转HCY-2基因对鸡胚神经管发育的影响

为探讨新基因ＨＣＹ－２与神经管畸形表型的关系及明确其是否具有基因毒性作用，应用脂质体介导基因转移技术将构建的含有全长ＨＣＹ－２ ｃＤＮＡ（２０１４ｂｐ）的真核表达载体转入新生鸡受精卵，培养３．５天后观察其对神经管闭合时期胚胎的整体分子生物学效应，利用Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹和免疫组化等技术研究在整体环境下ＨＣＹ－２蛋白的表达和分布情况。结果显示转ＨＣＹ－２基因（５～２０μｇ）可诱导早期鸡胚发生神经管畸变，而空载质粒组胚胎发育正常；Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹和免疫组化分析发现有ＨＣＹ－２蛋白大量表达，主要分布于胚脑组织中，显著高于空载质粒对照组；透射电镜观察发现转ＨＣＹ－２基因后，胚脑细胞超微结构受损和出现呈弥散分布的凋亡细胞。结论是ＨＣＹ－２基因对神经管闭合时期的胚胎神经系统发育具有明显基因毒性作用。

烹调油烟冷凝物对小鼠胚胎发育毒性的体外实验研究

目的 观察烹调油烟冷凝物 (CookingOilFumeCondensates,COFC)的体外发育毒性并探讨其可能的毒性作用机制。方法 采用体外全胚胎培养模型 ,将植入后 8 5d龄昆明种小鼠胚胎在大鼠即刻离心血清培养基中培养 48h(COFC染毒浓度分别为 0、2 0、40、80、160、3 2 0mg/L) ,观察COFC对小鼠胚胎生长发育和组织器官形态分化的影响。结果 COFC在≥ 80mg/L以上剂量时能抑制胚胎生长发育和形态分化 ,诱发卵黄囊生长和血管分化不良 ,发育异常率增高 ;高浓度组能诱发多种畸形 ,主要为神经系统 ,心脏、肢芽等器官系统畸形。结论 体外实验条件下 。

定位转HCY-2基因诱发鸡胚神经管畸形的时间-效应关系研究

本文旨在研究定位转新基因（ＨＣＹ－２）与神经管畸形发生的时间－效应关系及可能的作用机理。采用脂质体介导基因转移技术将已构建的含有全长ＨＣＹ－２ｃＤＮＡ的真核表达载体定位转入不同发育时期的鸡胚（Ｈａｍｂｕｒｇｅｒ－Ｈａｍｉｌｔｏｎ１、６和１２期），培养后再用ＲＴ－ＰＣＲ、免疫组化、扫描和透射电镜及光镜等技术探讨ＨＣＹ－２基因在４天龄鸡胚中的表达、分布和致畸作用。结果在３个不同时期定位导入ＨＣＹ－２基因后，均可诱导胚胎发生神经管畸形，以１天龄头侧微注射的胚胎最为敏感，神经管畸形发生率高达３５．３％，呈明显时间－效应关系，其表现型是：脑膨出、无脑、脊柱裂和小头。转基因组胚胎能够表达ＨＣＹ－２ｍＲＮＡ和相应编码蛋白，主要分布于胚胎脑组织中。扫描和透射电镜下发现ＨＣＹ－２基因能损伤细胞表面和内部的超微结构；在畸形部位还观察到大量的凋亡细胞。结论是，ＨＹＣ－２基因可能是一种新的基因毒性因子，它在胚胎早期神经管畸形发生机制中起重要作用。

同型半胱氨酸对大鼠胚胎中脑细胞增殖和分化的影响

为深入揭示同型半胱氨酸(hom ocysteine,HCY)的致畸性及作用机理,应用大鼠胚胎中脑细胞微团培养法探讨了HCY(0～10m m ol/L)对胚胎中脑细胞增殖和分化的影响。结果显示:随着剂量的增加,HCY对胚胎中脑细胞分化具有促进和抑制双相作用,半数抑制分化浓度(IC50 )为4.3m m ol/L,当加入肝微粒体S9时,IC50减至2.3m m ol/L;在实验剂量范围内,HCY对中脑细胞增殖无明显抑制作用。上述结果说明HCY 对大鼠胚胎中脑细胞分化的影响明显高于对细胞增殖的影响。

