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Pim-3慢病毒质粒构建及其表达鉴定
1
作者
赵曼茵
李咏梅
+4 位作者
岳天孚
杜雪
黑凯文
邱依然
杨柏财
《山东医药》
CAS
2014年第2期1-4,共4页
目的构建Pim-3慢病毒质粒,鉴定其在卵巢癌SKOV3细胞中基因及蛋白水平的表达。方法 RT-PCR法提取Pim-3 cDNA,经T-A克隆及双酶切将其与慢病毒表达载体pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP重组;酶切鉴定及基因测序后,将阳性重组质粒导入病毒包装细胞2...
目的构建Pim-3慢病毒质粒,鉴定其在卵巢癌SKOV3细胞中基因及蛋白水平的表达。方法 RT-PCR法提取Pim-3 cDNA,经T-A克隆及双酶切将其与慢病毒表达载体pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP重组;酶切鉴定及基因测序后,将阳性重组质粒导入病毒包装细胞293T中;收集病毒上清液转染SKOV3细胞,荧光显微镜下观察转染情况,应用RT-PCR及Western blot法分别检测Pim-3 mRNA及其蛋白。结果 RT-PCR法获得Pim-3基因,重组质粒酶切后片段大小及基因测序结果显示pCDH/Pim-3重组质粒构建成功。将感染重组质粒及空载体的293T细胞生产的病毒上清分别感染SKOV3细胞,感染重组质粒的SKOV3细胞中Pim-3 mRNA及蛋白表达水平均高于空载体细胞。结论成功构建了pCDH/Pim-3重组慢病毒质粒,建立了Pim-3高表达SKOV3瞬转细胞模型,为探讨Pim-3在卵巢癌发生、发展中的作用及机制奠定实验基础。
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关键词
卵巢癌
PIM-3
丝
苏氨酸激酶
慢病毒载体
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职称材料
VEGF-C诱导宫颈癌Hela细胞Bcl-2、cyclinD1的表达
被引量:
7
2
作者
魏璇
杜雪
+4 位作者
李咏梅
赵曼茵
马雪梅
杜秀英
张一兵
《实用预防医学》
CAS
2014年第2期135-139,共5页
目的研究VEGF-C对体外培养的宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的分子机制。方法应用重组人VEGF-C蛋白体外刺激宫颈癌Hela细胞,MTT法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞周期和凋亡、Western Blotting检测增殖凋亡相关基因Bcl-2、cyclin D1蛋白水...
目的研究VEGF-C对体外培养的宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的分子机制。方法应用重组人VEGF-C蛋白体外刺激宫颈癌Hela细胞,MTT法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞周期和凋亡、Western Blotting检测增殖凋亡相关基因Bcl-2、cyclin D1蛋白水平的变化。结果 10、20、50 ng/μl VEGF-C处理后,细胞增殖指数分别为(1.00±0.03)、(1.25±0.05)、(1.55±0.08)、(2.13±0.08),呈剂量依赖性升高(P<0.05)。细胞周期S期比率呈剂量依赖性升高(P<0.05),分别为(30.91±0.09)%、(37.95±0.27)%、(45.05±0.40)%、(64.26±0.20)%;细胞凋亡率呈剂量依赖性降低(P<0.05),分别为(12.4±0.3)、(11.4±0.2)、(9.6±0.15)、(5.5±0.25)。Bcl-2、cyclin D1蛋白表达呈剂量依赖性升高。结论外源性VEGF-C通过细胞内信号的传递,诱导cyclin D1的表达,使肿瘤细胞S期加快,促进细胞周期的进程,来促进Hela细胞增殖;诱导Bcl-2的表达,抑制凋亡。
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关键词
VEGF-C
宫颈癌增殖凋亡
BCL-2
CYCLIN
D1
原文传递
题名
Pim-3慢病毒质粒构建及其表达鉴定
1
作者
赵曼茵
李咏梅
岳天孚
