应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小反刍兽疫病毒西藏分离株Tibet 07的血凝素蛋白,并对其抗原性进行鉴定。扩增小反刍兽疫病毒Tibet 07株H基因,克隆至p Fast Bac/CT-TOPO载体中,构建重组穿梭质粒p Fast Bac-PPRV-H,转化感受态大肠杆...应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小反刍兽疫病毒西藏分离株Tibet 07的血凝素蛋白,并对其抗原性进行鉴定。扩增小反刍兽疫病毒Tibet 07株H基因,克隆至p Fast Bac/CT-TOPO载体中,构建重组穿梭质粒p Fast Bac-PPRV-H,转化感受态大肠杆菌DH10BacTM,构建重组杆状病毒Bacmid-PPRV-H,转染sf9细胞,通过异源基因重组获得杆状病毒,通过病毒蚀斑试验检测扩增后病毒滴度。将P3代病毒以0.05MOI感染sf9细胞,通过SDS-PAGE鉴定H蛋白的表达,利用Western blot和间接免疫荧光鉴定H蛋白的抗原性。经过PCR、测序等证明重组杆状病毒Bacmid-PPRV-H构建正确。P2代重组杆状病毒的病毒滴度为1×107。表达的H蛋白在相对分子量约68 k Da处可见特异蛋白条带。感染的sf9细胞可与小反刍兽疫病毒H蛋白的单克隆抗体发生特异性反应。表明Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达了小反刍兽疫病毒西藏分离株Tibet 07的血凝素蛋白,为进一步研究其生物学功能及构建检测ELISA试剂盒奠定了试验基础。展开更多
应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)西藏分离株Tibet07的融合蛋白,并对其抗原性进行鉴定。扩增PPRV Tibet 07株融合蛋白基因,克隆至pFastBac/CT-TOPO载体中,构建重组穿梭质粒pFa...应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)西藏分离株Tibet07的融合蛋白,并对其抗原性进行鉴定。扩增PPRV Tibet 07株融合蛋白基因,克隆至pFastBac/CT-TOPO载体中,构建重组穿梭质粒pFastBacCT-PPRV-F,构建重组杆状病毒Bacmid-PPRV-F,转染sf9细胞,获得重组杆状病毒。通过SDS-PAGE鉴定F蛋白的表达,利用Western blotting和间接免疫荧光鉴定F蛋白的抗原性。表达的F蛋白在分子质量约59ku处可见特异蛋白条带。重组杆状病毒Bacmid-PPRV-F感染的sf9细胞可与抗PPRV阳性血清发生特异性反应。使用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达了PPRV西藏分离株Tibet 07的融合蛋白,为进一步研究其生物学功能及研制小反刍兽疫的亚单位疫苗奠定了基础。展开更多
文摘应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小反刍兽疫病毒西藏分离株Tibet 07的血凝素蛋白,并对其抗原性进行鉴定。扩增小反刍兽疫病毒Tibet 07株H基因,克隆至p Fast Bac/CT-TOPO载体中,构建重组穿梭质粒p Fast Bac-PPRV-H,转化感受态大肠杆菌DH10BacTM,构建重组杆状病毒Bacmid-PPRV-H,转染sf9细胞,通过异源基因重组获得杆状病毒,通过病毒蚀斑试验检测扩增后病毒滴度。将P3代病毒以0.05MOI感染sf9细胞,通过SDS-PAGE鉴定H蛋白的表达,利用Western blot和间接免疫荧光鉴定H蛋白的抗原性。经过PCR、测序等证明重组杆状病毒Bacmid-PPRV-H构建正确。P2代重组杆状病毒的病毒滴度为1×107。表达的H蛋白在相对分子量约68 k Da处可见特异蛋白条带。感染的sf9细胞可与小反刍兽疫病毒H蛋白的单克隆抗体发生特异性反应。表明Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达了小反刍兽疫病毒西藏分离株Tibet 07的血凝素蛋白,为进一步研究其生物学功能及构建检测ELISA试剂盒奠定了试验基础。
文摘应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)西藏分离株Tibet07的融合蛋白,并对其抗原性进行鉴定。扩增PPRV Tibet 07株融合蛋白基因,克隆至pFastBac/CT-TOPO载体中,构建重组穿梭质粒pFastBacCT-PPRV-F,构建重组杆状病毒Bacmid-PPRV-F,转染sf9细胞,获得重组杆状病毒。通过SDS-PAGE鉴定F蛋白的表达,利用Western blotting和间接免疫荧光鉴定F蛋白的抗原性。表达的F蛋白在分子质量约59ku处可见特异蛋白条带。重组杆状病毒Bacmid-PPRV-F感染的sf9细胞可与抗PPRV阳性血清发生特异性反应。使用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达了PPRV西藏分离株Tibet 07的融合蛋白,为进一步研究其生物学功能及研制小反刍兽疫的亚单位疫苗奠定了基础。