LRP1在肺癌细胞中的表达水平及其生物学功能研究

目的:探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白1(low density lipoprotein receptor-related protein 1,LRP1)在肺癌细胞中的表达水平及其生物学意义。方法:常规培养人类肺癌A549细胞,RT-PCR法检测A549细胞中LRP1的mRNA水平。构建针对LRP1的siRNA感染细胞,利用绿色荧光标记载体,通过荧光显微镜观察感染效率,利用RT-PCR检测敲减效率,Western blot检测LRP1表达水平变化。选用A549/LRP1 siRNA细胞系进行功能实验,利用CCK-8实验检测细胞增殖能力的变化,划痕实验检测细胞迁移能力的变化,Transwell侵袭小室实验检测细胞侵袭能力的变化。结果:从定量PCR结果可以看出,A549细胞中,相对于NC组,KD组LRP1基因敲减效率为77.7%,KD组细胞中LRP1的mRNA水平明显低于NC组,差异具有统计学意义(P<0.05);Western blot检测结果显示,KD组LRP1表达水平相对于NC组显著下调。CCK-8检测结果表明相对于NC组,KD组于Day 5的细胞增殖倍数显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。划痕实验结果显示,相比NC组,KD组细胞划痕8小时、24小时迁移率明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示,在侵袭小室内孵育24 h后KD组细胞侵袭转移率明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:LRP1对于肺癌A549细胞的生物学功能起着重要作用。下调LRP1能够抑制A549细胞的增殖、迁移及侵袭能力。对于LRP1分子上下游信号通路研究,在肺癌的诊断与治疗领域有一定的临床参考价值。

红景天对大鼠小肠缺血再灌注损伤的保护作用

目的:利用SD大鼠制备肠缺血再灌注模型,观察红景天对肠缺血再灌注损伤的保护作用及其作用机制。方法:实验于2005-08/2006-05在第四军医大学西京医院胃肠外科实验室完成。雄性SD大鼠30只,体质量200～250g,随机数字表法分为假手术组、缺血再灌注组、红景天处理组,每组10只。红景天液制法参照中药质量标准:取红景天生药102g,加水煎煮2次,第1次1.5h,第2次1h,滤过,滤液合并后加水调至120mL,每只大鼠2mL/d,相当于生药5g/(kg·d)。缺血再灌注模型制备:动物于术前12h禁食,不禁水。以2%盐酸氯胺酮(100mg/kg)腹腔注射麻醉。生理盐水2mL/d,连续灌胃5d后,取正中切口入腹后分离肠系膜上动脉,以无创伤血管夹阻断肠系膜上动脉根部造成小肠完全缺血60min,然后松夹进行再灌注60min。假手术组:生理盐水2mL/d,连续灌胃5d后,只分离肠系膜上动脉,但不作阻断。红景天处理组:红景天按5g/kg生药,溶于2mL水中灌胃给药,连续5d后,分离肠系膜上动脉,夹闭肠系膜上动脉60min后再灌注60min。检测各组大鼠小肠黏膜中肿瘤坏死因子α、白细胞介素-6水平,以及其中的超氧化物歧化酶和丙二醛的含量。结果:30只大鼠均进入结果分析。①缺血再灌注组肿瘤坏死因子α、白细胞介素-6水平均高于假手术组和红景天处理组[肿瘤坏死因子α:(2.57±0.29),(0.32±0.06),(1.06±0.11)μg/L;白细胞介素-6:(965.73±42.01),(122.46±1.74),(385.03±13.50)ng/L,P<0.01]。②缺血再灌注组丙二醛水平高于假手术组和红景天处理组[(0.68±0.11),(0.33±0.10),(0.54±0.12)nmol/g,P<0.01];超氧化物歧化酶水平低于假手术组和红景天处理组[(34.12±5.31),(92.63±3.82),(55.66±5.92)NU/g,P<0.01]。结论:红景天可通过抑制细胞因子表达及清除氧自由基的方式,对肠缺血再灌注损伤起到保护作用。

