永冻土地区管道设计原则

在中国境内的俄-中输油管道,首站设在满洲里市,沿线要经过海拉尔、牙克石等有冻土区的地域,在嵯岗大兴安岭山地以西有岛状多年冻土,在这样的地质条件下进行管道敷设,工艺上的复杂性及技术上的难度都是前所未有的,本文将从永冻土地区管道设计的角度,对高寒永冻地区的管道敷设工艺进行说明.

山茱萸总甙对大鼠角膜移植排斥反应免疫抑制作用机制研究

目的观察山茱萸总甙对大鼠角膜移植模型细胞免疫功能影响,并通过观察外周血淋巴细胞活化状态以期进一步阐明山茱萸总甙的免疫抑制机制。方法建立封闭群大鼠SD-Wistar组间同种异体穿透性角膜移植模型,观察脾淋巴细胞对丝裂原刀豆蛋白A(ConA)刺激的增殖反应和单向混合淋巴细胞反应;采用双标法流式分析技术(PE标记CD4单抗及FITC标记的CD8、CD25单抗),观察角膜移植术后不同时间外周血淋巴细胞表型变化,并计算CD4/CD8比值。结果①山茱萸总甙可以明显抑制同种异体穿透性角膜移植大鼠T淋巴细胞的增殖反应和单向混合淋巴细胞反应。②外周血淋巴细胞表型改变主要结果如下空白对照组大鼠外周血CD4、CD8的表达及CD4/CD8比值在术后各时点其差别无显著。但术后表达CD25的CD4阳性细胞明显升高。治疗组CD4/CD8比值则下降,术后表达CD25的CD4阳性细胞明显低于对照组。结论抑制T淋巴细胞的增殖、混合淋巴细胞反应、T淋巴细胞活化表达CD分子,IL-2受体的表达,可能是山茱萸总甙抑制机体细胞免疫功能的主要机制之一。

碱性成纤维细胞生长因子胶原罩对兔角膜穿透伤的影响

目的 :尝试一种新的用药方式———应用浸泡有碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)的胶原罩治疗兔角膜穿透伤。方法 :实验兔 30只 ,随机分为 3组 ,每组 10只 ,在角膜中心各作一穿透性长 4mm切口。第 1组 :对照组 ;第 2组 :2 μg/mL的bFGF溶液滴眼组 ;第 3组 :bFGF胶原罩治疗组。结果 :测得各组角膜伤口承受压力的极限值有明显差异 (P <0 0 0 0 5 ) ,对照组为 (62 0 0± 8 2 5 )kPa ;bFGF滴眼组为 (10 2 0 0± 13 4 3)kPa ;bFGF胶原罩组为 (135 83± 9 85 )kPa。 3组外伤的修复 :bFGF胶原罩组效果最好 ,bFGF滴眼组次之 ,对照组最差。结论 :3组角膜伤口均为疤痕修复 ,以bFGF胶原罩组最好。

糖尿病早期角膜组织的超微变化

目的 :了解早期糖尿病角膜组织的超微变化 ,探讨糖尿病角膜病变的发病机制。方法 :选取SD雄性大鼠 4 0只 ,随机分为糖尿病组和正常对照组 ,前者以链脲佐菌素诱导成糖尿病模型。分别于 6、8、10、12周取角膜 ,扫描电镜及透射电镜下观察其超微改变。结果 :各个观察时点糖尿病大鼠角膜上皮和内皮细胞水肿 ,胞浆内线粒体增多和肿胀 ,随着病程进度而明显 ;角膜内皮的破坏从周边开始 ,逐渐向中央发展 ;成模后第 10周开始出现基质层胶原纤维排列紊乱 ,部分呈格子状排列 ,有断裂现象。结论 :糖尿病性角膜病变超微结构的改变导致了角膜功能异常 ,这可能与高血糖时物质代谢异常有关。

TGF-β_1对Tenon’s囊成纤维细胞增殖和结缔组织生长因子表达的影响

目的研究转化生长因子β1(TGFβ1)对Tenon’s囊成纤维细胞增殖和诱导表达结缔组织生长因子(CTGF)的影响。方法用MTT法检测不同质量浓度TGFβ1(0、0.1、1、10ng/mL)对Tenon’s囊成纤维细胞增殖的影响;免疫细胞化学染色法检测不同质量浓度TGFβ1(0、0.1、1、10ng/mL)对Tenon’s囊成纤维细胞诱导表达CTGF的影响。结果GFβ1能够剂量依赖性地促进Tenon’s囊成纤维细胞增殖(P<0.05);TGFβ1能够促进CTGF的表达,有随质量浓度的增加而增强的趋势(P<0.05),但1ng/mL和10ng/mLTGFβ1组之间无统计学差异(P>0.05)。结论GFβ1能够促进Tenon’s囊成纤维细胞增殖,并促进其下游介质CTGF的表达,可能是青光眼滤过术后滤过泡瘢痕形成的重要机制。