植入后全胚胎培养的培养基pH值改变对大鼠胚胎生长发育的影响

目的 探讨植入后全胚胎培养培养基最适pH值。方法 分离 9.5天龄Wistar大鼠胚胎 ,分别在实验组 (即不同pH :5 .5 ,6 .0 ,6 .5 ,7.0 ,7.5 ,8.0 ,8.5 ,9.0 )和对照组 (pH为 8.2 )的培养基 (1 0 0 %大鼠即刻离心血清 )中体外旋转培养4 8小时 ,观察pH值的改变对胚胎生长发育的影响。结果 与对照组比较 ,当培养基pH为 6 .5、6 .0和 9.0时培养胚胎的生长发育明显受到影响 (P <0 .0 5 ) ,胚胎畸形率和死亡率增高 (P <0 .0 5 )。当培养基pH为 5 .5时 ,培养胚胎死亡率达1 0 0 %。结论 全胚胎培养培养基pH条件改变 (过低或过高 )能够影响培养胚胎的生长发育。植入后全胚胎培养培养基最适pH值为 7.5～ 8.2。

同型半胱氨酸对大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响

目的 进一步研究同型半胱氨酸(HCY)的致畸性及作用机制。方法 应用大鼠胚胎胚芽细胞微团培养法了解HCY对胚胎胚芽细胞增殖和分化的影响。结果 随着剂量的增加,HCY表现了对胚胎肢芽细胞的促进和抑制双相作用。半数抑制分化浓度(IC_(50))是5.0mmol/L,当加入S9时,IC_(50)减至3.5mmol/L;半数抑制增殖浓度是9.5mol/L,当加入S9时,IC_(50)为5.8mmol/L。结论 HCY对胚胎细胞分化的影响更为显著,对大鼠致畸作用不明显。

同型半胱氨酸体内外诱导鼠胚胎心肌细胞凋亡的研究

目的 探讨同型半胱氨酸(HCY)是否能诱导啮齿类动物胚胎心肌细胞凋亡及剂量与凋亡的关系。 方法 应用大鼠胚胎心肌细胞体外培养及小鼠体内致畸实验,加入4-20 mmol/L的HCY,经荧光显微镜及透射电镜观察细胞凋亡情况。 结果 体外心肌细胞培养中,心肌细胞凋亡的比例随着HCY剂量的增加而增加。培养12 h出现凋亡,14 h达到高峰。小鼠体内致畸实验,给予孕鼠HCY 0.74 mmol/kg,胚胎心肌和脑组织中凋亡细胞明显可见。 结论HCY可以诱导胚胎心肌细胞凋亡,可能是HCY导致胚胎发育异常的机制之一。

同型半胱氨酸对大鼠器官形成早期卵黄囊内吞功能的影响

应用显微解剖和移植术 ,初步建立了 9 5日龄大鼠卵黄囊 (VYS)胎盘体外培养模型 ,并观察了同型半胱氨酸 (HCY)对VYS内吞功能及生长发育的影响。结果显示 :HCY可抑制VYS的内吞功能 ,实验组与对照组相比内吞指数明显下降 (P <0 0 1) ;HCY还可抑制VYS生长及其血管形成 ,实验组的VYS直径明显小于对照组 (P <0 0 1)。结果提示 :VYS对胎盘内吞功能的损伤及对其血管形成分化的抑制作用 ,可能是HCY主要致畸机理之一。

HCY-2基因和同型半胱氨酸与鸡胚先天性心脏畸形发生的关系

目的 探讨新基因HCY 2和同型半胱氨酸与早期先天性心脏畸形发生的关系。方法 应用鸡胚致畸试验观察同型半胱氨酸 (0～ 1 6 μmol/胚胎 )对鸡胚心血管发育的影响 ;采用脂质体介导基因转移法将已构建的含有全长HCY 2cDNA的真核表达载体转入新生鸡卵 ,培养 4d后再用Western杂交和免疫组织化学等方法观察HCY 2基因对早胚心血管发育的致畸作用及其编码产物的表达和分布。结果 HCY对器官形成期的心脏有明显的致畸作用并呈剂量 反应关系 (P <0 .0 5 )。转1 0 μg和 2 0 μgHCY 2基因能诱导鸡胚心血管系统发育异常 ,心脏畸形发生率分别为 1 6 .7%和 2 4.0 % ,主要表现型是心包积液、异位心、心外露和心脏过小。Western杂交显示转 1 0 μg和 2 0 μg基因组胚胎样品有HCY 2蛋白大量表达 ,其分布以胚胎心脏组织为主。HCY 2基因可引起心脏结构紊乱、心内膜垫缺损和抑制心室心房发育 ,并可损害心肌细胞的超微结构。结论 HCY/HCY 2基因可能是一种新的心脏发育毒性因子 ;HCY 2基因的异常表达在心血管畸形发生过程中起重要作用。