甘露醇对大鼠小肠移植缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨甘露醇对大鼠小肠移植缺血再灌注(ischemia and reperfusion,I/R)损伤的保护作用及其作用机制.方法:建立大鼠小肠移植I/R损伤模型.雄性SD大鼠随机分为假手术组、I/R组和甘露醇处理组.对I/R损伤后不同时间(0.5,1,1.5 h)的小肠标本进行组织病理学观察并检测小肠组织中超氧化物歧化酶(SOD,U/mgprot)和丙二醛(MDA,nmol/mgprot)的含量.结果:不同时间点I/R组小肠绒毛高度和黏膜厚度低于假手术组(P<0.01)和甘露醇处理组(P<0.05).不同时间点I/R组(16.24±4.56,18.50±2.89.19.42±2.21)MDA水平高于假手术组(10.26±1.72,P<0.01)和甘露醇处理组(11.24±1.51,14.03±3.12,16.06±3.62;P<0.05);而SOD水平低于假手术组和甘露醇处理组(398.36±18.81,363.16±16.29,325.66±14.58 vs 447.97±16.94;422.30±17.41,385.09±19.11,346.15±14.10;P<0.01或P<0.05).结论:甘露醇可通过清除氧自由基的方式对移植小肠缺血再灌注损伤起到保护作用.

前纵隔病变微创切除手术的治疗进展

胸腔镜手术切除前纵隔病变具有创伤小、出血少、恢复快、并发症少等优点,是一种安全、有效的手术方法。不同入路的腔镜手术各有所长。单侧入路创伤小,但对侧病变区域操作困难;双侧入路清扫范围广泛,但术中需改变手术体位;颈胸双入路对于无名静脉以上组织有一定优势,但创伤相对大;单孔操作创伤小,但手术操作难度大,手术视野局限;三孔操作范围广、创伤小;机器人手术清扫范围大,操作安全精细,但手术治疗费用高。

PBL结合SP教学法提高八年制医学生批判性思维能力的作用分析

批判性思维是一种在充分的理性和客观事实基础上，进行理论评估与客观评价的能力与意愿。简单地将其概括为“为决定信什么或做什么而进行的合理的、反省的思维”。现代医学科学的发展，对医学教育的临床教学方法提出了更高、更新的要求，尤其是对于八年制学生这样的特殊教学对象，要求八年制的教学必须从原来传统教学模式（LBL）中转变过来。从2004年开始，作者所在科室团队长期关注并参与八年制胸外科临床教学，采取以问题为基础的学习（PBL）教学方法，结合标准化病人（SP）教学法，努力提高八年制学员的批判性思维能力，取得了良好的效果。

PBL结合CBT教学法在八年制学员胸外科临床教学中的效果比较分析

临床医学八年制学生经过高考的选拔，具有较扎实的基础知识，较高的外语水平，如何将这样一批高材生培养成合格的高级临床医生，是医科大学高度关注的问题。临床教学是医学生教学中十分重要的一个环节，是医学生观察疾病的临床表现，将课堂理论联系临床实践的重要过程。现代医学科学的发展，对医学教育的临床教学方法提出了更高更新的要求，

NSCLC患者血清中HSP90α的表达及其临床意义

目的:探讨热休克蛋白90α(HSP90α)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中的表达水平及其临床意义。方法:选取2015年10月至2016年10月期间,在第四军医大学唐都医院胸外科确诊为NSCLC的患者100例为肺癌组。选取同期在我院进行体检的健康成年人40例为对照组。检测并比较两组血清HSP90α表达水平差异;比较不同肿瘤分期(TNM分期)患者的血清HSP90α水平差异;探讨不同TNM分期与血清HSP90α表达水平之间的关系。培养NSCLC A549细胞,检测其分泌至胞外的HSP90α蛋白;使用HSP90α抑制剂处理A549细胞,MTT法检测细胞增殖能力的变化。结果:肺癌组与对照组患者血清HSP90α表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.001);不同TNM分期患者血清HSP90α表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.001);Spearman秩相关分析显示,TNM分期与血清HSP90α水平呈正相关(r=0.95,P<0.05)。体外细胞实验证实A549细胞能分泌HSP90α至细胞外,使用HSP90α抑制剂处理后细胞增殖能力明显下降。结论:NSCLC患者血清中HSP90α表达水平较正常人升高,并且与TNM分期呈正相关。血清HSP90α由肺癌细胞分泌入血,检测其水平对肺癌的诊断与治疗有一定的临床参考价值。