角膜体外重建异种生物载体材料生物相容性研究

目的 研究异种 (猪 )角膜基质的生物相容性 ,评价其作为角膜体外重建载体的可行性。方法 将新鲜、脱水两种猪角膜基质分别植入新西兰白兔角膜层间 ,定期临床观察植片愈合情况 ,并于术后 2周、1、2、4、8个月取兔角膜进行组织学观察。结果 临床观察 :全部植片存活 ,12只术眼未见角膜水肿混浊、角膜新生血管、排斥反应发生 ,新鲜植片在 2个月左右已透明 ,脱水植片在 6个月后透明。组织学观察 :新鲜植片 4个月时与兔角膜基质相融愈合 ,脱水植片经角膜细胞再分布、胶原纤维改建重塑 ,于 8个月后与兔角膜基质相融愈合 ,2组植片愈合过程中未见有淋巴细胞浸润及新生血管生成。结论 异种 (猪 )角膜基质具有良好的生物相容性 ,是一种理想的角膜体外重建载体材料。

川芎嗪对大鼠缺血再灌注视网膜SOD,MDA和NO水平及细胞凋亡的影响

目的 观察川芎嗪对大鼠视网膜缺血再灌注后视网膜超氧化物歧化酶（ＳＯＤ），丙二醛（ＭＤＡ），一氧化氮（ＮＯ）水平及细胞凋亡的影响。方法 采用大鼠视网膜压力缺血再灌注模型，分光光度法测定ＳＯＤ，ＭＤＡ和ＮＯ，琼脂糖凝胶电泳分析ＤＮＡ断裂。结果 川芎嗪能显著对抗视网膜缺血再灌注后视网膜ＳＯＤ水平的下降及ＭＤＡ和ＮＯ水平的升高；同时能阻断缺血再灌注１２ｈ后细胞ＤＮＡ 凋亡样断裂。结论 川芎嗪可能通过抑制自由基的产生和提高抗氧化能力来对抗大鼠视网膜缺血再灌注诱导的细胞凋亡。

小鼠眼内移植三种B16黑色素瘤细胞系的比较研究

目的 :比较B16F0、B16F1、B16F10 3种黑色素瘤细胞系的细胞移植于该肿瘤细胞系来源的C5 7BL/6小鼠前房内的进展情况。方法 :将此三种黑色素瘤细胞系培养后的活细胞悬液移植于C5 7BL/6小鼠前房内 ,观察并比较其眼球溃破时间、淋巴结和肺的转移及生存期。结果 :F10组移植肿瘤眼眼球溃破时间早于另两组 ,而F0组与F1组间无差异。在鼠前房移植肿瘤细胞后的 18d ,F1组及F10组鼠出现移植肿瘤眼同侧的颈部淋巴结转移 ,而F0组未出现类似情况 ;在鼠前房移植肿瘤细胞后的 2 8d ,3组均出现肺转移。F0组小鼠生存时间长于另两组 ,而F1组与F10组间无差异。结论 :3种黑色素瘤细胞系的细胞移植于小鼠前房内后进展不同 。

层粘连蛋白和表皮生长因子对兔角膜内皮细胞周期的影响

目的 观察层粘连蛋白和表皮生长因子单独及联合应用对兔角膜内皮细胞周期的影响。方法 体外培养角膜内皮细胞分为对照组、层粘连蛋白组、表皮生长因子 (EGF)组和联合应用组 ,倒置显微镜观察各组细胞形态及数目变化 ;计数 0、12、2 4、36h的各组细胞数目并绘制细胞生长曲线 ;流式细胞技术检测各组细胞周期。结果 倒置显微镜观察及细胞生长曲线显示 ,与对照组相比 ,层粘连蛋白组、EGF组和联合应用组细胞数目明显增多 ,其中联合应用组最为显著 ;细胞周期检测结果显示 ,层粘连蛋白组、EGF组和联合应用组G0～G1期细胞比例显著下降 (P <0 .0 5 ) ,G2～M期细胞比例显著提高 (P <0 .0 5 ) ;EGF组和联合应用组S期细胞比例显著提高 (P <0 .0 5 ) ;联合应用组与层粘连蛋白组相比 ,G0～G1期细胞比例显著下降 (P <0 .0 5 )。结论 层粘连蛋白和表皮生长因子单独及联合应用都可明显促进角膜内皮细胞分裂增生 ,且联合应用有协同作用。

