重组原核表达载体pQE-30-luxS的构建与表达

构建原核表达载体pQE-30-luxS,并在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白。以植物乳杆菌KLDS1.0391的基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增luxS基因,同时克隆到pMD18-T simple中,经鉴定正确后与表达载体pQE-30连接,将重组质粒pQE-30-luxS转化到E.coli M15中,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE鉴定。结果表明原核表达载体pQE-30-luxS构建成功,测序证实插入的目的片段与已知luxS基因序列一致,且LuxS蛋白在大肠杆菌中成功表达。该结果为体外合成信号分子AI-2奠定了基础。

复方甘草酸苷片治疗早产儿胃肠外营养相关性胆汁淤积的临床疗效观察

目的:观察复方甘草酸苷治疗早产儿胃肠外营养相关性胆汁淤积(PNCA)的疗效及不良反应。方法:62例PNCA早产儿按随机数字表法分为治疗组与对照组,每组各31例。均给予相同的基础支持治疗,治疗组在此基础上给予复方甘草酸苷片12.5 mg/次,口服(冲服),2次/d,2周为1个疗程,连续治疗2个疗程。比较两组患儿治疗2、4周后血清总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)与总胆汁酸(TBA)水平,并计算总有效率、观察不良反应的发生情况。结果:复方甘草酸苷治疗后2、4周后TBIL、DBIL、ALT和TBA水平与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);两组总有效率分别为93.5%、83.9%,比较差异均有统计学意义(P<0.05);两组均未出现严重不良反应。结论:复方甘草酸苷治疗早产儿PNCA疗效较好,且无严重不良反应。

促红细胞生成素对新型支气管肺发育不良早产鼠模型TGF-β1表达的影响

目的观察重组人促红细胞生成素(rh EPO)对新型支气管肺发育不良(BPD)早产鼠模型肺组织病理变化及转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法 40只定期受孕SD大鼠于孕第15天孕囊内注射脂多糖(LPS)或磷酸盐缓冲液(PBS),孕第21天剖宫娩出早产鼠,早产鼠于生后6 h内分为5组:PBS+空气组、PBS+高氧组、LPS+高氧组、PBS+高氧+rh EPO组、LPS+高氧+rh EPO组。PBS+高氧+rh EPO组、LPS+高氧+rh EPO组于高氧暴露6 h后开始第1次背部皮下注射rh EPO 1 200 IU/kg,隔天1次,共7次。分别在高氧暴露第1、7、14天处死早产鼠,观察肺组织病理变化及辐射状肺泡计数(RAC),采用ELISA法检测肺泡灌洗液(BALF)及肺组织TGF-β1的表达量。结果与PBS+空气组比较,经高氧干预后其病理损伤加重、RAC降低、BALF及肺组织TGF-β1表达量升高(P<0.01),并且以LPS+高氧组更显著(P<0.05,P<0.01),上述指标在高氧暴露后第14天与第7和(或)第1天差异有统计学意义(P<0.05);rh EPO干预后与相应对照组比较上述指标得到相应改善(P<0.05,P<0.01);BALF中TGF-β1水平与RAC呈高度负相关,与肺组织TGF-β1水平呈高度正相关(P<0.05或P<0.01)。结论 rh EPO可能通过参与调解TGF-β1相关通路,改善BPD模型大鼠肺组织损伤,从而对BPD起到一定的干预和治疗作用。

群体感应系统在乳酸菌产细菌素中的作用

许多乳酸菌能够产生抗菌活性肽——细菌素,细菌素具有不同的结构、作用方式、抑菌谱和效价,通常认为乳酸菌和其所产的细菌素都是安全的,乳酸菌所产细菌素作为天然食品防腐剂已显示了巨大的潜能。基于群体感应的细胞间交流已成为细菌素合成的关键调控机制,群体感应作为细胞密度函数,可使细菌素产生保持同步性。群体感应需通过信号分子介导感知菌体密度,信号分子随着菌体密度增加而增加,并激活信号转导级联使菌体产生细菌素。本文通过对乳酸菌群体感应信号分子种类、信号转导机制及群体感应系统对两类细菌素合成的调控进行综述,以初步了解群体感应系统在乳酸菌产细菌素过程中的作用机制。