α7nAChR激动剂对大鼠移植肺缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨α7n ACh R激动剂对同种异体大鼠左肺移植后缺血再灌注损伤(I/R)的保护作用及其机制。方法采用改良三袖套法技术复制同种异体大鼠左肺移植模型,将雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(A组)、生理盐水处理的I/R组(B组)和α7n ACh R激动剂处理组(C组)。受体移植肺再灌注4 h后阻断右肺门5 min,测量动脉血氧分压(Pa O_2)及动脉血二氧化碳分压(Pa CO_2);测量移植肺肺组织湿/干重量比率(W/D);采用ELISA法测移植肺中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)含量。结果与A组比较,B组Pa O_2下降、Pa CO_2升高,肺组织W/D值升高,TNF-α及IL-6含量升高(P<0.05),差异有统计学意义。与B组比较,C组Pa O_2上升、肺组织W/D下降,TNF-α及IL-6含量降低(P<0.05),差异有统计学意义;Pa CO_2测定结果两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论α7n ACh R激动剂对大鼠肺移植缺血再灌注损伤具有保护作用,能够改善移植肺的功能,其作用机制可能与抗炎作用有关。

大鼠肝癌诱导过程中肝癌干细胞标志及炎症因子的动态变化

背景:近年来已有研究者从肝癌组织和细胞系中发现了CD133、乙醛脱氢酶(ALDH)、CD90、CD44、Epc AM、CD13、OV6、K19、c-kit、ABCG2等多种肝癌干细胞的标志物,其中CD家族的CD133、CD90、CD44等被认为与肝癌的复发和转移密切相关。目的:探讨大鼠肝癌诱导过程中肝癌干细胞标志及炎症因子的动态变化及两者相关性。方法:应用二乙基亚硝胺(DEN)溶液饲养SD大鼠24周诱导大鼠肝癌模型,并设立普通水喂养的健康对照组。结果与结论:免疫组织化学检测显示,模型组肝癌诱导过程中Kupffer细胞相关ED2表达呈现出逐渐增多的情况,与健康对照组比较,模型组ED2在诱癌第12,16,20,24周的表达均显著升(P<0.05)。定量PCR检测显示,肝癌诱导过程中CD90呈逐渐上升趋势(P<0.05),较之健康肝脏组织,肝癌组织中CD90上升更明显(P<0.05);CD133呈现出一定升高趋势,但经单因素方差分析无统计学意义(P>0.05);在诱癌过程中其他肝癌干细胞标志物未出现明显改变(P>0.05)。肝癌诱导过程中,肿瘤坏死因子α、转化生长因子β、MCP-1及白细胞介素6均明显上升(P<0.05),较之健康肝脏组织,肝癌组织中转化生长因子β、MCP-1、白细胞介素6表达显著偏高(P<0.05),其余炎症因子在诱癌过程中则未出现明显改变(P>0.05)。经Pearson相关性分析,MCP-1、转化生长因子β、白细胞介素6与CD90的表达之间呈显著正相关(P<0.05)。表明Kupffer细胞所释放的部分炎症因子与肝癌干细胞标志之间存在一定的相关性,Kupffer细胞可促进肝癌的发生。