糖尿病大鼠泪腺、结膜及角膜组织病理学观察

目的 探讨糖尿病造成的泪腺、角膜、结膜组织损伤。方法 雄性SD大鼠40只。随机分为糖尿病组和对照组,各20只。分别于成模后6、8、10、12周断颈处死大鼠,每组各5只。光镜下观察泪腺、角膜、结膜组织病理学改变。结果 糖尿病组随时间依次表现为泪腺细胞水肿、增生,腺泡及导管萎缩,纤维增生及淋巴细胞浸润,角膜上皮、基质层水肿,结膜杯状细胞减少。结论 糖尿病导致的泪腺、角膜、结膜等眼组织破坏是糖尿病性眼表病变的病理基础。

以异种后弹力膜基质为载体培养角膜内皮细胞的研究

目的 探讨以异种后弹力膜 (DM) /基质为载体培养角膜内皮细胞的可行性 ,为培养内皮细胞的临床移植提供新的方法和供体材料。方法 取厚 10 0 μm的猪角膜后层 ,冻存解冻后置中性蛋白酶 3 7℃孵育 5min ,去除内皮细胞 ,保留DM及薄层基质 ,置纯甘油中脱水保存 6个月 ;使用前复水 ,紫外线二面灭菌 ,制备成载体 ;接种兔角膜内皮细胞于载体的DM面并体外培养 ,行细胞形态、密度、组织学、超微结构的观察。结果 兔内皮细胞在猪DM/基质载体上贴附生长 ,形成紧密连接的单层 ,形态近似六角形分布 ;细胞密度达 ( 3 62 0± 110 2 3 )个 /mm2 ,具有正常兔角膜内皮细胞的超微结构。结论 角膜内皮细胞能够在异种DM/基质载体上良好生长 。

雷公藤多甙和FK506滴眼防治大鼠角膜移植免疫排斥反应的比较

目的:观察雷公藤多甙(tripterygiitotorum,TⅡ)及FK506滴眼液局部应用对大鼠角膜移植免疫排斥反应的影响。方法:建立大鼠角膜移植模型,随机按局部滴用药物分组成A,B,C组,用裂隙灯记录及比较各组移植排斥指数,并比较角膜排斥发生时间。分别于术后15d及30d行常规病理学检查。并通过免疫组化检查CD25,CD5+4在角膜植片基质中的表达。结果:0.3g/LTⅡ及0.5g/LFK506抑制角膜移植免疫排斥反应的效应均有效,两者相比效果无显著性差异。HE染色及免疫组化分析可见15d时各有效组角膜植片厚度基本正常,基质中仅有少量CD25,CD5+4阳性细胞表达、淋巴细胞浸润,新生血管少见。结论:TⅡ与FK506疗效近似。具有抑制高危角膜移植免疫排斥反应发生的临床应用价值。

人羊膜上皮细胞的原代及传代培养

目的建立体外培养人羊膜上皮细胞的方法，观察体外培养的羊膜上皮细胞的生物学特性。方法取足月剖宫产术后羊膜，经胶原酶和胰蛋白酶消化后，获取的羊膜上皮细胞接种于含10％胎牛血清培养基中进行原代和传代培养，探索其合适的培养条件，用倒置显微镜观察培养的人羊膜上皮细胞体外生长的特征。用苏木精-伊红染色、扫描电镜和细胞角蛋白免疫组织化学染色的方法对培养细胞进行形态学观察和鉴定。结果人羊膜上皮细胞可以在体外成功的培养传代，体外可连续传8～10代。体外培养细胞呈多角形，长满后呈上皮细胞特有的铺路石样外观。扫描电镜观察细胞表面有丰富的微绒毛。细胞角蛋白keratin单克隆抗体染色阳性。结论人羊膜上皮细胞在体外可成功进行原代和传代培养，体外培养的人羊膜上皮细胞在一定时间内可维持增殖能力。

山茱萸总甙滴眼液眼内药代动力学及药效学的实验研究

目的 :研制出山茱萸总甙 (COG)滴眼液 ,对该滴眼液的药代动力学进行研究 ,并观察其局部应用对角膜移植免疫排斥反应的影响。方法 :用高效液相色谱法对该滴眼液的药代动力学参数进行研究。建立封闭群大鼠角膜移植模型 ,随机分为 4组 :A组为空白对照组 ,B、C、D组分别为使用质量分数 0 5 %、1%和 2 %COG滴眼液组。用裂隙灯显微镜记录及比较各组角膜排斥反应发生时间。结果 :COG滴眼液在新西兰白兔眼内为一室模型 ,主要药代动力学参数为 :A =4 316 μg/mL ,Ke=2 0 5 6h- 1,Ka=2 5 79h- 1,LagTime =0 198h ,t1/ 2 ,Ka=0 0 2 3h ,t1/ 2 ,Ke=0 2 5 7h ,Tmax=0 986h ,ρmax=1 2 94 μg/mL ,AUC =1 6 0 1μg·h/mL ,其拟合的动力学方程为 ρ(t) =10 6 0 5×Dose×(e- 2 0 56× (t- 0 198) -e- 2 579× (t- 0 198) )。术后各组发生角膜移植排斥时间 ,A组与B、C、D组、B组与C、D组、C组与D组间两两比较均有显著性差异 (P <0 0 1)。其中作用最强的为C组。结论 :COG滴眼液能有效地防治角膜移植免疫排斥反应。COG滴眼液眼内有效峰浓度出现在点药后 0 986h 。

