3.95,P<0.01)。HE染色显示,各组均出现肠道损伤,肠黏膜可见粒细胞、单核细胞浸润。与对照组比较,lincRNA-p21过表达组肠道损伤较重,肠绒毛空泡化增多,肠黏膜细胞结构较紊乱,肠壁水肿和肠壁隐窝损伤较重;与野生组比较,突变组肠绒毛空泡化减少,肠黏膜细胞结构较条理,肠壁水肿和肠壁隐窝损伤较轻。lincRNA-p21过表达组claudin-1、ZO-1相对表达量均低于对照组(t分别为20.84、7.57,P均<0.01);突变组claudin-1、ZO-1相对表达量均高于野生组(t分别为5.53、6.69,P均<0.01)。肠道菌群测序结果显示,lincRNA-p21过表达组与对照组、突变组与野生组肠道优势菌群均为厚壁菌门或拟杆菌门。lincRNA-p21过表达组肠道菌群中放线菌门丰度高于对照组(t=4.21,P<0.01);突变组肠道菌群中蓝藻菌门丰度低于野生组(t=2.62,P<0.05)。KEGG分析发现,lincRNA-p21过表达和基因敲减对酒精暴露小鼠肠道菌群功能的影响涉及氨基酸代谢、脂质代谢、营养物质消化吸收以及细胞生长和死亡等方面。结论lincRNA-p21过表达能够加重酒精性肠道损伤,而敲减lincRNA-p21则可减轻酒精性肠道损伤,其机制可能与增加或减轻肠道屏障损伤以及改变肠道菌群结构有关。

牙龈组织TNF-α含量的RIA及其与牙周炎相关关系的观察

选取了 ４２ 例牙周炎患者和 １５ 例正常人作对照，采用放射免疫检测方法对牙周炎龈组织及正常龈组织中 Ｔ Ｎ Ｆα含量进行测定，并分析其与部分牙周临床指标的相关性。结果表明：牙周炎组与对照组相比，有显著性差异。这说明 Ｔ Ｎ Ｆα参与了牙周病的发病过程。 Ｔ Ｎ Ｆα与临床指标的关系，进一步说明 Ｔ Ｎ Ｆα与牙周炎症程度及组织破坏有关。

扩张性心脏病与HLA-DR基因多态性相关性的研究

目的探讨扩张型心肌病(IDC)与人类白细胞抗原(HLA)DR基因多态性的关系。方法运用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法分别测定102例IDC患者与145例正常人的HLA-DR11、DR12、DR14的基因频率。结果3种基因的阳性率在IDC组明显高于对照组,差异有显著性(30.12%vsl0.35%,45.62%vs11.34%,20.82%vs5.49%,P<0.05,RR分别为2.91,4.02,3.78);同时携带HLA-DR12和DR14的阳性率在IDC组更加显著高于对照组,差异具有显著性(18.49%vs2.96%,P<0.005,RR为6.24=。结论HLA-DR11、DR12、DR14与IDC有明显关联。

B族维生素治疗肾移植受者高同型半胱氨酸血症

目的:探讨叶酸、维生素B6及B12在治疗肾移植患者高同型半胱氨酸(Hcy)血症中的作用。方法:将195例预接受首次肾移植患者随机分为两组:试验组103例,口服叶酸5 mg/d,维生素B650 mg/d及维生素B121 mg/d,连续2个月左右;对照组92例则未口服B族维生素。分别于服药治疗前、术前1 d、术后1、10、20及30 d检测血浆Hcy浓度和血清肌酐水平。结果:试验组血浆Hcy浓度与对照组相比具有统计学意义(P<0.000 1),试验组术后血清肌酐水平下降较快,发生急性排斥反应的比例低于对照组。结论:肾移植患者围手术期适当补充叶酸、维生素B6及B12可降低血浆Hcy浓度,有助于移植肾功能的快速恢复,是减少肾移植并发症及急性排斥反应的重要措施。