青蒿琥酯对大鼠小肠移植急性排斥反应的作用

背景:随着强效、特异免疫抑制剂的问世,小肠移植的成活率有了一定程度的提高。但这些免疫抑制剂的不良反应及昂贵的治疗费用,让很多患者难以承受。所以,选择有免疫抑制作用的中药在临床上应用是很有意义的。青蒿琥酯有免疫抑制作用,可以减轻小肠移植急性排斥反应,提高小肠移植的成功率。目的:观察青蒿琥酯在大鼠小肠移植急性排斥反应中的作用及其机制。方法:选用封闭群SD大鼠和Wistar大鼠建立同种异基因小肠移植模型,随机分为3组:①同基因移植组(SD→SD)。②异基因移植组(Wistar→SD)。③异基因移植+青蒿琥酯治疗组(Wistar→SD+青蒿琥酯60 mg/(kg·d),腹腔注射)。结果与结论:同基因移植组大鼠存活均超过10 d,并于第10天全部处死。异基因移植组大鼠平均存活(6.73±0.58)d,治疗组大鼠平均存活(8.50±0.74)d,两组间比较差异有显著性意义(P<0.01)。病理组织学检查显示同基因移植组标本无明显排斥征象,异基因移植组标本在术后第3,5,7天分别符合轻、中、重度排斥反应,治疗组部分标本有轻度排斥表现,但出现较晚、程度较轻。ELISA法检测显示异基因移植组血清白细胞介素2、γ-干扰素表达水平在术后均显著高于其他2组(P<0.01),治疗组血清白细胞介素2表达水平与同基因移植组比较亦有升高,但差异无显著性意义(P>0.05),治疗组血清γ-干扰素表达水平高于同基因移植组(P<0.05)。结果可见青蒿琥酯对大鼠小肠移植急性排斥反应有抑制作用,其作用机制可能与抑制白细胞介素2、γ-干扰素等细胞因子的分泌表达有关。

TGF-β上调Notch3诱导上皮间质转化在促进肺癌骨转移中的作用

目的:研究TGF-β上调Notch3表达诱导EMT在肺癌骨转移中的作用。方法:免疫荧光、蛋白印记和RT-PCR方法检测Notch3在TGF-β诱导下上皮、间质标记物以及上皮间质转化相关转录因子Twist、Snail和ZEB-1的表达变化;利用慢病毒包装Notch3正义表达载体和ZEB-1 siRNA载体分别上调Notch3和抑制ZEB-1的表达后,采用免疫荧光、蛋白印记方法检测抑制EMT转录因子ZEB-1的表达后,对上皮间质标记物的影响;进而通过体外迁移和侵袭试验观察抑制ZEB-1的表达后对Notch3高表达细胞系的迁移和侵袭能力的影响;最后体外ELISA法检测骨转移相关分子p THr P和IL-6的表达,探讨Notch3通过诱导EMT在促进肺癌骨转移中的作用。结果:Notch3 siRNA抑制其表达后能够逆转TGF-β诱导的上皮标记物和间质标记物的表达变化,这一现象是通过影响EMT转录因子ZEB-1实现的。进而利用慢病毒包装系统,构建了Notch3过表达细胞株和ZEB-1 siRNA细胞株,免疫荧光和蛋白印记试验发现,Notch3过表达载体能够抑制上皮标记物的表达,上调间质标记物的表达,促进EMT的发生,而抑制ZEB-1的表达后能够逆转这一现象。最后,体外侵袭试验和ELISA试验发现,Notch3高表达能够增加肺癌细胞的侵袭能力以及p THr P和IL-6的分泌,而抑制ZEB-1的表达后可明显降低其转移能力以及p THr P和IL-6的分泌。结论:Notch3参与了TGF-β诱导肺癌细胞上皮间质转化过程,并在NSCLC骨转移中发挥作用。