杜雪
黑凯文
邱依然
杨柏财
机构
天津医科大学总医院
天津医科大学基础医学院
出处
《山东医药》
CAS
2014年第2期1-4,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(81201871)
文摘
目的构建Pim-3慢病毒质粒,鉴定其在卵巢癌SKOV3细胞中基因及蛋白水平的表达。方法 RT-PCR法提取Pim-3 cDNA,经T-A克隆及双酶切将其与慢病毒表达载体pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP重组;酶切鉴定及基因测序后,将阳性重组质粒导入病毒包装细胞293T中;收集病毒上清液转染SKOV3细胞,荧光显微镜下观察转染情况,应用RT-PCR及Western blot法分别检测Pim-3 mRNA及其蛋白。结果 RT-PCR法获得Pim-3基因,重组质粒酶切后片段大小及基因测序结果显示pCDH/Pim-3重组质粒构建成功。将感染重组质粒及空载体的293T细胞生产的病毒上清分别感染SKOV3细胞,感染重组质粒的SKOV3细胞中Pim-3 mRNA及蛋白表达水平均高于空载体细胞。结论成功构建了pCDH/Pim-3重组慢病毒质粒,建立了Pim-3高表达SKOV3瞬转细胞模型,为探讨Pim-3在卵巢癌发生、发展中的作用及机制奠定实验基础。
关键词
卵巢癌
PIM-3
丝
苏氨酸激酶
慢病毒载体
Keywords
ovarian carcinoma
Pim-3
serine-threonine kinase
lentiviral vector
分类号
R737.31 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
VEGF-C诱导宫颈癌Hela细胞Bcl-2、cyclinD1的表达
被引量:
7
2
作者
魏璇
杜雪
李咏梅
赵曼茵
马雪梅
杜秀英
张一兵
机构
唐山市人民医院妇产科
天津医科大学总医院妇产科
天津医科大学微生物学教研室
河北联合大学病理学与病理生理学教研室
出处
《实用预防医学》
CAS
2014年第2期135-139,共5页
基金
国家自然科学基金面上项目(项目编号81201871)
文摘
目的研究VEGF-C对体外培养的宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的分子机制。方法应用重组人VEGF-C蛋白体外刺激宫颈癌Hela细胞,MTT法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞周期和凋亡、Western Blotting检测增殖凋亡相关基因Bcl-2、cyclin D1蛋白水平的变化。结果 10、20、50 ng/μl VEGF-C处理后,细胞增殖指数分别为(1.00±0.03)、(1.25±0.05)、(1.55±0.08)、(2.13±0.08),呈剂量依赖性升高(P<0.05)。细胞周期S期比率呈剂量依赖性升高(P<0.05),分别为(30.91±0.09)%、(37.95±0.27)%、(45.05±0.40)%、(64.26±0.20)%;细胞凋亡率呈剂量依赖性降低(P<0.05),分别为(12.4±0.3)、(11.4±0.2)、(9.6±0.15)、(5.5±0.25)。Bcl-2、cyclin D1蛋白表达呈剂量依赖性升高。结论外源性VEGF-C通过细胞内信号的传递,诱导cyclin D1的表达,使肿瘤细胞S期加快,促进细胞周期的进程,来促进Hela细胞增殖;诱导Bcl-2的表达,抑制凋亡。
关键词
VEGF-C
宫颈癌增殖凋亡
BCL-2
CYCLIN
D1
Keywords
VEGF-C
Cervical cancer cell
Cell proliferation and apoptosis
Bcl- 2
Cyclin D1
分类号
R737.33 [医药卫生—肿瘤]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Pim-3慢病毒质粒构建及其表达鉴定
赵曼茵
李咏梅
岳天孚
杜雪
黑凯文
邱依然
杨柏财
《山东医药》
CAS
2014
0
下载PDF
职称材料
2
VEGF-C诱导宫颈癌Hela细胞Bcl-2、cyclinD1的表达
魏璇
杜雪
李咏梅
赵曼茵
马雪梅
杜秀英
张一兵
《实用预防医学》
CAS
2014
7
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