银杏黄酮对非酒精性脂肪肝小鼠肝脏Toll样受体-4和核因子-κB表达的影响

目的:观察银杏黄酮对非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型小鼠肝脏Toll样受体-4(TLR4)和核因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法:120只昆明小鼠随机分为对照组、模型组和银杏黄酮高、中、低剂量组。采用高脂饲料构建NAFLD小鼠动物模型,于给药后8周末处死,观察肝脏病理变化,计算肝指数,检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、甘油三酯(TG)以及肝组织NF-κB和TLR4的表达。结果:银杏黄酮组小鼠肝指数和血清TG、TNF-α、IL-6水平及肝组织NF-κBp65的表达量比模型组显著降低,肝脏脂肪变性明显减轻,但肝组织TLR4表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TLR4/NF-κB炎症通路与NAFLD的发病有关,银杏黄酮可改善肝组织病理变化,起到抗炎降脂作用,从而对NAFLD起到一定的治疗作用,但对TLR4影响并不明显。

青蒿琥酯对非酒精性脂肪肝小鼠肝脏TLR4及MyD88表达的影响

目的观察青蒿琥酯对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)小鼠肝脏Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(My D88)和磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)表达的影响。方法 70只昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组、青蒿琥酯高[60 mg/(kg·d)]、中[30 mg/(kg·d)]、低[15 mg/(kg·d)]剂量组。采用高脂饲料构建NAFLD小鼠动物模型,于给药后12周末处死,观察肝脏病理变化,酶法检测血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,RT-PCR法检测肝组织TLR4、My D88、PI3K mRNA表达。结果各青蒿琥酯剂量组小鼠血清TG、TC和ALT水平比模型组显著降低,肝脏脂肪变性明显减轻,肝组织TLR4、My D88及PI3K表达量也显著降低(P<0.01,P<0.05)。与正常对照组相比,模型组肝组织TLR4、My D88及PI3K表达量显著升高(P<0.01),且三者有相同的变化趋势。结论 TLR4/My D88及其下游PI3K/AKT通路可能在NAFLD发病中起重要作用。青蒿琥酯可通过降低TLR4、My D88、PI3K mRNA表达,减轻NAFLD小鼠肝脏脂肪变性程度,降低血脂,改善肝功能指标。

重组人促红细胞生成素对高氧肺损伤新生大鼠细胞凋亡及蛋白激酶B表达的影响

目的支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)是新生儿呼吸系统常见疾病,文中探讨rhEPO对高氧肺损伤新生大鼠肺细胞凋亡和蛋白激酶B(又称Akt)表达的影响,为BPD的防治提供实验依据。方法将新生大鼠给予60%高氧暴露,rhEPO组皮下注射rhEPO,采用TUNEL法检测肺细胞凋亡和RT-PCR法检测Akt mRNA表达水平。结果①高氧组新生大鼠肺细胞凋亡指数为44.312±12.337,明显高于空气组的12.810±4.353(P<0.01);rhEPO组凋亡指数为23.371±9.508,明显低于高氧组(P<0.01)。②高氧组肺组织Akt mRNA表达水平为0.462±0.122,明显低于空气组的1.236±0.357(P<0.01);rhEPO组肺组织Akt mRNA表达水平为0.893±0.235,明显高于高氧组(P<0.01)。结论高氧可引起新生大鼠肺细胞凋亡增多,rhEPO可明显减少肺细胞凋亡,其机制可能与肺组织Akt mRNA表达有关。

银杏黄酮对非酒精性脂肪肝模型小鼠的作用及NF-κB在其机制中的相关性分析

本文观察银杏黄酮对非酒精性脂肪性肝(NAFLD)模型小鼠的作用,并分析NF-κB与小鼠肝脏脂肪变性及血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)的相关性。170只昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组、银杏黄酮高[300mg/(kg·d)]、中[150 mg/(kg·d)]、低[75 mg/(kg·d)]剂量组。采用高脂饲料构建非酒精性脂肪肝小鼠动物模型,分别于给药后4周、8周和12周末处死,观察肝脏病理变化,计算肝指数,检测血清总胆固醇(TC)、ALT、TNF-α以及肝组织NF-κB的表达。各剂量银杏黄酮组小鼠肝指数,血清TC、ALT和TNF-α水平,肝组织NF-κBp65的表达量比模型组显著降低,肝脏脂肪变性明显减轻(P<0.05或P<0.01);肝组织NF-κBp65相对表达量与肝脏脂肪变性程度及血清ALT含量呈正相关(r>0、P<0.01或P<0.05)。实验结果表明:银杏黄酮可降低NAFLD小鼠血脂、减轻肝脏脂肪变性、改善肝功能指标及肝脏大体形态,且有一定的剂量和时间依赖性;NF-κB上游炎症通路可能是其作用的主要机制。