EMT参与人非小细胞肺癌A549细胞多西紫杉醇耐药性的发生

目的:建立耐多西紫杉醇的人非小细胞肺癌细胞株A549/Docetaxel,并初步探索其与上皮间质转化(EMT)的关系。方法:用抗肿瘤药物多西紫杉醇体外以浓度递增和短时反复作用的方法诱导和筛选人非小细胞肺癌A549细胞耐多西紫杉醇的细胞株;用MTT的方法检测细胞耐药指数及生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期,RT-PCR和Western blot检测EMT相关蛋白fibronectin、vimentin和E-cadherin的表达。结果:A549/Docetaxel对多西紫杉醇和紫杉醇的耐药指数分别为8.91和2.82;耐药细胞生长缓慢,倍增时间延长,S期细胞增多,G2期减少。549/Docetaxel与亲本A549细胞相比,上皮细胞标志分子E-cadherin的表达减少,而间质细胞标志分子fibronectin和vimentin的表达增加。结论:成功建立了一株耐多西紫杉醇的细胞株A549/Docetaxel,耐药的发生可能与EMT相关。

肺孤立性纤维瘤合并肾上腺不典型嗜铬细胞瘤1例

患者，女，53岁，因体检发现右肺下叶占位性病变20 d于2014年9月26日入院。患者20 d前体检时X线示右肺下阴影，遂于当地医院进一步行CT检查示：右肺下叶见一巨大混杂密度肿块影，边界清，大小10．3 cm ×10．0 cm，其内可见斑片状钙化影及片状低密度坏死影（图1）；左侧肾上腺区见一类圆形混杂密度影，边界清，大小6．5 cm ×7．8 cm，密度不均匀，内见多发斑片状钙化影及斑片状低密度影（图2），考虑右肺下叶占位性病变为左侧肾上腺转移瘤可能。为求进一步明确诊断及治疗，患者于2014年9月26日来院就诊，在门诊行经皮肺穿刺活检术后病理结果示：右下肺梭形细胞肿瘤，形态及免疫组化结果符合孤立性纤维瘤／血管周细胞瘤。遂以“肺孤立性纤维瘤”收住入院。入院查体生命体征平稳，右肺下叶叩诊呈浊音，肺肝界叩不满音，余肺叩诊呈清音，右肺下叶呼吸音低，余肺呼吸音清，未闻及明显干湿性啰音，心脏查体未见明显异常，腹软，左上腹隐约可触及一光滑包块。入院各项检查结果均未见明显异常，拟行右侧开胸探查及剖腹探查术，右侧胸腔见右肺下叶肿块10．0 cm ×10．0 cm ×7．0 cm，宽基底，带蒂，质韧，包膜完整，与周围组织无粘连，无胸腔积液，无明显外侵播散，完整切除肿块。腹腔探查见左侧肾上腺肿块8．0 cm ×7．0 cm ×6．0 cm，包膜完整，与周围组织无粘连，未见明显外侵扩散；术中挤压肿瘤后患者血压出现明显波动，考虑肾上腺嗜铬细胞瘤，完整切除肿物。术后病理检查结果回报：（胸内）孤立性纤维性肿瘤伴广泛坏死，部分细胞增生活跃且在周围组织中呈侵袭性增长；（左侧肾上腺）嗜铬细胞瘤，局部细胞增生活跃且部分侵及包膜。术后患者恢复良好，随访至今，未见肿瘤复发。