采用RIA对脑卒中临床用药的探讨

通过结扎大鼠双侧颈总动脉建立脑缺血再灌注损伤动物模型,采用放射免疫分析技术(RIA)检测其体内的内皮素(ET)水平,来研究甘糖酯(PGMS)和尼莫地平(NIM)对缺血再灌注损伤大鼠脑实质的影响。实验结果表明,PGMS和NIM都能降低缺血再灌注损伤大鼠血浆及脑组织中ET的含量,保护缺血引起的神经元损伤,为临床治疗脑血管疾病提供了新的思路。

内皮素放射免疫分析在药理中的应用

通过结扎大鼠双侧颈总动脉建立脑缺血再灌注损伤动物模型，采用放射免疫分析技术检测其体内的内皮素（ET）水平，来研究甘糖酯（PGMS）和尼莫地平（NIM）对缺血再灌注损伤大鼠脑实质的影响．实验结果表明，PGMS和NIM都能降低缺血再灌注损伤大鼠血浆及脑组织中ET的含量，保护缺血引起的神经元损伤，为临床治疗脑血管疾病提供了新的思路。

骨髓间充质干细胞体外对T淋巴细胞分泌IL-2、IL-4功能的影响

目的:探讨间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)对T淋巴细胞分泌功能的调节作用。方法:体外分离培养、扩增人骨髓MSCs,并通过形态学特征及流式细胞术检测其表面标志加以鉴定。将不同数量的MSCs(5×103、1×104、5×104个细胞/孔)分别与PHA激活的T细胞和混合淋巴细胞反应(MLR)体系共培养,并将不同浓度(25%、50%、75%)的MSCs培养上清和MLR体系共培养。应用ELISA分别检测各培养上清液中T细胞分泌IL-2、IL-4的水平。结果:骨髓MSCs能抑制PHA作用下的T细胞分泌IL-2、IL-4(P<0.05),并呈MSCs数量相关性(P<0.05),且对IL-2的抑制作用更显著;也可抑制MLC体系中T细胞分泌IL-2、IL-4(P<0.05),但各数量组的MSCs的抑制作用无显著性差异(P>0.05)。不同浓度的MSCs培养上清均可抑制MLC体系中T细胞分泌IL-2、IL-4(P<0.05),但不同浓度的MSCs培养上清组对IL-4抑制作用无显著性差异(P>0.05)。结论:骨髓MSCs及其培养上清均可抑制PHA或异体抗原作用下的T细胞分泌IL-2、IL-4,提示MSCs可能是直接作用于T细胞或通过分泌可溶性因子调节Th1/Th2反应平衡而发挥免疫调节作用的。

小柴胡汤对糖皮质激素受体及其mRNA的调节作用

目的和方法 :给予健康雄性小鼠 (Balb/C)小柴胡汤 (TSS) ,糖皮质激素 (GC) ,应用受体放射配体结合分析法测定小鼠脾细胞糖皮质激素受体 (GR)位点数 ,同时用定量逆转录 多聚酶链反应 (RT PCR)法测定脾细胞内GRmRNA水平 ,以期从分子受体水平和基因水平探讨TSS对GR及GRmRNA的调节作用。结果和结论 :(1)应用TSS后GR位点数及GRmRNA水平明显少于正常对照组 ,说明TSS对GR的降调是通过调节GRmRNA水平实现的 ;(2 )TSS与GC合用时GR位点数及GRmRNA水平明显高于单独应用GC组 ,说明TSS可明显减弱GC对GR的降调作用。