羟基积雪草苷舒血管作用的选择性作用特点研究

目的:探讨羟基积雪草苷(madecassoside,MC)对血管平滑肌的选择性作用特点。方法:分离大鼠胸主动脉和尾动脉以及回肠和膀胱平滑肌条,采用张力换能器及生物信号采集处理系统测定平滑肌张力变化;应用小肠推进实验考察对小肠蠕动的影响。结果:MC对去甲肾上腺素(NE)引起的胸主动脉和尾动脉收缩均有抑制作用,但对尾动脉作用更明显;同法,MC对高血压大鼠胸主动脉的作用明显比正常大鼠胸主动脉强;其它部位平滑肌中:无论是自发性收缩还是有激动剂存在的条件下,各剂量MC对离体回肠及膀胱平滑肌的收缩均无明显影响;在小肠推进实验中,MC对小肠推进率无显著作用。结论:MC具有舒张血管活性,且对血管平滑肌具有较好的选择性;对周围小动脉的作用明显强于中央动脉;对高血压大鼠动脉的舒张作用比正常大鼠更明显。

重组人促红细胞生成素对宫内炎性暴露和高氧肺损伤新生大鼠细胞凋亡及PI3K表达的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)对宫内炎性暴露和高氧肺损伤新生大鼠肺细胞凋亡和磷酯酰肌醇-3激酶(PI3K)表达的影响。方法受孕SD大鼠分别于孕第15天孕囊注射脂多糖(LPS)或磷酸盐缓冲液(PBS);新生大鼠生后24 h内分组,给予60%高氧暴露;rhEPO干预组在高氧暴露第1天起,隔天皮下注射rhEPO(1 200 IU/kg)共7次;在高氧暴露的第1、7、14天处死新生大鼠;采用TUNEL法检测肺细胞凋亡,RT-PCR法检测PI3K mRNA表达。结果 LPS和生后高氧暴露均可引起新生大鼠肺细胞凋亡指数增高,肺组织PI3K mRNA表达降低,第7、14天时各组间的差异有统计学意义(P均<0.05);rhEPO干预可明显减少肺细胞凋亡,提高肺组织PI3K mRNA表达,第7、14天时相应各组的差异有统计学意义(P均<0.05)。结论宫内炎性暴露和高氧可引起新生大鼠肺细胞凋亡增多,rhEPO可明显减少肺细胞凋亡,其机制可能与肺组织PI3K mRNA表达有关。

羟基积雪草苷对离体动脉条的舒张作用及其机制

目的探讨羟基积雪草苷(madecassoside,MC)的舒张血管作用及其机制。方法采用离体大鼠胸主动脉张力实验观察MC的舒张血管作用。结果MC使去甲肾上腺素(NE)和氯化钾(KC l)收缩动脉条的量效曲线右移,最大收缩力降低;并对NE诱导的细胞内Ca2+释放所引起的收缩有明显的抑制作用;但去除血管内皮细胞后MC反而使动脉条收缩进一步增强;在有一氧化氮合酶(NOS)抑制剂存在的情况下,其抑制NE收缩的效应消失;对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)收缩动脉条的量效曲线无明显影响。结论MC有明显的舒张血管作用,表现为钙拮抗活性,以抑制细胞内Ca2+释放为主;且通过内皮细胞发挥作用,并与一氧化氮(NO)合成通路有密切的关系。

部分乳酸菌对植物乳杆菌KLDS1.0391细菌素合成的诱导作用

植物乳杆菌KLDS1.0391与76株乳酸菌分别共培养后,测定培养物的抑菌活性和活菌数,判断与乳酸菌共培养对植物乳杆菌细菌素合成的影响及细菌素合成与菌体密度的关系。结果表明:植物乳杆菌KLDS1.0706、KLDS4.0315、KLDS4.0351、罗伊氏乳杆菌KLDS1.0736这4株菌与植物乳杆菌KLDS1.0391共培养后,抑菌活性显著增加(P<0.01)。与罗伊氏乳杆菌共培养过程中细菌素的抑菌活性与植物乳杆菌KLDS1.0391的细胞密度呈现明显的正相关性,并且发现只有活的诱导菌与植物乳杆菌KLDS1.0391共培养才能够诱导细菌素的合成。