大鼠小肠移植急性排斥反应中血清白细胞介素2及干扰素γ的变化

目的:分析血清白细胞介素2、干扰素γ的水平在大鼠小肠移植急性排斥反应过程中的意义及其评估价值。方法:实验于2005-11/2006-06在解放军第四军医大学西京医院胃肠外科实验室完成。实验方法:小肠移植模型动物选用封闭群SD和Wistar大鼠42只,按随机数字表法分为3组:①对照组(n=6):SD大鼠仅作腹部开关及左肾切除术。②同基因移植组(n=18):供受体均为SD大鼠。③异基因移植组(n=18):供体为Wistar大鼠,受体为SD大鼠。同基因移植组和异基因移植组分别于术后3,5,7天处死大鼠取移植肠段行病理组织学检查,每次6只;同时取血清应用ELISA法检测血清白细胞介素2、干扰素γ水平,对照组大鼠于术后第3天取血清检测。实验评估:排斥程度评估标准分为轻、中、重3度:①轻度:肠黏膜绒毛数目减少,轻度增粗,变短,少量淋巴细胞和粒细胞浸润,少量凋亡上皮细胞。②中度:肠黏膜绒毛明显变矮增宽,黏膜上皮开始脱落,细胞浸润加重,上皮细胞凋亡数目明显增多。③重度:肠绒毛结构消失,上皮脱落,间质大量炎细胞浸润,肌层结构破坏,血管炎。结果:42只大鼠均进入结果分析,无脱失。①异基因移植组大鼠术后第3,5,7天的病理组织学检测结果分别符合轻、中、重度排斥反应,对照组和同基因移植组无明显排斥征象。②异基因移植组大鼠血清白细胞介素2、干扰素γ的表达水平在术后第3,5,7天均显著高于其他2组(P<0.01),白细胞介素2水平升高以第3天明显,第5天达到高峰,第7天即有所下降;干扰素γ水平升高较为缓慢,第7天明显升高。同基因移植组大鼠血清白细胞介素2、干扰素γ水平也高于对照组,但差异无显著性意义(P>0.05)。结论:白细胞介素2、干扰素γ在大鼠小肠移植急性排斥反应过程中发挥重要作用,血清白细胞介素2、干扰素γ水平监测可作为预测及早期诊断大鼠小肠移植急性排斥反应的重要指标。

Shugoshin1对非小细胞肺癌H1299细胞增殖的影响

目的:探讨Shugoshin1(Sgo1)对于非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞株H1299增殖的影响。方法:用Western blot及RT-PCR检测Sgo1在NSCLC细胞株H1299中的表达。成功构建Sgo1siRNA质粒,经慢病毒包装转染H1299细胞,利用Western blot及RT-PCR鉴定转染效力。用单层细胞生长实验和平板克隆形成实验观察Sgo1对H1299细胞株增殖及克隆形成能力的影响。结果:在NSCLC细胞株H1299中,Sgo1表达明显高于人成纤维细胞株。下调Sgo1的表达后,H1299细胞株的增殖能力和克隆形成能力均明显减低。结论:Sgo1的表达与NSCLC细胞株H1299的增殖密切相关,有可能成为肺癌治疗的一个新靶点。

高血压发生脑出血的综合康复护理干预对生活质量影响

目的:探讨高血压患者发生脑出血的综合康复护理干预对生活质量影响。方法:随机抽取搜集2010年6月至2013年1月来我院神经外科就诊并诊断为高血压脑出血(HICH)患者95名的临床护理资料记录,随机分为两组。对照组45名患者采用常规治疗和护理,观察组50名患者除常规治疗和护理外还接受综合康复护理。观察两组HICH患者病情转归情况。统计两组的总治愈率及改善情况,对比得出何种护理方法更加有效并且预后更好。结果:通过比较发现,综合护理组的总治愈率达88.0%,而常规护理组的总治愈率仅64.4%,且前者症状改善的情况明显优于后者。P<0.05,差异具有统计学意义。结论:综合康复护理手段在HICH治疗转归方面,比传统的常规护理手段对患者更加有利。

乙苯生产中的催化反应技术

主要介绍了苯烷基化反应热力学和催化反应机理以及国内外各种苯烷基化催化剂的发展。简单介绍了与此相关的工艺，比较了几种工艺之间的特点。同时介绍了催化蒸馏反应器在苯烷基化工艺中的应用。

热交换器的螺旋压缩弹簧在线自动除垢扰流新技术

螺旋压缩弹簧将线自动除垢扰流新技术是在标准管式热交换器的换热管内插外套若干节螺旋压缩弹簧，使换热器在换热流体作用下具有在线自动除垢防垢、扰流强化传热、自洁高效等优异特性。