脂蛋白相关磷脂酶A_2与兔易损斑块的相关性研究

目的:建立易损斑块动物模型,观察探讨脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、基质金属蛋白酶(MMP-9)在易损斑块中的表达规律。方法:实验新西兰雄兔48只随机分为对照组、稳定斑块组、p53基因组和p53+药物组。对照组假手术后普通饲料喂养;稳定斑块组、p53基因和p53+药物组行腹主动脉球囊拉伤后高脂喂养12周,p53基因和p53+药物组于10周末行腹主动脉斑块形成处转染人野生型p53基因重组腺病毒载体,p53+药物组于12周末给与中国圆斑蝰蛇毒和组胺药物触发斑块破裂。4组兔于实验第1d和处死前检测Lp-PLA2、hs-CRP、MMP-9、HDL、LDL、VLDL血清指标,处死后取腹主动脉斑块处病理标本并做局部原位杂交、免疫组织化学分析。结果:稳定斑块组、p53基因组和p53基因+药物触发组血清Lp-PLA2、MMP-9第12周末明显高于对照组和实验第1d(P<0.05);p53基因组和p53基因+药物触发组血清Lp-PLA2及hs-CRP水平明显高于对照组和稳定斑块组,差别显著(P<0.05);p53基因+药物触发组与p53基因组比较血清Lp-PLA2、hs-CRP、MMP-9水平均差别明显(P<0.05)。第12周末,病理结果示4组兔分别为正常动脉血管、稳定粥样硬化斑块、易损斑块、破裂斑块模型,在p53基因组和p53基因+药物触发组纤维帽厚度明显低于稳定斑块组(P<0.05);p53基因+药物触发组斑块破裂、血栓形成明显高于p53基因组。血清Lp-PLA2与斑块纤维帽厚度呈明显负相关性(r=-0.710,P<0.01),hs-CRP、MMP-9与纤维帽厚度无明显相关关系(P>0.05)。结论:在已建立的动脉粥样硬化动物易损斑块模型上,动脉血清与组织Lp-PLA2、hs-CRP、MMP-9的表达规律表明,Lp-PLA2与斑块的不稳定性相关性好,结合hs-CRP、MMP-9检测可更好阐释斑块的性质;为发现易损斑块并预测斑块稳定性提供了基础实验依据。

碳纳米管/羟基磷灰石复合材料兔胫骨生物相容性研究

目的：探讨不同比例碳纳米管/羟基磷灰石纳米复合材料兔胫骨的生物相容性.方法：将碳纳米管含量为2%和3%的碳纳米管/羟基磷灰石复合材料置入兔右侧胫骨的缺损处,在1周～12周分别进行x线检查、组织学检查及分子生物学分析.结果：不同碳纳米管含量的复合材料均能诱导成骨,无排斥反应.X线片、组织学检查、分子生物学检查均无明显差别.结论：碳纳米管/羟基磷灰石材料有良好的骨相容性.

血清脂蛋白相关磷脂酶A_2与冠状动脉粥样硬化斑块稳定性的相关研究——附107例报告

目的:探讨血清脂蛋白相关磷脂酶A2(lipoprotein-associated phospholipase A2,Lp-PLA2)水平与冠状动脉粥样硬化斑块稳定性的关系。方法:对107例冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者行冠状动脉造影(coronary angiography,CAG)和血管内超声(in-travascular ultrasound,IVUS)检查,根据CAG和IVUS检查有无冠状动脉改变及斑块性质将患者分为稳定斑块组(38例)、不稳定斑块组(33例)和无斑块组(36例),检测所有患者血清的Lp-PLA2水平,分析血清Lp-PLA2水平与IVUS检查指标包括纤维帽厚度、偏心指数、重构指数的相关性。结果:稳定斑块组和不稳定斑块组的血清Lp-PLA2水平明显高于无斑块组(P<0.05);不稳定斑块组的血清Lp-PLA2高于稳定斑块组(P<0.05)。血清Lp-PLA2与斑块纤维帽厚度无明显相关性(r=-0.31,P(0.05),但与偏心指数和重构指数呈正相关(r=0.79,P<0.01;r=0.62,P<0.05)。结论:冠心病患者血清Lp-PLA2水平与冠状动脉粥样硬化斑块稳定性有关,可作为临床预测不稳定斑块的血清学指标。

几种生存分析参数模型拟合方法及其应用

目的 以神经胶质瘤为例阐述 3种生存分析参数模型拟合方法的应用。方法 用危险率图、生存率图及数值法三种方法对患者术后生存时间的分布进行拟合 ,并用C 检验进一步作假设检验。结果 神经胶质瘤患者术后生存时间用三种方法拟合后 ,皆显示患者术后生存时间服从威布尔分布 ;经检验P >0 2 ,亦说明威布尔参数模型可用于患者预后因素的研究。结论 临床资料在拟合分析后 ,应用其特定的参数模型进行生存分析。