葛根素对缺氧缺血性脑病新生大鼠脑细胞凋亡及Bim蛋白表达的影响

目的观察葛根素对缺氧缺血性脑病(HIE)新生大鼠脑细胞凋亡及Bim蛋白表达的影响。方法7日龄Wistar大鼠随机分成假手术组、HIE模型组、葛根素治疗组,每组22只,参照Rice法制作HIE模型,应用Western-blot和流式细胞术在不同时间点分别检测大脑皮质Bim蛋白的表达和细胞凋亡情况。结果HIE模型组和葛根素治疗组脑细胞Bim蛋白表达灰度值在12 h分别为137.00±5.00和78.20±4.38,24 h分别为164.40±5.50和90.40±3.36,均显著高于假手术组(29.60±3.20和30.00±3.74),葛根素治疗组Bim蛋白表达低于HIE模型组。HIE模型组和葛根素治疗组脑皮质早期凋亡细胞比例在12 h分别为(16.2±1.86)%和(8.54±1.91)%,24 h分别为(20.03±2.02)%和(13.36±1.64)%,均显著高于假手术组((0.76±0.09)%和(1.34±0.24)%),葛根素治疗组细胞凋亡低于HIE模型组。结论葛根素能抑制HIE新生大鼠脑细胞凋亡启动因子Bim蛋白表达,具有抗脑细胞凋亡作用。

肠三叶因子对坏死性小肠结肠炎新生鼠肠组织中P-ATK及P-BAD的影响及意义

目的观察肠三叶因子(ITF)对新生鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)模型磷酸化丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)及磷酸化BAD(p-BAD)蛋白水平的影响,探讨ITF对NEC的保护作用。方法新生鼠50只,随机分为5组,每组10只。建立NEC模型,A组腹腔注射生理盐水0.2 ml;B组腹腔注射ITF 0.2 mg;C组腹腔内注射渥漫青霉素0.1 mg/kg;D组腹腔内注射ITF 0.2 mg+渥漫青霉素0.1 mg/kg;E组为正常对照组。实验第4天断头处死大鼠,取近回盲部肠道组织做病理学检查,分别采用免疫组化方法及免疫印迹法检测肠组织中p-AKT及p-BAD蛋白表达水平。结果 5组肠组织中p-AKT及p-BAD蛋白表达水平比较,差异有统计学意义(P均<0.05),B组p-AKT、p-BAD蛋白表达水平高于其他4组(P均<0.05),A组高于E组(P均<0.05),C组p-AKT最低(P<0.05)。各组大鼠肠损伤病理评分比较,差异有统计学意义(P<0.05),A、C、D组肠损伤病理评分高于B组(P<0.05)。结论 ITF可减轻新生鼠NEC的肠道炎症反应,其机制可能是使AKT活化为p-AKT,其作用于下游靶点p-BAD,抑制BAD的促凋亡作用。

IL-8在新生儿呼吸机相关肺炎中的浓度变化

目的：检测新生儿呼吸机相关性肺炎患者血清及气道灌洗液IL-8的水平,探讨IL-8在该病中的临床意义.方法：将接受机械通气的患儿20例中发生呼吸机相关肺炎（VAP）患儿8例为VAP组,未发生VAP 12例为non-VAP组,分别在气管插管后1h、48 h、72～96 h采集气道灌洗液及静脉血,用ELISA法检测IL-8.结果：VAP组与non-VAP组比较,灌洗液和静脉血中的IL-8的水平在第1个时间点和第2个时间点没有统计学差异,第3个时间点,VAP组IL-8的水平较non-VAP组明显增高,与前两个时间点比也明显增高.结论：IL-8在呼吸机相关肺炎患儿的血液及呼吸道灌洗液中浓度增高,可以作为呼吸机相关肺炎早期诊断的一个生物学标记物.