人羊膜上皮细胞的分离、纯化及其生物学特性研究

目的体外分离人羊膜上皮细胞并纯化,对体外培养的人羊膜上皮细胞的生物学特性进行相关研究。方法取足月剖宫产的人羊膜组织,经胰蛋白酶、胶原酶和Dnase酶消化后,采用差异黏附法获得纯度高的羊膜上皮细胞,接种于含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中进行原代和传代培养,用HE染色法对培养细胞进行形态学观察,并采用免疫组化法检测细胞角蛋白CK7、CK8、CK18在体外培养的人羊膜上皮细胞中的表达。结果经不同的消化酶消化和差异黏附法筛选后能获得纯度较高的人羊膜上皮细胞,在体外培养条件下人羊膜上皮细胞呈上皮细胞特有的铺路石样外观,并能连续传代8～10次,细胞角蛋白CK7、CK8、CK18在其胞浆中呈阳性表达。结论人羊膜上皮细胞能在体外成功分离、纯化、培养并增殖,为人羊膜上皮细胞的进一步研究及其在细胞移植和组织工程中的应用奠定了实验基础。

兔和牛角膜上皮、基质及内皮细胞体外培养和增殖的研究

目的:研究兔和牛角膜上皮、基质及内皮细胞等3种细胞体外培养的生物学特性,探索和改进这3种细胞体外培养的方法,为组织工程角膜奠定基础。方法:采用消化法分离培养兔和牛角膜上皮、内皮和基质细胞,观察细胞贴壁生长情况,同时对生长良好的原代细胞进行消化传代,进一步观察传代细胞的形态和生长情况。结果:角膜上皮、内皮和基质细胞均在培养4 8～72h贴壁生长,培养6～9d能形成良好单层,细胞形态典型,进行多次传代后细胞仍维持原有形态和功能,获得的细胞能进行长期培养。结论:为兔和牛角膜上皮、内皮和基质细胞体外培养。

视觉刺激诱导c-Fos在弱视成年大鼠视皮质神经元表达的研究

目的:研究光刺激诱导双眼形觉剥夺性弱视成年大鼠视皮质神经元c-Fos表达情况。方法:缝合14d龄SD大鼠双侧眼睑建立双眼形觉剥夺性弱视模型,无光照弱视组8只,光照弱视组8只。饲养至100d龄时剪开眼睑,光照弱视组暴露于外界光线中0.5h,无光照弱视组不接触光线。取材后对两组视皮质组织进行Nissle染色和c-Fos蛋白免疫组化染色,并对染色结果进行计算机图像分析。结果:光照弱视组视皮质表达c-Fos蛋白阳性神经元显著多于无光照弱视组(P<0.05)。结论:双眼形觉剥夺弱视成年大鼠视皮质内经光刺激诱导c-Fos表达增加,提示已过视觉发育敏感期成年大鼠的视皮质仍存留一定程度的视觉可塑性。

rhTGF-β1及转染TGF-β1基因对兔角膜内皮细胞增殖的影响

目的:探讨不同浓度的重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1)及TGF-β1基因转染对体外培养兔角膜内皮细胞增殖的影响。方法:用MTT法检测不同浓度rhTGF-β1作用下角膜内皮细胞的增殖。用脂质体介导转染方法,将TGF-β1基因转移入培养的兔角膜内皮细胞,HE染色法观察细胞组织形态学变化;ELISA法检测转染细胞培养上清中TGF-β1表达量;流式细胞仪检测细胞生长周期变化;DNA电泳法检测转染细胞凋亡情况。结果:MTT检测示5-20μg/LrhTGF-β1抑制角膜内皮细胞增殖;0.5-1μg/L组对增殖无影响;0.05～0.1μg/L组促进细胞增殖。TGF-β1基因转染细胞形态无明显异常,细胞培养上清中TGF-β1的浓度约为(98±3)ng/L。流式细胞仪检测示,基因转染组S期和G2/M期细胞比例减少、PI值降低,但加入EGF后细胞生长基本正常。DNA电泳检测示基因转染组未见凋亡带。结论:rhTGF-β1对角膜内皮细胞增殖的影响具有剂量依赖性;TGF-β1基因转染影响角膜内皮细胞增殖、但不诱发凋亡,其抑制作用可被外源性EGF拮抗。