急性脑梗死患者血浆VEGF、NPY含量的变化及三七皂甙对其影响

目的 研究急性脑梗死（ACI）患者血浆血管内皮细胞生长因子（VEGF）和神经肽Y（NPY）含量在不同时间段变化及三七皂甙（PNS）对其影响；方法 65例患者随机分为PNS组和对照组，用酶联免疫法和放射免疫法测定VEGF和NPY于第1、3、5、10天血浆含量的变化及应用PNS治疗后其变化情况。结果 ACI患者血浆VEGF和NPY的水平明显增加，不同时间段VEGF和NPY的含量比较有显著性差异（P〈0．05），各时间段VEGF含量显示第5-10天时血浆VEGF达高峰（P〈0．01）。NPY于第3-5天达峰值，之后逐渐下降，第10天的含量仍高于第1天。应用PNS治疗后血浆VEGF一直保持在一个相对较高的水平。血浆NPY的含量于第3天时明显下降，第5天升高，第10天又有所降低，但应用PNS治疗后不同时间段NPY的含量均低于对照组（P〈0．05）。结论 ACI后血浆VEGF和NPY水平开始增高，PNS能够明显增加VEGF的血浆含量，且能使其维持在一个较高的水平；同时PNS对ACI后NPY的表达有部分抑制作用，这可能是PNS能够减轻ACI后缺血缺氧的分子机制之一。

间充质干细胞体外对ITP患者T淋巴细胞分泌功能的影响

目的:体外观察间充质干细胞(MSCs)对特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者T淋巴细胞分泌细胞因子功能的影响。方法:采用Ficoll分离和体外贴壁、传代培养,扩增出骨髓MSCs;通过Ficoll分离法和尼龙棉柱法获取ITP患者外周血T淋巴细胞。以经丝裂霉素(MMC)处理后不同数量(2×103、1×104、5×104cells/well)的MSCs作为基底层细胞,接种体外分离纯化的异体ITP患者T淋巴细胞,分别于2d、4d、6d后各自收集培养上清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法动态测定T淋巴细胞分泌白细胞介素2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素10(IL-10)水平的变化。结果:ITP患者T淋巴细胞分泌细胞因子IL-2、IFN-γ较正常人高(P<0.05),IL-4、IL-10较正常人低(P<0.05)。MSCs可显著抑制ITP患者或正常对照组T淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ(P<0.05),且随MSCs数量的增加,抑制增强(P<0.05),共培养4d、6d时作用明显强于2d时(P<0.05);MSCs可促进ITP患者T淋巴细胞分泌IL-4、IL-10(P<0.05),且随MSCs量的增加,促进作用增强(P<0.05),对IL-10的作用随时间延长而增强(P<0.05),但对IL-4的作用在培养第2d、4d、6d时无显著差异(P>0.05);在正常对照组,当MSCs数量>1×104可以促进T淋巴细胞分泌IL-4与IL-10(P<0.05),且随MSCs数量的增加,作用增强(P<0.05),共培养4d、6d时作用明显强于2d时(P<0.05)。结论:MSCs能够在体外调节ITP患者辅助性T细胞1(Thl)和辅助性T细胞2(Th2)反应平衡,可使ITP患者Th1极化状态部分改善。

持续CO2气腹环境对卵巢癌细胞生物学行为的影响

目的:建立体外模拟腹腔镜二氧化碳(CO2)气腹的手术环境,探讨其对卵巢癌细胞株SKOV3黏附、侵袭能力的影响及其作用机制。方法:将人卵巢癌细胞株SKOV3分别暴露于不同压力(8-12mmHg)的CO2环境中,持续1h、2h、3h后,脱离CO2环境,放入常规CO2培养箱中培养,分别于培养24h、48h、72h后计算各组细胞黏附数;采用实时荧光定量PCR法及免疫细胞化学法检测各组SKOV3细胞CD44v6、MMP-9及E-cadmR-NA和蛋白的表达。结果:将SKOV3细胞置于不同压力、不同时间的CO2气腹环境后,表现:(1)SKOV3细胞的黏附能力显著高于对照组,在CO2压力为10mmHg时、持续作用2h、培养48h后达到一个最高值(均P<0.05)。(2)SKOV3细胞CD44v6和MMP-9的表达明显高于对照组,分别在CO2压力为10mmHg、持续作用1h、培养72h后和在CO2压力为10mmHg、持续作用2h、培养48h后达到一个最高值(均P<0.01);E-cad表达少于对照组(P<0.05),各实验组间比较无显著差异(均P>0.05)。结论:CO2环境可增加SKOV3细胞的黏附力和侵袭性,可能与CD44v6、MMP-9表达增加和E-cad表达减少有关。