振幅整合脑电图在足月新生儿病理性黄疸诊断中的应用

目的:探讨振幅整合脑电图(aEEG)在足月新生儿病理性黄疸诊断中的应用价值。方法:选取2015年2月至2017年12月本院新生儿科住院的足月新生儿病理性黄疸患儿170例为研究对象,根据患儿住院期间所测最高血清总胆红素水平分为3组:A组(n=60)血清总胆红素229~280μmol/L,B组(n=60)血清总胆红素280~342μmol/L,C组(n=50)血清总胆红素>342μmol/L。所有患儿入院时均进行aEEG及脑干听觉诱发电位(BAEP)检查,采用秩相关分析aEEG与BAEP V波反应阈的相关性。结果:aEEG检测显示,170例患儿中aEEG正常132例(77.6%)、异常38例(22.4%)。A组aEEG异常6例(10.0%),均为轻度异常; B组aEEG异常8例(13.3%),均为轻度异常; C组aEEG异常24例(48.0%),包括重度异常3例、轻度异常21例。3组患儿aEEG异常率组间比较,差异具有统计学意义(χ2=34. 74,P<0.05)。BAEP检查显示,170例患儿中BAEP正常86例(50.6%)、异常84例(49.4%)。A组BAEP异常21例(35.0%),B组BAEP异常31例(51.7%),C组BAEP异常32例(64.0%)。3组患儿BAEP异常率组间比较,差异具有统计学意义(χ2=9.346,P<0.05)。相关性分析显示,aEEG与BAEP V波反应阈呈正相关(rs=0.456,P=0.003)。结论:病理性黄疸患儿早期进行aEEG与BAEP检测,有助于及时发现可能出现的脑损伤。

pfs基因原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化

以植物乳杆菌KLDS1.0391的基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增得到pfs基因,与Gen Bank中的序列对比发现同源性为99%。将目的基因与表达载体p QE-30连接,并将重组质粒p QE-30-pfs转化到E.coli M15中。异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白,经SDS-PAGE分析,在全菌体蛋白中含有一条明显的特异性蛋白条带,大小约为27.4ku。经Ni-NTA纯化系统纯化后,在SDS-PAGE凝胶电泳图上获得纯化产物的条带。结果表明,原核表达载体p QE-30-pfs构建成功,且Pfs蛋白在大肠杆菌中成功表达,采用Ni-NTA纯化系统成功纯化了重组蛋白Pfs,为体外合成AI-2(Autoinducer-2)奠定了基础。

利福霉素B的选育及其发酵的研究

目的:寻找新的菌种提高利福霉素B的发酵水平。方法:对菌株 AmediterraneiXCl—02进行筛选、诱变,获得新的菌株。结果:获得高产菌株 AmediterraneiXC9—25,生产能力较原始出发菌株 AmediterraneiXCl—02提高1.385倍,效价达到10000u/ml。结论:通过工业方法产生菌株,并对其进行筛选变种是提高利福霉素 B

SOX9及WNT信号通路分子在高氧暴露致早产大鼠肺损伤中的表达及意义

目的观察SOX9及WNT信号通路分子在高氧暴露早产鼠肺组织中的表达,探讨高氧暴露早产大鼠肺组织损伤的发病机制。方法将72只1日龄早产SD大鼠随机均分为高氧组和空气组,每组36只,各组再随机均分为生后3 d组、5 d组、9 d组,每组12只。高氧组早产鼠置于氧体积分数为95%的氧箱中。各组分别在相应的时间处死动物后收集肺组织标本。采用苏木精-伊红(HE)染色法观察肺组织的病理改变,采用RT-PCR及Western blot法检测SOX 9及WNT信号通路中关键因子β-连环蛋白(β-catenin)及下游因子淋巴增强因子(LEF-1)、肺泡表面活性蛋白C(SPC)、α-平滑肌激动蛋白(α-SMA)在早产大鼠肺组织中的mRNA和蛋白表达水平。结果空气各组肺组织结构基本正常,高氧3d组肺组织见明显渗出、大量炎症细胞浸润、出血性改变及肺泡压缩,高氧5 d组和9 d组可见肺间隔增宽及肺泡结构紊乱。与空气组比,高氧组β-catenin、LEF-1、SPC及α-SMA mRNA及蛋白表达均增加(P<0.05),且随着高氧暴露天数的增加而增加;SOX9因子在高氧暴露3 d和5 d时mRNA和蛋白表达均高于空气组(P<0.01),且高氧暴露3 d组核酸2017-12-14接收及蛋白表达量高于高氧暴露5 d组,高氧暴露9 d时与空气组无明显变化(P>0.05),且表达量低于高氧5 d组。结论高氧暴露通过激活WNT信号通路致早产大鼠肺组织损伤;SOX 9基因在高氧暴露早产大鼠肺组织中可能通过抑制WNT信号通路来参与高氧肺损伤。

角接触球轴承保持架注塑模设计

在分析角接触球轴承保持架的结构特点和注塑成型工艺的基础上,着重研究了注塑模具中分型面选取及其成型零件的结构设计等技术难点,提出了易于制造并能满足成型精度要求的组合式凸模、凹模结构设计方案,最后给出了一套完整的塑料保持架的注塑模结构,模具结构简单、可靠。