细胞因子在糖尿病大鼠肾脏中的表达及其意义

目的 探讨细胞因子在糖尿病肾病发病机制中的作用。方法 采用单侧肾切除的STZ糖尿病大鼠 ,观测其肾脏形态、功能在不同时期的变化。同时 ,采用荧光实时定量RT -PCR方法检测转化生长因子 - β1(TGF - β1)、结缔组织生长因子 (CTGF)、纤溶酶原激活物抑制剂 - 1(PAI- 1)等细胞因子在糖尿病大鼠肾脏中的表达情况。结果 与正常对照组 (NC组 )相比 ,DN组大鼠在 8周、 16周时肾脏肥大指数 (KW/BW)、平均肾小球体积 (VG)、尿白蛋白排泄率 (UAER)、肌酐清除率 (CCr)均升高。 16周时 ,DN组大鼠的KW/BW、CCr则下降。DN组肾皮质CTGF、PAI- 1、FN表达水平均随病程的延长而持续增高 ;8周时TGF- β1mRNA表达量与 16周相比无明显差别。结论 肾脏TGF- β1、CTGF、PAI- 1等细胞因子的表达增高对早期和中晚期糖尿病肾病的形态、功能改变具有重要作用。

血管内皮生长因子受体在鼠横纹肌的表达与羟基磷灰石/碳纳米管复合材料毒性研究

目的从观察鼠骨骼肌组织形态学改变和VEGF表达的角度研究CNTs/HAP纳微米复合材料对鼠骨骼肌的细胞毒性。方法将CNTs/HAP纳米复合材料植入实验鼠臀大肌。按不同时间取材,做组织学观察和RT-PCR分析。结果1d、3d显微镜下观察,炎细胞和淋巴细胞浸润伴轻度水肿、间质疏松;5d、7d显微镜下观察血管壁增厚,单核巨噬细胞和纤维组织增生,少量肌纤维出现变性,VEGF表达呈上升趋势;14天显微镜下观察周围组织间质血管扩张,仅有少量炎细胞浸润,水肿不明显,VEGF表达呈下降趋势。结论CNTs/HAP对鼠骨骼肌细胞无毒性,有利于血管的再生,具有良好的生物相容性。

唾液睾酮碘标放射免疫测定方法的分析

对唾液睾酮碘标放射免疫的测定方法进行了探讨。结果表明，唾液睾酮值／血清睾酮值＝１．２±０．５％，唾液睾酮浓度不仅与推算的血浆游离睾酮的浓度相关（ｒ＝０．８６４２，Ｐ＜０．０１）。且此方法经济简便、无创伤，不会引起机体的应激反应。更适合临床及机体睾酮动态等方面的研究。

还原型谷胱甘肽对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤LDH、MDA的影响

目的研究乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤后乳酸脱氧酶(LDH)及丙二醛(MDA)的变化及还原型谷胱甘肽(GSH)对其影响。方法乳鼠心肌细胞随机分为5组:A组为正常对照组;B组为A/R组(缺氧2h,复氧1h);C、D、E组为GSH处理组,即首先加入GSH,分别使其终浓度为40、80、160mg.L-1,然后进行A/R,于复氧后测定各组培养液中LDH水平及细胞内MDA含量和细胞活性。结果与正常对照组相比,A/R组LDH、MDA水平均显著升高(P<0.01),细胞活性显著降低(P<0.01)。与单纯A/R组比,D、E组上述变化均明显减轻(P<0.01)。结论GSH对乳鼠心肌细胞A/R损伤具有保护作用,并具有浓度依赖性。